ЛЕЧЕНИЕ НЕВРОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЗИЛУКОПЛАНОМ Российский патент 2025 года по МПК A61M3/00 A61K39/395 A61P21/04 

Перекрестная ссылка на родственные заявки

Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительной заявки США № 62/748659, поданной 22 октября 2018 года, озаглавленной ЛЕЧЕНИЕ НЕВРОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ИНГИБИТОРАМИ КОМПЛЕМЕНТА, предварительной заявки США № 62/777524, поданной 10 декабря 2018 года, озаглавленной ЛЕЧЕНИЕ НЕВРОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ИНГИБИТОРАМИ КОМПЛЕМЕНТА, предварительной заявки США № 62/815575, поданной 8 марта 2019 года, озаглавленной МОДУЛЯТОРЫ АКТИВНОСТИ КОМПЛЕМЕНТА, предварительной заявки США № 62/837974, поданной 24 апреля 2019 года, озаглавленной МОДУЛЯТОРЫ АКТИВНОСТИ КОМПЛЕМЕНТА, предварительной заявки США № 62/844388, поданной 7 мая 2019 года, озаглавленной ЛЕЧЕНИЕ НЕВРОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ИНГИБИТОРАМИ КОМПЛЕМЕНТА, и предварительной заявки США № 62/899864, поданной 13 сентября 2019 года, озаглавленной ЛЕЧЕНИЕ НЕВРОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ИНГИБИТОРАМИ КОМПЛЕМЕНТА, содержание каждой из которых включено в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте.

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

Настоящая заявка содержит Перечень последовательностей, который был представлен в электронном виде в ASCII формате и включен в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте. Указанная ASCII копия, созданная 22 октября 2019 года, имеет название 2011_1035PCT_SL.txt и размер 1286 байт.

Предпосылки создания изобретения

Иммунный ответ позвоночных состоит из компонентов адаптивного и врожденного иммунитета. В то время как адаптивный иммунный ответ является избирательным в отношении определенных патогенов и медленно реагирует, компоненты врожденного иммунного ответа распознают широкий спектр патогенов и быстро реагируют на инфекцию. Одним из таких компонентов врожденного иммунного ответа является система комплемента.

Система комплемента включает около 20 циркулирующих белков-компонентов комплемента, синтезируемых преимущественно печенью. Компоненты этого конкретного иммунного ответа были сначала названы “комплементом”, поскольку, согласно наблюдениям, они дополняют ответ антител, направленный на уничтожение бактерий. Эти белки остаются в неактивной форме до активации в ответ на инфекцию. Активация происходит посредством пути протеолитического расщепления, инициируемого распознаванием патогена и ведущего к его разрушению. В системе комплемента известны три таких пути, которые называются классическим путем, лектиновым путем и альтернативным путем. Классический путь активируется, когда молекула IgG или IgM связывается с поверхностью патогена. Лектиновый путь инициируется маннан-связывающим лектиновым белком, распознающим остатки сахаров в стенке бактериальной клетки. Альтернативный путь остается активным при низких уровнях в отсутствие каких-либо специфических стимулов. Хотя все три пути различаются в том, что касается инициирующих событий, все три пути сходятся в том, что касается расщепления компонента комплемента C3. C3 расщепляется на два продукта, названные C3a и C3b. Из них C3b становится ковалентно связанным с поверхностью патогена, в то время как C3a действует как распространяемый сигнал для промотирования воспаления и рекрутинга циркулирующих иммунных клеток. Связанный с поверхностью C3b образует комплекс с другими компонентами для инициации каскада реакций между более поздними компонентами системы комплемента. Из-за необходимости поверхностного прикрепления активность комплемента остается локализованной и сводит к минимуму разрушение нецелевых клеток.

Связанный с патогеном C3b способствует уничтожению патогена двумя способами. В одном из путей C3b распознается непосредственно фагоцитарными клетками и приводит к поглощению патогена. Во втором пути связанный с патогеном C3b инициирует образование мембраноатакующего комплекса (MAC). На первом этапе C3b образует комплексы с другими компонентами комплемента с образованием комплекса C5-конвертаза. В зависимости от исходного пути активации комплемента компоненты этого комплекса могут различаться. C5-конвертаза, образованная в результате классического пути комплемента, включает C4b и C2a в дополнение к C3b. При образовании альтернативным путем C5-конвертаза включает две субъединицы C3b, а также один компонент Bb.

Компонент комплемента C5 расщепляется любым комплексом C5-конвертаза на C5a и C5b. C5a, как и C3a, диффундирует в кровоток и промотирует воспаление, действуя как хемоаттрактант для воспалительных клеток. C5b остается прикрепленным к клеточной поверхности, где он запускает образование MAC через взаимодействие с C6, C7, C8 и C9. MAC представляет собой гидрофильную пору, которая охватывает мембрану и способствует свободному потоку жидкости в клетку и из клетки, тем самым разрушая ее.

Важным компонентом всей иммунной активности является способность иммунной системы разграничивать собственные и чужие клетки. Патология возникает, когда иммунная система не может осуществлять такое разграничение. В случае системы комплемента клетки позвоночных экспрессируют белки, которые защищают их от эффектов каскада комплемента. Это гарантирует, что мишени системы комплемента ограничиваются патогенными клетками. Многие комплемент-связанные расстройства и заболевания ассоциируются с аномальным разрушением собственных клеток каскадом комплемента. Некоторые комплемент-связанные расстройства и заболевания включают неврологические заболевания и расстройства, такие как тяжелая миастения.

Тяжелая миастения (MG) представляет собой редкое комплемент-опосредованное аутоиммунное заболевание, характеризующееся продукцией аутоантител, нацеленных на белки, которые имеют решающее значение для нормальной передачи электрических сигналов от нервов к мышцам. Распространенность MG в США оценивается примерно в 60000 случаев. Примерно у 15% пациентов с MG симптомы ограничиваются глазными мышцами. У остальных пациентов MG поражает несколько групп мышц по всему телу, что обычно называют генерализованной MG (gMG). У пациентов с gMG наблюдается мышечная слабость, которая обычно усиливается при повторном использовании и восстанавливается при отдыхе. Мышечная слабость может быть локализована в определенных мышцах, но часто прогрессирует до более диффузной мышечной слабости. Симптомы генерализованной тяжелой миастении могут стать опасными для жизни, когда мышечная слабость затрагивает диафрагму и межреберные мышцы грудной стенки, которые отвечают за дыхание. Наиболее опасное осложнение gMG, известное как миастенический криз, требует госпитализации, интубации и искусственной вентиляции легких. Приблизительно от 15% до 20% пациентов с gMG испытывают миастенический криз в течение 2 лет после постановки диагноза.

Остается потребность в композициях и способах лечения комплемент-связанных заболеваний и расстройств, в том числе поражающих нервную систему, таких как тяжелая миастения. Настоящее изобретение удовлетворяет эту потребность путем обеспечения соответствующих композиций и способов.

Сущность изобретения

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ лечения комплемент-связанных показаний, и/или аутоиммунный показаний, и/или неврологических расстройств, раскрытых в настоящей заявке, например тяжелой миастении (MG), при этом способ, включает введение субъекту соединения или композиции, включающей соединение, которое модулирует активность комплемента. Такое соединение может представлять собой ингибитор, который блокирует активацию комплемента (ингибитор комплемента), например ингибитор C5, например полипептид, являющийся ингибитором C5, который описан в настоящей заявке. Соединение может представлять собой зилукоплан или его активные метаболиты или варианты, раскрытые в настоящей заявке, и показание или расстройство может представлять собой MG, как определено ниже. В настоящем изобретении MG может включать или представлять собой генерализованную MG (gMG). Введение соединения (например, зилукоплана) может включать подкожное (п/к) введение. Соединение (например, зилукоплан) можно вводить при дозе от около 0,1 мг/кг (мг соединения/кг массы тела субъекта) до около 0,6 мг/кг. Введение соединения может включать самостоятельное введение. Введение соединения может включать использование предварительно заполненного шприца. Шприц может включать иглу 29 размера. Введение соединения может включать самостоятельное введение с использованием устройства для самостоятельного введения. Устройство для самостоятельного введения может включать предварительно заполненный шприц. Предварительно заполненный шприц может включать стеклянный шприц. Необязательно, предварительно заполненный шприц представляет собой стеклянный шприц. Предварительно заполненный шприц может включать максимальный объем наполнения по меньшей мере 1 мл. Устройство для самостоятельного введения может включать раствор соединения. Раствор может представлять собой водный раствор. Раствор может не содержать консервантов. Устройство для самостоятельного введения может включать объем раствора от около 0,15 мл до около 0,81 мл. Субъект может пройти скрининг перед введением соединения (например, зилукоплана). Скрининг может включать оценку по шкале Quantitative Myastenia Gravis (QMG). QMG оценка cубъекта может быть ≥ 12. Субъекту может быть запрещено получать MG терапию в течение по меньшей мере 10 часов перед определением QMG оценки. MG терапия может представлять собой терапию ингибитором ацетилхолинэстеразы. Скрининг может потребовать, чтобы ≥ 4 QMG исследуемых параметров достигали оценки ≥ 2. Возраст субъекта может быть от 18 до 85 лет. Скрининг может включать отбор субъектов, у которых ранее была диагностирована gMG. Диагноз gMG может быть поставлен в соответствии с критериями Myasthenia Gravis Foundation of America (MGFA). Скрининг может включать определение уровней аутоантител к рецептору ацетилхолинэстеразы (AChR). Скрининг может включать подтверждение, что не было никаких изменений дозы кортикостероида, принимаемого субъектом, в течение по меньшей мере 30 дней перед скринингом. Скрининг может включать подтверждение, что не было никаких изменений в иммуносупрессорной терапии субъекта в течение по меньшей мере 30 дней перед скринингом. Скрининг может включать серологический тест на беременность и/или тест мочи на беременность. Введение соединения может включать ежедневное введение. Субъект может одновременно получать стандартное лечение gMG. Стандартное лечение gMG может включать одно или несколько из лечения пиридостигмином, лечения кортикостероидом и лечения иммуносупрессорным лекарственным средством. Можно осуществить оценку или мониторинг субъекта на характеристику MG, где характеристика MG включает одну или более из QMG оценки, оценки по шкале Тяжелая Миастения-Повседневная Активность (MG-ADL), MG-QOL15r оценки и суммарной оценки MG. Оценка или мониторинг субъекта может включать определение изменения в характеристике MG во время или после лечения субъекта соединением, описанным в настоящей заявке (например: зилукопланом). Характеристика MG может включать снижение QMG оценки. QMG оценка у получающего лечение cубъекта может снижаться по меньшей мере на 3 балла. QMG оценка у получающего лечение cубъекта может снижаться через 12 недель лечения или раньше. QMG оценку у получающего лечение cубъекта можно отслеживать на протяжении всего курса лечения. Субъект может получать лечение ингибитором холинэстеразы на протяжении всего курса лечения. Лечение ингибитором холинэстеразы можно отложить на по меньшей мере 10 часов перед определением QMG оценки у получающего лечение субъекта. Изменение характеристики MG может включать изменение суммарной оценки MG на по меньшей мере 3 балла от исходной суммарной оценки MG. Изменение суммарной оценки MG от исходной суммарной оценки MG может произойти через 12 недель лечения или раньше. Изменение характеристики MG может включать изменение MG-ADL оценки на по меньшей мере 2 балла от исходной MG-ADL оценки. Изменение MG-ADL оценки от исходной MG-ADL оценки может произойти через 12 недель лечения или раньше. Соединение может быть в растворе, где раствор включает фосфатно-солевой буферный раствор (PBS). Раствор может включать от около 4 мг/мл до около 200 мг/мл соединения (например: зилукоплана). Раствор может включать около 40 мг/мл соединения (например, зилукоплана). Уровни соединения в плазме субъекта могут достигать максимальной концентрации (C_max) в первый день лечения. По меньшей мере 90% ингибирование гемолиза может достигаться в сыворотке субъекта, при этом, необязательно, ингибирование гемолиза измеряют с использованием реакции гемолиза с бараньими эритроцитами (sRBC). Соединение (например, зилукоплан) можно вводить при суточной дозе от около 0,1 мг/кг до около 0,3 мг/кг. Зилукоплан можно вводить при дозе 0,3 мг/кг. QMG оценка и/или MG-ADL оценка у субъекта может снижаться. QMG оценка может снижаться на ≥ 3 балла через 8 недель лечения. MG-ADL оценка может снижаться на ≥ 2 балла через 8 недель лечения. Риск необходимости вспомогательной резервной терапии может снижаться. Введение можно осуществлять на стадии MG заболевания, которая возникает перед критической или кризисной стадией MG. Введение соединения (например, зилукоплана) может привести к уменьшению проявления симптомов у субъекта. Уменьшение проявления симптомов у субъекта может превышать уменьшение проявления симптомов у субъекта, связанное с введением экулизумаба. Может ингибироваться образование пор мембраноатакующего комплекса (MAC) в области нейромышечного соединения (NMJ) у субъекта. Фактор безопасности на NMJ может повышаться. Зилукоплан можно вводить в комбинации с терапевтическим средством. Терапевтическое средство может включать иммуносупрессорное средство. Иммуносупрессорное средство может включать соединение, выбранное из одного или нескольких из азатиоприна, циклоспорина, циклоспорина A, микофенолята мофетила, метотрексата, такролимуса, циклофосфамида и ритуксимаба. Терапевтическое средство может включать ингибитор аутоантитело-опосредованного разрушения ткани. Ингибитор аутоантитело-опосредованного разрушения ткани может включать ингибитор неонатального Fc-рецептора (FcRN). Введение ингибитора FcRN может включать внутривенное введение иммуноглобулина (IVIG). Зилукоплан и терапевтическое средство можно вводить в перекрывающихся режимах.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает набор, который может включать шприц, который включает соединение (например, зилукоплан) и инструкции по применению. Шприц может включать устройство для самостоятельного введения инъекции. Устройство для самостоятельного введения инъекции может включать устройство BD ULTRASAFE PLUS™ для самостоятельного введения. Набор может включать салфетку, смоченную спиртом. Набор может включать повязку на рану. Набор может включать контейнер для использованных предметов. Соединение может быть в растворе. Раствор может представлять собой водный раствор. Раствор может включать фосфатно-солевой буферный раствор. Раствор может включать от около 4 мг/мл до около 200 мг/мл соединения (например, зилукоплана). Раствор может включать около 40 мг/мл соединения (например, зилукоплана). Раствор может включать консервант.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, настоящее изобретение обеспечивает способ оценки лечения для комплемент-связанных показаний, и/или аутоиммунных показаний, и/или неврологических расстройств, раскрытых в настоящей заявке, например для MG. Способ может включать скрининг для оценки кандидата на по меньшей мере один критерий участия в оценке; выбор участника оценки; введение лечения для показания или расстройства (например, MG) участнику оценки; и оценку по меньшей мере одной конечной точки эффективности, где, необязательно, лечение включает введение соединения (например, зилукоплана) или композиции, раскрытой в настоящей заявке. По меньшей мере один критерий участия в оценке может включать диагноз MG. Диагноз MG может включать диагноз gMG. Диагноз MG может означать диагноз gMG. Диагноз gMG может быть поставлен в соответствии с MGFA критериями. По меньшей мере один критерий участия в оценке может включать QMG оценку. Выбор участника оценки может потребовать, чтобы QMG оценка у кандидата была ≥ 12. Кандидат для оценки мог получать до скрининга по меньшей мере одно альтернативное лечение MG. Кандидата для оценки можно оценить по шкале QMG по меньшей мере через 10 часов после получения по меньшей мере одного альтернативного лечения MG. По меньшей мере одно альтернативное лечение MG может включать введение ингибитора ацетилхолинэстеразы. Выбор участника оценки может потребоввать оценки ≥ 2 для ≥ 4 QMG исследуемых параметров. По меньшей мере один критерий участия в оценке может включать оценку возраста кандидата. Выбор участника оценки может потребоввать, чтобы возраст кандидата был от 18 до 85 лет. По меньшей мере один критерий участия в оценке может включать уровень аутоантитела к AChR и/или уровень аутоантитела к мышечно-специфической киназе. По меньшей мере один критерий участия в оценке может включать отсутствие изменения дозы кортикостероида, принимаемого кандидатом для оценки в течение по меньшей мере 30 дней перед скринингом. По меньшей мере один критерий участия в оценке может включать отсутствие изменений иммуносупрессорной терапиии у кандидата для оценки в течение по меньшей мере 30 дней перед скринингом. По меньшей мере один критерий участия в оценке может включать подтверждение, что кандидат для оценки не беременна. Скрининг может включать серологический тест на беременность и/или тест мочи на беременность. Лечение для MG можно вводить в течение периода оценки. Период оценки может составлять от около 1 дня до около 12 недель. Период оценки может составлять около 12 недель или больше. Участник оценки может получать стандартное лечение gMG в течение периода оценки. Стандартное лечение gMG может включать одно или несколько из лечения пиридостигмином, лечения кортикостероидом и лечения иммуносупрессорным лекарственным средством. По меньшей мере одна конечная точка эффективности может включать снижение QMG оценки у получающего лечение субъекта. Снижение QMG оценки у получающего лечение субъекта может быть по меньшей мере на 3 балла. Участник оценки может получать лечение ингибитором холинэстеразы в течение периода оценки. Лечение ингибитором холинэстеразы можно отложить на по меньшей мере 10 часов перед определением QMG оценки у получающего лечение субъекта. По меньшей мере одна конечная точка эффективности может включать изменение исходной оценки для одной или нескольких из MG-ADL оценки, MG-QOL15r оценки и суммарной оценки MG. По меньшей мере одна конечная точка эффективности может включать изменение исходной суммарной оценки MG по меньшей мере на 3 балла. Изменение исходной суммарной оценки MG может произойти через 12 недель лечения или раньше. По меньшей мере одна конечная точка эффективности может включать изменение исходной MG-ADL оценки по меньшей мере на 2 балла. Изменение исходной MG-ADL оценки может произойти через 12 недель лечения MG или раньше. Оценка по меньшей мере одной конечной точки эффективности может включать ряд оценок. Ряд оценок можно осуществлять в следующем порядке: (1) определение для участника оценки балла по шкале MG-QOL15r; (2) определение для участника оценки балла по шкале MG-ADL; (3) определение для участника оценки балла по шкале QMG; и (4) определение суммарной оценки MG для участника оценки. Ряд оценок можно осуществлять один или несколько раз после введения лечения MG. Один или несколько раз после введения лечения MG может включать 1 неделю, 2 недели, 4 недели, 8 недель и/или 12 недель после введения лечения MG.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает устройство для введения, полученное для лечения комплемент-связанного показания и/или неврологического расстройства, раскрытого в настоящей заявке, такого как MG. Устройство для введения может включать устройство для самостоятельного введения инъекции, включающее шприц и иглу. Устройство для введения может включать предварительно определенный объем фармацевтической композиции. Фармацевтическая композиция может включать 40 мг/мл концентрацию соединения, раскрытого в настоящей заявке (например, зилукоплана) в водном растворе. Предварительно определенный объем можно модифицировать для облегчения введения соединения (например, зилукоплана) субъекту при дозе 0,3 мг на кг массы тела субъекта. Устройство для введения может включать устройство BD ULTRASAFE PLUS™ для самостоятельного введения.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает набор, полученный для лечения MG. Набор может включать набор из двух или более устройств для введения, описанных в настоящей заявке, и инструкции по применению набора. Набор может включать салфетку, смоченную спиртом. Набор может включать повязку на рану. Набор может включать контейнер для использованных предметов. Содержащиеся в наборе устройства для введения могут включать фармацевтические композиции соединения (например, зилукоплана), которые не содержат консервантов. Набор можно получить для хранения при комнатной температуре.

Краткое описание чертежей

Указанные выше и другие цели, признаки и преимущества будут очевидны из последующего описания конкретных вариантов осуществления изобретения, как проиллюстрировано на прилагаемых чертежах. На чертежах не обязательно соблюдается масштаб; вместо этого акцент делается на иллюстрацию принципов различных раскрытых вариантов осуществления.

Фиг. 1 схематически показывает перекрытие между классическим и альтернативным путем комплемента.

Фиг. 2 схематически показывает план исследования лечения тяжелой миастении.

Фиг. 3 представляет график, показывающий количественное изменение оценки тяжелой миастении (QMG) от исходного уровня в течение двенадцати недель введения плацебо по сравнению с 0,3 мг/кг зилукоплана.

Фиг. 4 представляет график, показывающий изменение оценки по шкале Тяжелая Миастения-Повседневная Активность (MG-ADL) от исходного уровня в течение двенадцати недель введения плацебо по сравнению с 0,3 мг/кг зилукоплана.

Фиг. 5 представляет график, показывающий изменение QMG оценки от исходного уровня в течение двенадцати недель введения плацебо по сравнению с 0,1 мг/кг зилукоплана.

Фиг. 6 представляет график, показывающий изменение MG-ADL оценки от исходного уровня в течение двенадцати недель введения плацебо по сравнению с 0,1 мг/кг зилукоплана.

Фиг. 7 представляет график, показывающий изменение MG-ADL оценки от исходного уровня в течение двенадцати недель введения плацебо по сравнению с изменениями комбинированной средней оценки при введении 0,1 мг/кг и 0,3 мг/кг доз зилукоплана.

Фиг. 8 представляет график, показывающий улучшение оценки в баллах по шкале QMG, представляя процент пациентов для 0,3 мг/кг зилукоплана по сравнению с плацебо.

Фиг. 9 представляет график, показывающий улучшение оценки в баллах по шкале в MG-ADL, представляя процент пациентов для 0,3 мг/кг зилукоплана по сравнению с плацебо.

Фиг. 10 представляет график, показывающий процент пациентов, достигающих минимального проявления симптомов через определенные промежутки времени лечения, на основании MG-ADL анализа при лечении зилукопланом по сравнению с экулизумабом.

Фиг. 11 представляет график, показывающий концентрации зилукоплана в образцах, полученных от пациентов в процессе лечения зилукопланом или плацебо.

Фиг. 12 представляет график, показывающий процент гемолиза, определенный в анализе гемолиза образцов, полученных от пациентов в процессе лечения зилукопланом или плацебо.

Фиг. 13 представляет график, показывающий значения гемолиза в зависимости от концентрации зилукоплана, где все значения связаны с образцами от пациентов, получавших плацебо или зилукоплан.

Фиг. 14 представляет график, показывающий изменение QMG оценки от исходного значения, определенного до начала лечения, в процессе 12-недельного лечения плацебо или в процессе 24-недельного лечения зилукопланом (0,1 мг/кг или 0,3 мг/кг доза). Изменение QMG оценки также показано для субъектов, получающих лечение зилукопланом (0,3 мг/кг) с недели 12 по 24 после переключения с лечения плацебо, где оценку после 12-недельного лечения плацебо используют в качестве исходного уровня для определения изменения оценки.

Фиг. 15 представляет график, показывающий изменение MG-ADL оценки от исходного значения, определенного до начала лечения, в процессе 12-недельного лечения плацебо или в процессе 24-недельного лечения зилукопланом (0,1 мг/кг или 0,3 мг/кг доза). Изменение MG-ADL оценки также показано для субъектов, получающих лечение зилукопланом (0,3 мг/кг) с недели 12 по 24 после переключения с лечения плацебо, где оценку после 12-недельного лечения плацебо используют в качестве исходного уровня для определения изменения оценки.

Фиг. 16 представляет график, показывающий изменение суммарной оценки MG от исходного значения, определенного до начала лечения, в процессе 12-недельного лечения плацебо или в процессе 24-недельного лечения зилукопланом (0,1 мг/кг или 0,3 мг/кг доза). Изменение суммарной оценки MG также показано для субъектов, получающих лечение зилукопланом (0,3 мг/кг) с недели 12 по 24 после переключения с лечения плацебо, где оценку после 12-недельного лечения плацебо используют в качестве исходного уровня для определения изменения оценки.

Фиг. 17 представляет график, показывающий изменение MG-QOL15r оценки от исходного значения, определенного до начала лечения, в процессе 12-недельного лечения плацебо или в процессе 24-недельного лечения зилукопланом (0,1 мг/кг или 0,3 мг/кг доза). Изменение MG-QOL15r оценки также показано для субъектов, получающих лечение зилукопланом (0,3 мг/кг) с недели 12 по 24 после переключения с лечения плацебо, где оценку после 12-недельного лечения плацебо используют в качестве исходного уровня для определения изменения оценки.

Фиг. 18 представляет график, показывающий процент каждого испытываемого соединения, попадающий из верхнего отсека в нижний отсек в анализе проникновения in-vitro с использованием модели базальной мембраны.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к лечению неврологических расстройств путем ингибирования активности комплемента. Активность комплемента защищает организм от чужеродных патогенов, но может приводить к саморазрушению клеток при повышенной активности или плохой регуляции. Тяжелая миастения представляет собой неврологическое расстройство, характеризующееся аутоантитело-опосредованным разрушением нервной системы. Настоящая заявка включает способы лечения тяжелой миастении путем введения ингибиторов комплемента. Также включены способы для испытания новых лечений MG. Эти и другие варианты осуществления изобретения подробно описаны ниже.

I. Соединения и композиции

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает соединения и композиции, включающие указанные соединения, действие которых направлено на модуляцию активности комплемента. Такие соединения и композиции могут включать ингибиторы, которые блокируют активацию комплемента. В контексте настоящей заявки “активность комплемента” включает активацию каскада комплемента, образование продуктов расщепления из компонента комплемента, такого как C3 или C5, сборку нисходящих комплексов после события расщепления или любого процесса или события, сопровождающего или являющегося результатом расщепления компонента комплемента, например C3 или C5. Ингибиторы комплемента могут включать ингибиторы C5, которые блокируют активацию комплемента на уровне компонента комплемента C5. Ингибиторы C5 могут связываться с C5 и препятствовать его расщеплению C5-конвертазой на продукты расщепления C5a и C5b. В контексте настоящей заявки “компонент комплемента C5” или “C5” определен как комплекс, который расщепляется C5-конвертазой на по меньшей мере продукты расщепления C5a и C5b. “Ингибиторы C5”, указанные в настоящей заявке, включают любое соединение или композицию, которые ингибируют процессинг или расщепление комплекса предварительно расщепленного компонента комплемента C5 или продуктов расщепления компонента комплемента C5.

Должно быть понятно, что ингибирование расщепления C5 препятствует сборке и активности цитолитического мембраноатакующего комплекса (MAC) на гликозилфосфатидилинозитол (GPI)-связанный белок-дефицитных эритроцитах. В некоторых случаях ингибиторы C5, представленные в настоящей заявке, также могут связываться с C5b, предотвращая связывание C6 и последующую сборку C5b-9 MAC.

Соединения-ингибиторы C5 могут включать, но не ограничиваются этим, любое из представленных в Таблице 1. Перечисленные ссылочные документы и информация, подтверждающая перечисленные номера клинических исследований, включены в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте.

Таблица 1
Ингибиторы C5 Соединение Компания Мишень Тип соединения Номера клинических исследований Ссылочные документы Экулизумаб (SOLIRIS®) Alexion Pharmaceuticals, Inc. C5 Моноклональное антитело, направленное против белка C5. Ингибирует расщепление C5. NCT01303952; NCT02093533; NCT01567085; NCT01919346; NCT01895127; NCT01399593; NCT02145182; NCT01106027; NCT02301624; NCT01997229; NCT01892345 Патент США № 6355245 ALXN1210 Alexion Pharmaceuticals, Inc. C5 Антитело NCT02598583; NCT02605993; NCT02946463; NCT03056040; NCT02949128 US 2016/0168237 Тезидолумаб/LFG316 Novartis C5 Антитело NCT02878616; NCT02763644; NCT01527500; NCT02515942; NCT02534909; NCT01526889 US 8241628; US 8883158 ALN-CC5 Alnylam C5 Нуклеиновая кислота NCT02352493 Зимура Ophthotech C5 Нуклеиновая кислота NCT02397954; NCT02686658 Коверсин Akari C5 Белок NCT02591862 ALXN1007 Alexion C5a Антитело NCT02245412; NCT02128269 IFX-1 InflaRx C5a Антитело NCT02246595; NCT02866825; NCT03001622 MUBODINA® Adienne Pharma C5 Антитело US 7999081 ALXN5500 Alexion Pharmaceuticals, Inc. C5 Антитело ISU305 ISU ABXIS C5 Антитело Коверсин пролонгированного действия Akari C5 Белок SOBI005 Swedish Orphan Biovitrum Ab C5 Белок IFX-2, IFX-3 InflaRx C5a Антитело NOX-D21 Noxxon C5a Шпигельмер rEV576 Volution Immunopharmaceuticals C5 Антитело Penabad et al., Lupus, 2014 23(12):1324-6 ARC1005 Novo Nordisk C5 Антитело SOMAmers SomaLogic C5 Антитело

Соединения на основе пептидов

В некоторых вариантах осуществления ингибиторы C5 по настоящему изобретению представляют собой полипептиды. В соответствии с настоящим изобретением любая молекула на основе аминокислот (природных или неприродных) может называться “полипептид”, и этот термин охватывает “пептиды”, “пептидомиметики” и “белки.” “Пептиды”, как традиционно считается, имеют размер в диапазоне от около 4 до около 50 аминокислот. Полипептиды больше чем около 50 аминокислот обычно называют “белками”.

Полипептидные ингибиторы C5 могут быть линейными или циклическими. Циклические полипептиды включают любые полипептиды, которые имеют как часть их структуры одну или несколько циклических характеристик, таких как петля и/или внутренняя связь. В некоторых вариантах осуществления циклические полипептиды образуются, когда молекула действует как мостиковая группа для связывания двух или более областей полипептида. В контексте настоящей заявки термин “мостиковая группа” относится к одному или нескольким компонентам мостика, образованного между двумя смежными или несмежными аминокислотами, неприродными аминокислотами или не аминокислотами в полипептиде. Мостиковые группы могут иметь любой размер или композицию. В некоторых вариантах осуществления мостиковые группы могут включать одну или несколько химических связей между двумя смежными или несмежными аминокислотами, неприродными аминокислотами, не аминокислотными остатками или их комбинациями. В некоторых вариантах осуществления такие химические связи могут быть между одной или несколькими функциональными группами на смежных или несмежных аминокислотах, неприродных аминокислотах, не аминокислотных остатках или их комбинациях. Мостиковые группы могут включать одну или более из амидной связи (лактам), дисульфидной связи, тиоэфирной связи, ароматического кольца, триазольного кольца и углеводородной цепи. В некоторых вариантах осуществления мостиковые группы включают амидную связь между аминовой функциональной группой и карбоксилатной функциональной группой, каждая из которой присутствует в боковой цепи аминокислотного, неприродного аминокислотного или не аминокислотного остатка. В некоторых вариантах осуществления аминовая или карбоксилатная функциональная группа является частью неаминокислотного остатка или неприродного аминокислотного остатка.

Полипептидные ингибиторы C5 могут быть циклизованы через карбокси конец, амино конец или через любую другую удобную точку присоединения, такую как, например, через атом серы цистеина (например, посредством образования дисульфидной связи между двумя цистеиновыми остатками в последовательности) или любую боковую цепь аминокислотного остатка. Другие связи, образующие циклические петли, могут включать, но не ограничиваются этим, малеимидные связи, амидные связи, сложноэфирные связи, эфирные связи, тиолэфирные связи, гидразоновые связи, или ацетамидные связи.

В некоторых вариантах осуществления пептиды могут быть синтезированы на твердых носителях (например, амидной смоле Ринка) посредством твердофазного пептидного синтеза (SPPS). SPPS методы известны в данной области, и их можно осуществлять с использованием ортогональных защитных групп. В некоторых вариантах осуществления пептиды по настоящему изобретению могут быть синтезированы методом SPPS с использованием Fmoc химии и/или Boc химии. Синтезированные пептиды можно отщеплять от твердых носителей стандартными методами.

Пептиды можно очищать хроматографией [например, эксклюзионной хроматографией (SEC) и/или высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ)]. ВЭЖХ может включать обращенно-фазовую ВЭЖХ (ОФ-ВЭЖХ). Пептиды можно подвергнуть лиофилизации после очистки. Очищенные пептиды можно получить в виде чистого пептида или в виде пептидной соли. Остаточные соли, составляющие соли пептидов, могут включать, но не ограничиваются этим, соль трифторуксусной кислоты (TFA), ацетат и/или гидрохлорид. В некоторых вариантах осуществления пептиды по настоящему изобретению получают в виде пептидных солей. Пептидные соли могут быть пептидными солями с TFA. Остаточные соли можно удалить из очищенных пептидов известными способами (например, с использованием колонок для обессоливания).

В некоторых вариантах осуществления циклические полипептидные ингибиторы C5 по настоящему изобретению получают с использованием лактамного фрагмента. Такие циклические полипептиды могут быть образованы, например, путем синтеза на твердом носителе, таком как смола Ванга, с использованием стандартной Fmoc химии. В некоторых случаях Fmoc-ASP (аллил)-OH и Fmoc-LYS (alloc)-OH включают в полипептиды, чтобы они служили в качестве мономеров-предшественников для образования лактамного мостика.

Полипептидные ингибиторы C5 по настоящему изобретению могут представлять собой пептидомиметики. “Пептидомиметик” или “полипептидный миметик” представляет собой полипептид, молекула которого содержит структурные элементы, которые не встречаются в природных полипептидах (т.е. полипептиды, состоящие только из 20 протеиногенных аминокислот). В некоторых вариантах осуществления пептидомиметики способны повторять или имитировать биологическое действие(действия) природного пептида. Пептидомиметик может во многом отличаться от природных полипептидов, например, изменениями в структуре основной цепи или присутствием аминокислот, которые не встречаются в природе. В некоторых случаях пептидомиметики могут включать аминокислоты с боковыми цепями, которые не встречаются среди известных 20 протеиногенных аминокислот; мостиковые группы, не основанные на полипептидах, используемые для осуществления циклизации между концами или внутренними частями молекулы; замещения водорода амидной связи метильными группами (N-метилирование) или другими алкильными группами; замену пептидной связи химической группой или связью, устойчивой к химическим или ферментативным обработкам; N- и C-концевые модификации; и/или конъюгацию с непептидным удлинением (таким как полиэтиленгликоль, липиды, углеводы, нуклеозиды, нуклеотиды, нуклеозидные основания, различные небольшие молекулы или фосфатные или сульфатные группы).

В контексте настоящей заявки, термин “аминокислота” включает остатки природных аминокислот, а также неприродных аминокислот. 20 природных протеиногенных аминокислот идентифицированы и указаны здесь следующими однобуквенными или трехбуквенными обозначениями: аспарагиновая кислота (Asp:D), изолейцин (Ile:I), треонин (Thr:T), лейцин (Leu:L), серин (Ser:S), тирозин (Tyr:Y), глутаминовая кислота (Glu:E), фенилаланин (Phe:F), пролин (Pro:P), гистидин (His:H), глицин (Gly:G), лизин (Lys:K), аланин (Ala:A), аргинин (Arg:R), цистеин (Cys:C), триптофан (Trp:W), валин (Val:V), глутамин (Gln:Q) метионин (Met:M), аспарагин (Asn:N). Природные аминокислоты существуют в их левовращающих (L) стереоизомерных формах. Аминокислоты, указанные в настоящей заявке, являются L-стереоизомерами за исключением случаев, где указано иное. Термин “аминокислота” также включает аминокислоты, несущие традиционную амино-защитную группу (например, ацетил или бензилоксикарбонил), а также природные и неприродные аминокислоты, защищенные на карбокси конце (например, в виде (C1-C6) алкилового, фенилового или бензилового сложного эфира или амида; или в виде альфа-метилбензиламида). Другие подходящие амино- и карбокси-защитные группы известны специалистам в данной области (см., например, Greene, T. W.; Wutz, P. G. M., Protecting Groups in Organic Synthesis; second edition, 1991, New York, John Wiley & sons, Inc. и цитируемые в нем документы, содержание каждого из которых включено в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте). Полипептиды и/или композиции полипептидов по настоящему изобретению также могут включать модифицированные аминокислоты.

“Неприродные” аминокислоты имеют боковые цепи или другие характерные особенности, не присутствующие в 20 природных аминокислотах, перечисленных выше, и включают, но не ограничиваются этим: N-метил-аминокислоты, N-алкил-аминокислоты, альфа, альфа-замещенные аминокислоты, бета-аминокислоты, альфа-гидроксиаминокислоты, D-аминокислоты и другие неприродные аминокислоты, известные в данной области техники (см., например, Josephson et al., (2005) J. Am. Chem. Soc. 127: 11727-11735; Forster, A.C. et al. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100: 6353-6357; Subtelny et al., (2008) J. Am. Chem. Soc. 130: 6131-6136; Hartman, M.C.T. et al. (2007) PLoS ONE 2:e972; и Hartman et al., (2006) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4356-4361). Другие неприродные аминокислоты, полезные для оптимизации полипептидов и/или композиций полипептидов по настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются этим: 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-1-карбоновую кислоту, 1-амино-2,3-гидро-1H-инден-1-карбоновую кислоту, гомолизин, гомоаргинин, гомосерин, 2-аминоадипиновую кислоту, 3-аминоадипиновую кислоту, бета-аланин, аминопропионовую кислоту, 2-аминомасляную кислоту, 4-аминомасляную кислоту, 5-аминопентановую кислоту, 5-аминогексановую кислоту, 6-аминокапроновую кислоту, 2-аминогептановую кислоту, 2-аминоизомасляную кислоту, 3-аминоизомасляную кислоту, 2-аминопимелиновую кислоту, десмозин, 2,3-диаминопропионовую кислоту, N-этилглицин, N-этиласпарагин, гомопролин, гидроксилизин, алло-гидроксилизин, 3-гидроксипролин, 4-гидроксипролин, изодесмозин, алло-изолейцин, N-метилпентилглицин, нафтилаланин, орнитин, пентилглицин, тиопролин, норвалин, трет-бутилглицин, фенилглицин, азатриптофан, 5-азатриптофан, 7-азатриптофан, 4-фторфенилаланин, пеницилламин, саркозин, гомоцистеин, 1-аминоциклопропанкарбоновую кислоту, 1-аминоциклобутанкарбоновую кислоту, 1-аминоциклопентанкарбоновую кислоту, 1-аминоциклогексанкарбоновую кислоту, 4-аминотетрагидро-2H-пиран-4-карбоновую кислоту, (S)-2-амино-3-(1H-тетразол-5-ил)пропановую кислоту, циклопентилглицин, циклогексилглицин, циклопропилглицин, η-ω-метил-аргинин, 4-хлорфенилаланин, 3-хлортирозин, 3-фтортирозин, 5-фтортриптофан, 5-хлортриптофан, цитруллин, 4-хлор-гомофенилаланин, гомофенилаланин, 4-аминометил-фенилаланин, 3-аминометил-фенилаланин, октилглицин, норлейцин, транексамовую кислоту, 2-аминопентановую кислоту, 2-аминогексановую кислоту, 2-аминогептановую кислоту, 2-аминооктановую кислоту, 2-аминононановую кислоту, 2-аминодекановую кислоту, 2-аминоундекановую кислоту, 2-аминододекановую кислоту, аминовалериановую кислоту и 2-(2-аминоэтокси)уксусную кислоту, пипеколиновую кислоту, 2-карбоксиазетидин, гексафторлейцин, 3-Фторвалин, 2-амино-4,4-дифтор-3-метилбутановую кислоту, 3-фтор-изолейцин, 4-фторизолейцин, 5-фторизолейцин, 4-метил-фенилглицин, 4-этил-фенилглицин, 4-изопропил-фенилглицин, (S)-2-амино-5-азидопентановую кислоту (также далее указана как “X02”), (S)-2-аминогепт-6-еновую кислоту (также далее указана как “X30”), (S)-2-аминопент-4-иновую кислоту (также далее указана как “X31”), (S)-2-аминопент-4-еновую кислоту (также далее указана как “X12”), (S)-2-амино-5-(3-метилгуанидино)пентановую кислоту, (S)-2-амино-3-(4-(аминометил)фенил)пропановую кислоту, (S)-2-амино-3-(3-(аминометил)фенил)пропановую кислоту, (S)-2-амино-4-(2-аминобензо[d]оксазол-5-ил)бутановую кислоту, (S)-лейцинол, (S)-валинол, (S)-трет-лейцинол, (R)-3-метилбутан-2-амин, (S)-2-метил-1-фенилпропан-1-амин и (S)-N,2-диметил-1-(пиридин-2-ил)пропан-1-амин, (S)-2-амино-3-(оксазол-2-ил)пропановую кислоту, (S)-2-амино-3-(оксазол-5-ил)пропановую кислоту, (S)-2-амино-3-(1,3,4-оксадиазол-2-ил)пропановую кислоту, (S)-2-амино-3-(1,2,4-оксадиазол-3-ил)пропановую кислоту, (S)-2-амино-3-(5-фтор-1H-индазол-3-ил)пропановую кислоту и (S)-2-амино-3-(1H-индазол-3-ил)пропановую кислоту, (S)-2-амино-3-(оксазол-2-ил)бутановую кислоту, (S)-2-амино-3-(оксазол-5-ил)бутановую кислоту, (S)-2-амино-3-(1,3,4-оксадиазол-2-ил)бутановую кислоту, (S)-2-амино-3-(1,2,4-оксадиазол-3-ил)бутановую кислоту, (S)-2-амино-3-(5-фтор-1H-индазол-3-ил)бутановую кислоту и (S)-2-амино-3-(1H-индазол-3-ил)бутановую кислоту, 2-(2’MeOфенил)-2-аминоуксусную кислоту, тетрагидро 3-изохинолинкарбоновую кислоту и их стереоизомеры (включая, но не ограничиваясь этим, D и L изомеры).

Дополнительные неприродные аминокислоты, которые полезны для оптимизации полипептидов или композиций полипептидов по настоящему изобретению, включают но не ограничиваются этим, фторированные аминокислоты, где один или несколько связанных с углеродом атомов водорода замещены фтором. Количество включенных атомов фтора может составлять от 1 до всех атомов водорода включительно. Примеры таких аминокислот включают, но не ограничиваются этим, 3-фторпролин, 3,3-дифторпролин, 4-фторпролин, 4,4-дифторпролин, 3,4-дифторпролин, 3,3,4,4-тетрафторпролин, 4-фтортриптофан, 5-фтортриптофан, 6-фтортриптофан, 7-фтортриптофан и их стереоизомеры.

Другие неприродные аминокислоты, которые полезны для оптимизации полипептидов по настоящему изобретению, включают но не ограничиваются этим, аминокислоты, которые являются дизамещенными по α-углероду. Они включают аминокислоты, в которых два заместителя на α-углероде являются одинаковыми, например α-аминоизомасляная кислота и 2-амино-2-этилбутановая кислота, а также такие, в которых заместители являются разными, например α-метилфенилглицин и α-метилпролин. Кроме того, заместители на α-углероде могут быть взяты вместе с образованием кольца, например 1-аминоциклопентанкарбоновой кислоты, 1- аминоциклобутанкарбоновой кислоты, 1-аминоциклогексанкарбоновой кислоты, 3-аминотетрагидрофуран-3-карбоновой кислоты, 3-аминотетрагидропиран-3-карбоновой кислоты, 4-аминотетрагидропиран-4-карбоновой кислоты, 3-аминопирролидин-3-карбоновой кислоты, 3-аминопиперидин-3-карбоновой кислоты, 4-аминопиперидин-4-карбоновой кислоты и их стереоизомеров.

Дополнительные неприродные аминокислоты, которые можно использовать для оптимизации полипептидов или полипептидных композиций по настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются этим, аналоги триптофана, в которых индольная кольцевая система заменена другой 9- или 10-членной бициклической кольцевой системой с 0, 1, 2, 3 или 4 гетероатомами, независимо выбранными из N, O или S. Каждая кольцевая система может быть насыщенной, частично ненасыщенной или полностью ненасыщенной. Кольцевая система может быть замещена 0, 1, 2, 3 или 4 заместителями по любому замещаемому атому. Каждый заместитель может быть независимо выбран из H, F, Cl, Br, CN, COOR, CONRR’, оксо, OR, NRR’. Каждый R и R’ могут быть независимо выбраны из H, C1-C20 алкила или C1-C20 алкил-O-C1-20 алкила.

В некоторых вариантах осуществления аналоги триптофана (также называемые здесь “триптофановыми аналогами”) могут быть полезны при оптимизации полипептидов или полипептидных композиций по настоящему изобретению. Аналоги триптофана могут включать, но не ограничиваются этим, 5-фтортриптофан [(5-F)W], 5-метил-O-триптофан [(5-MeO)W], 1-метилтриптофан [(1-Me-W) или (1-Me)W], D-триптофан (D-Trp), азатриптофан (включая, но не ограничиваясь этим, 4-азатриптофан, 7-азатриптофан и 5-азатриптофан), 5-хлортриптофан, 4-фтортриптофан, 6-фтортриптофан, 7-фтортриптофан и их стереоизомеры. За исключением случаев, когда указано иное, термин “азатриптофан” и его аббревиатура “azaTrp” в контексте настоящей заявки относятся к 7-азатриптофану.

Модифицированные аминокислотные остатки, полезные для оптимизации полипептидов и/или полипептидных композиций по настоящему изобретению, включают, но не ограничиваются этим, такие, которые химически блокированы (обратимо или необратимо); химически модифицированы по их N-концевой аминогруппе или группам их боковых цепей; химически модифицированы в амидном каркасе, как например стереоизомеры N-метилированных, D (неприродных аминокислот) и L (природных аминокислот); или остатки, где функциональные группы боковых цепей химически модифицированы до другой функциональной группы. В некоторых вариантах осуществления модифицированные аминокислоты включают, без ограничения, метионин сульфоксид; метионин сульфон; аспарагиновая кислота-(бета-метиловый сложный эфир), модифицированную аминокислоту аспарагиновой кислоты; N-этилглицин, модифицированную аминокислоту глицина; аланин карбоксамид; и/или модифицированную аминокислоту аланина. Неприродные аминокислоты можно приобрести у компании Sigma-Aldrich (St. Louis, MO), Bachem (Torrance, CA) или других поставщиков. Неприродные аминокислоты также могут включать любые из перечисленных в Таблице 2 патентной публикации США № 2011/0172126, содержание которой включено в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте.

Настоящим изобретением предусматриваются варианты и производные полипептидов, представленных в настоящей заявке. Они включают замещающие, инсерционные, делеционные и ковалентные варианты и производные. В контексте настоящей заявки термин “производное” используется как синоним к термину “вариант” и относится к молекуле, которая модифицирована или изменена любым образом относительно эталонной молекулы или исходной молекулы.

Полипептиды по настоящему изобретению могут включать любые из следующих компонентов, характеристик или групп, для которых в настоящей заявке используются следующие аббревиатуры: “Ac” и “NH2” означают ацетильный и амидированный концы, соответственно; “Nvl” означает норвалин; “Phg” означает фенилглицин; “Tbg” означает трет-бутилглицин; “Chg” означает циклогексилглицин; “(N-Me)X” означает N-метилированную форму аминокислоты, указанной однобуквенным или трехбуквенным аминокислотным кодом вместо переменной “X”, представляемой как N-метил-X [например, (N-Me)D или (N-Me)Asp означают N-метилированную форму аспарагиновой кислоты или N-метил-аспарагиновую кислоту]; “azaTrp” означает азатриптофан; “(4-F)Phe” означает 4-фторфенилаланин; “Tyr(OMe)” означает O-метилтирозин, “Aib” означает амино изомасляную кислоту; “(гомо)F” или “(гомо)Phe” означает гомофенилаланин; “(2-OMe)Phg” относится к 2-O-метилфенилглицину; “(5-F)W” относится к 5-фтортриптофану; “D-X” относится к D-стереоизомеру данной аминокислоты “X” [например, (D-Chg) означает D-циклогексилглицин]; “(5-MeO)W” относится к 5-метил-O-триптофану; “homoC” относится к гомоцистеину; “(1-Me-W)” или “(1-Me)W” относится к 1-метилтриптофану; “Nle” относится к норлейцину; “Tiq” относится к тетрагидроизохинолиновому остатку; “Asp(T)” относится к (S)-2-амино-3-(1H-тетразол-5-ил)пропановой кислоте; “(3-Cl-Phe)” относится к 3-хлорфенилаланину; “[(N-Me-4-F)Phe]” или “(N-Me-4-F)Phe” относится к N-метил-4-фторфенилаланине; “(m-Cl-гомо)Phe” относится к мета-хлоргомофенилаланину; “(дез-амино)C” относится к 3-тиопропионовой кислоте; “(альфа-метил)D” относится к альфа-метил L-аспарагиновой кислоте; “2Nal” относится к 2-нафтилаланину; “(3-аминометил)Phe” относится к 3-аминометил-L-фенилаланину; “Cle” относится к циклолейцину; “Ac-Пиран” относится к 4-амино-тетрагидро-пиран-4-карбоновой кислоте; “(Lys-C16)” относится к N-ε-пальмитоиллизину; “(Lys-C12)” относится к N-ε-лауриллизину; “(Lys-C10)” относится к N-ε-каприллизину; “(Lys-C8)” относится к N-ε-каприллизину; “[xКсилил(y, z)]” относится к ксилильной мостиковой группе между двумя тиол-содержащими аминокислотами, где x может быть m, p или o, указывая на использование мета-, пара- или орто- дибромксилолов (соответственно) для образования мостиковых групп, и числовые идентификаторы, y и z, указывают аминокислотное положение в полипептиде аминокислот, участвующих в циклизации; “[цикло(y, z)]” относится к образованию связи между двумя аминокислотными остатками, где числовые идентификаторы, y и z, указывают положение остатков, участвующих в связи; “[цикло-олефинил(y, z)]” относится к образованию связи между двумя аминокислотными остатками путем метатезиса олефинов, где числовые идентификаторы, y и z, указывают положение остатков, участвующих в связи; “[цикло-тиоалкил(y, z)]” относится к образованию тиоэфирной связи между двумя аминокислотными остатками, где числовые идентификаторы, y и z, указывают положение остатков, участвующих в связи; “[цикло-триазолил(y, z)]” относится к образованию триазольного кольца между двумя аминокислотными остатками, где числовые идентификаторы, y и z, указывают положение остатков, участвующих в связи. “B20” относится к N-ε-(PEG2-γ-глутаминовая кислота-N-α-октадекандиовая кислота)лизину [также известному как (1S,28S)-1-амино-7,16,25,30-тетраoxo-9,12,18,21-тетраокса-6,15,24,29-тетраазагексатетраконтан-1,28,46-трикарбоновая кислота].

B20

“B28” относится к N-ε-(PEG24-γ-глутаминовая кислота-N-α-гексадеканоил)лизину.

B28

“K14” относится к N-ε-1-(4,4-диметил-2,6-диоксоциклогекс-1-илиден)-3-метилбутил-L-лизину. Все другие символы относятся к стандартному однобуквенному аминокислотному коду.

Некоторые полипептидные ингибиторы C5 включают от около 5 аминокислот до около 10 аминокислот, от около 6 аминокислот до около 12 аминокислот, от около 7 аминокислот до около 14 аминокислот, от около 8 аминокислот до около 16 аминокислот, от около 10 аминокислот до около 18 аминокислот, от около 12 аминокислот до около 24 аминокислот или от около 15 аминокислот до около 30 аминокислот. В некоторых случаях полипептидные ингибиторы C5 включают по меньшей мере 10 аминокислот. В некоторых случаях полипептидные ингибиторы C5 включают по меньшей мере 30 аминокислот. Полипептидные ингибиторы C5 могут включать 14, 15 или 16 аминокислот, (например, 15 аминокислот).

Некоторые ингибиторы C5 по настоящему изобретению включают C-концевой липидный фрагмент. Такие липидные фрагменты могут включать жирноацильные группы (например, насыщенные или ненасыщенные жирноацильные группы). В некоторых случаях жирноацильная группа может представлять собой пальмитоильную группу.

Ингибиторы C5, содержащие жирноацильные группы, могут включать один или несколько молекулярных линкеров, соединяющих жирные кислоты с пептидом. Такие молекулярные линкеры могут включать аминокислотные остатки. В некоторых случаях остатки глутаминовой кислоты L-γ можно использовать в качестве молекулярных линкеров. В некоторых случаях молекулярные линкеры могут включать один или несколько полиэтиленгликолевых (ПЭГ) линкеров. ПЭГ линкеры по настоящему изобретению могут включать от около 1 до около 5, от около 2 до около 10, от около 4 до около 20, от около 6 до около 24, от около 8 до около 32 или по меньшей мере 32 ПЭГ звеньев.

Ингибиторы C5, раскрытые в настоящей заявке, могут иметь молекулярную массу от около 200 г/моль до около 600 г/моль, от около 500 г/моль до около 2000 г/моль, от около 1000 г/моль до около 5000 г/моль, от около 3000 г/моль до около 4000 г/моль, от около 2500 г/моль до около 7500 г/моль, от около 5000 г/моль до около 10000 г/моль или по меньшей мере 10000 г/моль.

В некоторых вариантах осуществления полипептидные ингибиторы C5 по настоящему изобретению включают зилукоплан. Сердцевинная аминокислотная последовательность зилукоплана ([цикло(1,6)]Ac-K-V-E-R-F-D-(N-Me)D-Tbg-Y-азаTrp-E-Y-P-Chg-K; SEQ ID NO: 1) включает 15 аминокислот (все L-аминокислоты), включая 4 неприродных аминокислоты [N-метил-аспарагиновая кислота или “(N-Me)D”, трет-бутилглицин или “Tbg”, 7-азатриптофан или “азаTrp” и циклогексилглицин или “Chg”]; лактамовый мостик между K1 и D6 полипептидной последовательности; и C-концевой лизиновый остаток с модифицированной боковой цепью, образующий N-ε-(PEG24-γ-глутаминовая кислота-N-α-гексадеканоил)лизиновый остаток (также далее указанный как “B28”). Модификация боковой цепи C-концевого лизина включает полиэтиленгликолевый (ПЭГ) спейсер (ПЭГ24), при этом ПЭГ24 присоединен к L-γ остатку глутаминовой кислоты, который дериватизирован пальмитоильной группой.

Свободнокислотная форма зилукоплана имеет молекулярную формулу C₁₇₂H₂₇₈N₂₄O₅₅, молекулярную массу 3562,23 Дальтон (Да) и точную массу 3559,97 а.е.м. (см. CAS Number 1841136-73-9). Тетра-натриевая форма зилукоплана имеет молекулярную формулу C₁₇₂H₂₇₈N₂₄O₅₅Na₄. Химическая структура формы натриевой соли зилукоплана показана в структуре I:

Структура I

Четыре иона натрия в структуре показаны связанными с обозначенными карбоксилатами, но они могут быть связаны с любой из кислотных групп в молекуле. Лекарственное вещество зилукоплан обычно получают в форме натриевой соли и лиофилизируют. Форма свободного основания зилукоплана или любой фармацевтически приемлемой соли зилукоплана охватывается термином “зилукоплан”.

В некоторых вариантах осуществления ингибиторы C5 по настоящему раскрытию включают варианты зилукоплана. Ссылки на зилукоплан включают активные метаболиты или их варианты, т.е. активные метаболиты или варианты с активностью ингибирования C5. В некоторых вариантах зилукоплана может быть изменен фрагмент боковой цепи С-концевого лизина. В некоторых случаях спейсер ПЭГ24 (имеющий 24 субъединицы ПЭГ) фрагмента боковой цепи C-концевого лизина может включать меньшее количество или дополнительные субъединицы ПЭГ. В других случаях пальмитоильная группа фрагмента боковой цепи С-концевого лизина может быть замещена другой насыщенной или ненасыщенной жирной кислотой. В других случаях линкерная группа L-γ глутаминовой кислоты фрагмента боковой цепи С-концевого лизина (между ПЭГ и ацильными группами) может быть заменена альтернативным аминокислотным или неаминокислотным линкером.

В некоторых вариантах осуществления ингибиторы C5 могут включать активные метаболиты или варианты зилукоплана. Метаболиты могут включать ω-гидроксилирование пальмитоильного хвоста. Такие варианты могут быть синтезированы или могут быть образованы путем гидроксилирования предшественника зилукоплана

В некоторых вариантах осуществления варианты зилукоплана могут включать модификации сердцевинной полипептидной последовательности в зилукоплане, которые можно использовать в комбинации с одной или несколькими характерными особенностями, такими как циклическая структура или фрагмент боковой цепи С-концевого лизина, зилукоплана. Такие варианты могут иметь по меньшей мере 50%, по меньшей мере 55%, по меньшей мере 65%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% идентичности последовательности с сердцевинной полипептидной последовательностью (SEQ ID NO: 1).

В некоторых случаях варианты зилукоплана могут циклизоваться путем образования лактамовых мостиков между аминокислотами, которые отличны от используемых в зилукоплане.

В некоторых вариантах осуществления ингибиторы C5 по настоящему изобретению могут включать любой из перечисленных в Таблице 1 публикации США № 2017/0137468, содержание которой включено в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте.

Ингибиторы C5 по настоящему изобретению могут быть разработаны или модифицированы для достижения специфических характеристик связывания. Связывание ингибитора можно оценить путем определения скорости ассоциации и/или диссоциации с конкретной мишенью. В некоторых случаях соединения демонстрируют сильную и быструю ассоциацию с мишенью в сочетании с медленной скоростью диссоциации. В некоторых вариантах осуществления ингибиторы C5 по настоящему раскрытию демонстрируют сильную и быструю ассоциацию с C5. Такие ингибиторы могут дополнительно демонстрировать медленные скорости диссоциации с C5.

Ингибиторы C5, связывающиеся с белком C5, раскрытые в настоящей заявке, могут связываться с белком комплемента C5 с равновесной константой диссоциации (K_D) от около 0,001 нМ до около 0,01 нМ, от около 0,005 нМ до около 0,05 нМ, от около 0,01 нМ до около 0,1 нМ, от около 0,05 нМ до около 0,5 нМ, от около 0,1 нМ до около 1,0 нМ, от около 0,5 нМ до около 5,0 нМ, от около 2 нМ до около 10 нМ, от около 8 нМ до около 20 нМ, от около 15 нМ до около 45 нМ, от около 30 нМ до около 60 нМ, от около 40 нМ до около 80 нМ, от около 50 нМ до около 100 нМ, от около 75 нМ до около 150 нМ, от около 100 нМ до около 500 нМ, от около 200 нМ до около 800 нМ, от около 400 нМ до около 1000 нМ или по меньшей мере 1000 нМ.

В некоторых вариантах осуществления ингибиторы C5 по настоящему изобретению блокируют образование или генерацию C5a из C5. В некоторых случаях образование или генерация C5a блокируется после активации альтернативного пути активации комплемента. В некоторых случаях ингибиторы C5 по настоящему изобретению блокируют образование мембраноатакующего комплекса (MAC). Такое ингибирование образования MAC может быть в результате связывания ингибитора C5 с субъединицами C5b. Связывание ингибитора C5 с субъединицами C5b может препятствовать связыванию C6, что приводит к блокированию образования MAC. В некоторых вариантах осуществления это ингибирование образования MAC происходит после активации классического, альтернативного или лектинового путей.

Ингибиторы C5 по настоящему изобретению можно синтезировать с использованием химических способов. В некоторых случаях такой синтез устраняет риски, связанные с производством биологических продуктов в линиях клеток млекопитающих. В некоторых случаях химический синтез может быть проще и рентабельнее, чем биологические способы получения.

В некоторых вариантах осуществления композиции ингибитора C5 (например, зилукоплана и/или его активного метаболита или варианта) могут представлять собой фармацевтические композиции, которые включают по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемый эксципиент может включать по меньшей мере одно из соли и буферного агента. Соль может представлять собой хлорид натрия. Буферный агент может представлять собой фосфат натрия. Хлорид натрия может присутствовать в концентрации от около 0,1 мМ до около 1000 мМ. В некоторых случаях хлорид натрия может присутствовать в концентрации от около 25 мМ до около 100 мМ. Фосфат натрия может присутствовать в концентрации от около 0,1 мМ до около 1000 мМ. В некоторых случаях фосфат натрия присутствует в концентрации от около 10 мМ до около 100 мМ.

В некоторых вариантах осуществления композиции ингибитора C5 (например, зилукоплана и/или его активного метаболита или варианта) могут включать от около 0,01 мг/мл до около 4000 мг/мл ингибитора C5. В некоторых случаях ингибиторы C5 присутствуют в концентрации от около 1 мг/мл до около 400 мг/мл.

Ингибиторы C5 на основе полипептидов (например, зилукоплан и/или его активные метаболиты или варианты) можно использовать для лечения показаний, где быстрое и/или усиленное распределению ингибитора в тканях приносит пользу. Ткань может включать мышцу и/или нейромышечное соединение (NMJ). Ингибиторы полипептидов (например, зилукоплан) могут обеспечивать лучшее проникновение в мышцы и/ или NMJ по сравнению с антителами из-за меньшего размера и/или благоприятного профиля заряда. Такое проникновение может привести к более быстрому избавлению от сверхактивного комплемента. Кроме того, проникновение полипептидного ингибитора (например, зилукоплана) может стабилизировать и/или улучшить мембранный потенциал NMJ, предотвращая образование пор МАК. Соответственно, фактор безопасности на NMJ может быть улучшен. Термин “фактор безопасности” относится к избыточным уровням трансмиттера, высвобождаемым после нервного импульса, которые обеспечивают эффективность нервно-мышечной передачи при физиологическом стрессе. Избыток означает количество, превышающее количество, необходимое для запуска потенциала действия мышечных волокон, и способствует восстановлению мембранного потенциала.

Изотопные варианты

Соединения по настоящему изобретению могут включать один или несколько атомов, которые являются изотопами. В контексте настоящей заявки термин “изотоп” относится к химическому элементу, который имеет один или несколько дополнительных нейтронов. В некоторых вариантах осуществления соединения по настоящему изобретению могут быть дейтерированными. В контексте настоящей заявки термин “дейтерированный” относится к веществу, в котором один или несколько атомов водорода замещены изотопами дейтерия. Изотопы дейтерия являются изотопами водорода. Ядро водорода содержит один протон, тогда как ядра дейтерия содержат как протон, так и нейтрон. Соединения и композиции по настоящему изобретению могут быть дейтерированы для изменения физического свойства, такого как стабильность, или для использования в диагностических и экспериментальных применениях.

II. Способы

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение предоставляет способы, относящиеся к использованию и оценке соединений и композиций для терапевтического лечения неврологических расстройств, таких как MG. Некоторые способы включают модуляцию активности комплемента с использованием соединений и/или композиций, описанных в настоящей заявке.

Терапевтические показания

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает способы лечения терапевтических показаний с использованием соединений и композиций, описанных в настоящей заявке. “Терапевтическое показание” в контексте настоящей заявки относится к любому заболеванию, расстройству, состоянию или симптому, которые можно облегчить, вылечить, улучшить, индуцировать реверсию, стабилизировать или иным образом воздействовать при помощи одной или нескольких форм терапевтического вмешательства (например, введение терапевтического средства или конкретный метод лечения).

Терапевтические показания могут включать комплемент-связанные показания. В контексте настоящей заявки термин “комплемент-связанное показание” относится к любому заболеванию, расстройству, состоянию или симптому, связанному с системой комплемента, например с расщеплением или процессингом компонента комплемента, такого как C5. В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению включают лечение комплемент-связанных показаний соединениями и композициями, представленными в настоящей заявке.

В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению включают лечение комплемент-связанных показаний путем ингибирования активности комплемента у субъекта с использованием соединений и композиций, представленных в настоящей заявке. В некоторых случаях процент ингибирования активности комплемента у субъекта может быть по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере, 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, по меньшей мере 99,5% или по меньшей мере 99,9%. В некоторых случаях этот уровень ингибирования и/или максимальное ингибирование активности комплемента может достигаться через период времени от около 1 часа после введения до около 3 часов после введения, от около 2 часов после введения до около 4 часов после введения, от около 3 часов после введения до около 10 часов после введения, от около 5 часов после введения до около 20 часа после введения или от около 12 часов после введения до около 24 часов после введения. Ингибирование активности комплемента может продолжаться в течение периода по меньшей мере 1 дня, по меньшей мере 2 дней, по меньшей мере 3 дней, по меньшей мере 4 дней, по меньшей мере 5 дней, по меньшей мере 6 дней, по меньшей мере 7 дней, по меньшей мере 2 недель, по меньшей мере 3 недель или по меньшей мере 4 недель. В некоторых случаях этот уровень ингибирования может достигаться путем ежедневного введения. Такое ежедневное введение может включать введение в течение по меньшей мере 2 дней, в течение по меньшей мере 3 дней, в течение по меньшей мере 4 дней, в течение по меньшей мере 5 дней, в течение по меньшей мере 6 дней, в течение по меньшей мере 7 дней, в течение по меньшей мере 2 недель, в течение по меньшей мере 3 недель, в течение по меньшей мере 4 недель, в течение по меньшей мере 2 месяцев, в течение по меньшей мере 4 месяцев, в течение по меньшей мере 6 месяцев, в течение по меньшей мере 1 года или в течение по меньшей мере 5 лет. В некоторых случаях субъектам можно вводить соединения или композиции по настоящему изобретению на протяжении срока жизни таких субъектов.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает способы лечения комплемент-связанных показаний путем ингибирования C5 активности у субъекта. “C5-зависимая активность комплемента” или “C5 активность” в контексте настоящей заявки относится к активации каскада комплемента через расщепление C5, сборку нисходящих продуктов расщепления C5 или любой другой процесс или событие, сопровождающее или являющееся результатом расщепления C5. В некоторых случаях процент ингибирования активности C5 у субъекта может быть по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере, 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, по меньшей мере 99,5% или по меньшей мере 99,9%.

Ингибиторы C5 можно использовать для лечения одного или нескольких показаний, связанных с комплементом, при этом в результате лечения возникают незначительные или нулевые побочные эффекты. В некоторых случаях побочные эффекты на сердечно-сосудистую, респираторную и/или центральную нервную систему (ЦНС) не наблюдаются. В некоторых случаях не происходит изменений частоты сердечных сокращений и/или артериального давления. В некоторых случаях не происходит изменений частоты дыхания, дыхательного объема и/или минутного объема.

Под “снижением” или “уменьшением” в контексте маркера заболевания или симптома подразумевается значительное снижение такого уровня, часто статистически значимое. Снижение может составлять, например, по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40% или более, и предпочтительно до уровня, который принят как находящийся в пределах нормы для субъекта без такого расстройства.

Под “увеличением” или “повышением” в контексте маркера или симптома заболевания подразумевается значительное повышение такого уровня, часто статистически значимое. Повышение может составлять, например, по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40% или более, и может достигать уровня, который принят как находящийся в пределах нормы для субъекта без такого расстройства.

Лечебный или профилактический эффект очевиден при значительном улучшении, часто статистически значимом, одного или нескольких параметров состояния болезни, или при отсутствии ухудшения или развития симптомов, которые в противном случае можно было бы ожидать. Например, благоприятное изменение по меньшей мере на 10% измеряемого параметра заболевания и по меньшей мере на 20%, 30%, 40%, 50% или более может указывать на эффективное лечение. Эффективность данного соединения или композиции также можно оценить с использованием экспериментальной модели на животных для данного заболевания, как известно в данной области. При использовании экспериментальной модели на животных эффективность лечения подтверждается, когда наблюдается статистически значимая модуляция маркера или симптома.

Соединения по настоящему изобретению и дополнительные терапевтические средства можно вводить в комбинации. Такие комбинации могут находиться в одной и той же композиции, или дополнительные терапевтические средства можно вводить как часть отдельной композиции или другим способом, описанным в настоящей заявке.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает способы ингибирования активности C5 в ткани путем контактирования ткани с проникающим в ткань ингибитором C5. В контексте настоящей заявки термин “проникающий в ткань” относится к свойству, характеризующемуся способностью проникновения в ткань. Средства с улучшенным проникновением в ткани могут демонстрировать лучшее распределение в тканях по сравнению со средствами с более низкой или с отсутствием способности проникновения в ткани. Проникновение в ткани можно оценить по способности проникать через базальные мембраны. В контексте настоящей заявки термин “базальная мембрана” относится к белковому слою внеклеточного матрикса (ЕСМ), отделяющему эндотелиальные клетки от нижележащих тканей. Оценку проникновения в ткани можно осуществлять in vivo или in vitro, и она может включать использование моделей базальной мембраны. Такие модели могут включать измерение диффузии соединения через искусственные базальные мембраны. Такие модели могут включать использование верхнего и нижнего резервуаров, разделенных искусственной базальной мембраной. Искусственные базальные мембраны могут включать любую из гелевых мембран ЕСМ, описанных в Arends, F. et al. 2016. IntechOpen, DOI: 10.5772/62519, содержание которого полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки. Гелевые мембраны ЕСМ могут быть получены с включением компонентов матрикса, имитирующих компоненты, обнаруженные в базальной пластинке нервно-мышечных соединений. В некоторых моделях испытываемые соединения вводят в верхние резервуары, а диффузию соединений определяют в нижних резервуарах.

Оценка проникновения в ткани может включать визуальную оценку, например, путем использования флуоресцентных меток для визуализации движения аналита через базальные мембраны. Некоторые оценки могут включать биохимический анализ образцов, полученных со стороны базальной мембраны, куда проникло соединение.

В некоторых вариантах осуществления проникающую способность соединения можно определить с использованием количественного анализа всего тела (QWBA). QWBA представляет собой форму анализа, в которой для оценки распределения радиоактивно меченных аналитов используется рентгенография. В некоторых вариантах осуществления соединения с радиоактивной меткой вводят субъектам, и распределение соединений в тканях анализируют с течением времени.

Ингибиторы C5, проникающие в ткани, могут представлять собой полипептиды. Ингибиторы C5, проникающие в ткани, могут включать зилукоплан. Контактирование тканей с проникающими в ткани ингибиторами C5 может включать введение в ткани проникающих в ткани ингибиторов C5 как части композиции. Такие композиции можно вводить путем подкожной инъекции. Ингибиторы C5, проникающие в ткани, могут проникать через базальные мембраны. Проницаемость базальной мембраны для полипептидных ингибиторов С5, проникающих в ткань, может быть больше, чем проницаемость базальной мембраны для более крупных белков, таких как антитела. Такие преимущества могут быть связаны с ограниченно большим размером белков и антител. Способность зилукоплана проникать через базальную мембрану может быть примерно в 3-5 раз выше, чем способность экулизумаба проникать через базальную мембрану, что дает преимущества перед экулизумабом в отношении ингибирования активности C5 в тканях и лечения связанных с комплементом показаний. В некоторых вариантах осуществления проникающая способность зилукоплана улучшает распределение в одном или нескольких из легких, сердца, мышц, тонкого кишечника, толстого кишечника, селезенки, печени, кости, желудка, лимфатического узла, жира, головного мозга, поджелудочной железы, яичек и тимуса по сравнению с экулизумабом.

Ингибиторы C5 на основе полипептидов (например, зилукоплан и/или его активные метаболиты или варианты) можно использовать для лечения показаний, связанных с комплементом (например, миастении), благодаря быстрому и/или усиленному распределению ингибитора в тканях. Ткань может включать мышечное и/или нейромышечное соединение (NMJ). Ингибиторы полипептидов (например, зилукоплан) могут обеспечивать лучшее проникновение в мышцы и/или NMJ по сравнению с антителами из-за меньшего размера и/или благоприятного профиля заряда. Такое проникновение может привести к более быстрому избавлению от сверхактивного комплемента. Кроме того, проникновение полипептидного ингибитора (например, зилукоплана) может стабилизировать и/или улучшить мембранный потенциал NMJ, предотвращая образование пор МАК. Соответственно, фактор безопасности на NMJ может быть улучшен. Термин “фактор безопасности” относится к избыточным уровням трансмиттера, высвобождаемым после нервного импульса, которые обеспечивают эффективность нервно-мышечной передачи при физиологическом стрессе. Избыток означает количество, превышающее количество, необходимое для запуска потенциала действия мышечных волокон, и способствует восстановлению мембранного потенциала.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает способы лечения комплемент-связанных показаний у субъектов путем введения зилукоплана в комбинации с другими терапевтическими средствами. Циклоспорин A представляет собой известное иммуносупрессорное средство, ингибитор транспортного полипептида органических анионов (OATP) 1B1 и OATP1B3, и представляет собой потенциальное средство для совместного лечения PNH и других комплемент-связанных показаний. В некоторых вариантах осуществления циклоспорин A и зилукоплан можно вводить в комбинации субъектам с комплемент-связанными показаниями (например, тяжелой миастенией). Циклоспорин A и зилукоплан можно вводить в перекрывающихся режимах введения. Другие иммуносупрессорные средства, которые можно вводить в комбинации с или в перекрывающихся режимах введения с зилукопланом, могут включать, но не ограничиваются этим, азатиоприн, циклоспорин, микофенолят мофетил, метотрексат, такролимус, циклофосфамид и ритуксимаб.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает способы лечения комплемент-связанных показаний у субъектов путем введения зилукоплана в комбинации с лечениями ингибиторами неонатального Fc-рецептора (FcRN). Лечения ингибиторами FcRN можно использовать для лечения аутоиммунных заболеваний, которые включают аутоантитело-опосредованное разрушение ткани. Лечения ингибиторами FcRN могут включать лечение внутривенным иммуноглобулином (IVIG), которое снижает период полувыведения антител IgG за счет подавления механизма рециклинга Fc большими дозами иммуноглобулина. Некоторые способы лечения ингибиторами FcRN могут включать введение DX-2504 или его функционально эквивалентных вариантов, например, DX-2507, который включает модификации для уменьшения агрегации и повышения технологичности (описано в Nixon, AE et al. 2015. Front Immunol. 6:176). DX-2504 является ингибитором рециклинга FcRN. Ингибируя FcRN, DX-2504 ингибирует Fc-опосредованный рециклинг, тем самым уменьшая период полувыведения антител IgG. Введение DX-2504 также можно использовать в моделях лечения IVIG. В некоторых вариантах осуществления зилукоплан можно вводить для лечения комплемент-связанных показаний (например, тяжелой миастении), в перекрывающихся режимах введения с лечением ингибитором FcRN. Лечение ингибитором FcRN может включать введение DX-2504 (или DX-2507) и/или IVIG лечение.

Неврологические показания

В некоторых вариантах осуществления соединения и композиции, раскрытые в настоящей заявке, можно использовать для лечения комплемент-связанных показаний, которые являются неврологическими показаниями. “Неврологическое показание” в контексте настоящей заявки относится к любому заболеванию, расстройству, состоянию или симптому, связанному с нервной системой. В некоторых вариантах осуществления комплемент-связанные неврологические показания включают тяжелую миастению.

Аутоиммунные показания

В некоторых вариантах осуществления соединения и композиции, раскрытые в настоящей заявке, можно использовать для лечения комплемент-связанных показаний, которые являются аутоиммунными показаниями. В контексте настоящей заявки термин “аутоиммунное показание” относится к любому заболеванию, расстройству, состоянию или симптому, связанному с саморазрушающей иммунной активностью. Способность иммунной системы разграничивать собственные и чужие клетки является критической характерной особенностью в этой системе. Патология возникает, когда иммунная система не может осуществлять такое разграничение. Иммунная система может быть разделена на врожденную и адаптивную системы, относящиеся к неспецифическим механизмам немедленной защиты и более сложным антиген-специфическим системам, соответственно. Система комплемента является частью врожденной иммунной системы, распознающей и устраняющей патогены. Кроме того, белки комплемента могут модулировать адаптивный иммунитет, связывая врожденные и адаптивные ответы. Аутоиммунное заболевание может затрагивать некоторые ткани или органы тела.

В случае системы комплемента, клетки позвоночных экспрессируют ингибирующие белки, которые защищают их от воздействия каскада комплемента, и это гарантирует, что система комплемента направлена против чужеродных патогенов. Многие комплемент-связанные показания связаны с аномальным разрушением собственных клеток каскадом комплемента.

В некоторых вариантах осуществления комплемент-связанные аутоиммунные показания включают тяжелую миастению.

Тяжелая миастения

В некоторых вариантах осуществления соединения и композиции, раскрытые в настоящей заявке, можно использовать для лечения комплемент-связанных показаний, которые включают тяжелую миастению. Тяжелая миастения (MG) является редким комплемент-опосредованным аутоиммунным заболеванием, характеризующимся продукцией аутоантител, нацеленных на белки, которые имеют решающее значение для нормальной передачи химических или нейротрансмиттерных сигналов от нервов к мышцам, например белки рецепторов ацетилхолина (AChR). Присутствие аутоантител к AChR в образцах пациентов можно использовать как индикатор заболевания. В контексте настоящей заявки термин “MG” охватывает любую форму MG. В то время как примерно у 15% пациентов симптомы ограничиваются глазными мышцами, у большинства пациентов наблюдается генерализованная тяжелая миастения. В контексте настоящей заявки термин “генерализованная тяжелая миастения” или “gMG” относится к MG, которая поражает несколько групп мышц по всему телу. Хотя прогноз MG в целом благоприятный, от 10% до 15% пациентов имеют рефрактерную MG. В контексте настоящей заявки термин “рефрактерная MG” или “rMG” относится к MG, где контроль заболевания либо не может быть достигнут с использованием существующих терапий, либо приводит к серьезным побочным эффектам иммуносупрессорной терапии. Эта тяжелая форма MG поражает примерно 9000 человек в США.

У пациентов с MG наблюдается мышечная слабость, которая обычно усиливается при повторном использовании и восстанавливается в покое. Мышечная слабость может быть локализована в определенных мышцах, например, в тех, которые отвечают за движения глаз, но часто прогрессирует до более диффузной мышечной слабости. MG может даже стать опасным для жизни, когда мышечная слабость затрагивает диафрагму и другие мышцы грудной стенки, отвечающие за дыхание. Это наиболее опасное осложнение MG, известное как миастенический криз или криз MG, и требует госпитализации, интубации и искусственной вентиляции легких. Приблизительно от 15% до 20% пациентов с gMG испытывают миастенический криз в течение двух лет после постановки диагноза.

Наиболее распространенной мишенью аутоантител при MG является рецептор ацетилхолина или AChR, расположенный в нервно-мышечном соединении, точке, в которой двигательный нейрон передает сигналы в волокно скелетных мышц. Существующие терапии gMG сосредоточены либо на усилении сигнала AChR, либо на неспецифическом подавлении аутоиммунного ответа. Терапия первой линии для симптоматического gMG включает лечение ингибиторами ацетилхолинэстеразы, такими как пиридостигмин, который является единственной одобренной терапией для MG. Хотя иногда и достаточная для контроля легких глазных симптомов, монотерапия пиридостигмином обычно недостаточна для лечения генерализованной слабости, и дозирование этой терапии может быть ограничено холинергическими побочными эффектами. Таким образом, пациентам, у которых симптомы сохраняются, несмотря на терапию пиридостигмином, показаны кортикостероиды с системными иммунодепрессантами или без них (Sanders DB, et al. 2016. Neurology. 87 (4): 419-25). Иммунодепрессанты, используемые при gMG, включают азатиоприн, циклоспорин, микофенолят мофетил, метотрексат, такролимус, циклофосфамид и ритуксимаб. На сегодняшний день данные об эффективности этих средств немногочисленны, и ни одна стероидная или иммуносупрессивная терапия не была одобрена для лечения gMG. Более того, все эти средства связаны с достаточно документально подтвержденной долгосрочной токсичностью. Хирургическое удаление тимуса может быть рекомендовано пациентам с нетимоматозной gMG и умеренными или тяжелыми симптомами для попытки снижения продукции аутоантител к AChR (Wolfe GI, et al. 2016. N Engl J Med. 375 (6): 511-22). Внутривенный (в/в) иммуноглобулин и плазмообмен (PLEX) обычно ограничиваются краткосрочным применением у пациентов с миастеническим кризом или опасными для жизни признаками, такими как дыхательная недостаточность или дисфагия (Sanders et al., 2016).

Имеются существенные доказательства, подтверждающие роль терминального каскада комплемента в патогенезе анти-AChR аутоантитело-положительных gMG. Результаты на животных моделях экспериментальноой аутоиммунной MG продемонстрировали, что образование иммунного комплекса аутоантител в нервно-мышечном соединении запускает активацию классического пути комплемента, что приводит к локальной активации C3 и отложению мембранноатакующего комплекса (MAC) в нервно-мышечном соединении, что приводит к потере сигнальной трансдукции и в итоге мышечной слабости (Kusner LL, et al., 2012. Ann NY Acad Sci. 1274 (1): 127-32).

Кроме того, ингибирование C5 было подтверждено как цель для лечения рефрактерной gMG на основании клинических исследований с использованием C5-блокирующего антитела экулизумаба. Экулизумаб одобрен для применения при MG и 2 других редких заболеваниях, связанных с комплементом, пароксизмальной ночной гемоглобинурии (PNH) и атипичном гемолитико-уремическом синдроме (aHUS). В рандомизированном двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании фазы 2 экулизумаб испытывали на 14 анти-AChR аутоантитело-положительных пациентах с рефрактерной gMG, которые имели количественную оценку миастении (QMG) ≥ 12 и ранее получали лечение по меньшей мере 2 иммунодепрессантами (IST), которое оказалось неэффективным (Howard, JF. 2013. Myasthenia Gravis Foundation of America. Clinical Overview of MG, содержание которого полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки). Пациенты были рандомизированы в соотношении 1:1 для приема экулизумаба или плацебо. Пациенты, принимавшие экулизумаб, получали 600 мг в неделю в течение 4 недель, а затем по 900 мг каждые две недели путем внутривенной инфузии, в общей сложности в течение 16 недель лечения. После 5-недельного периода вымывания пациентов переводили в противоположную группу исследования. Пациенты, получавшие плацебо в течение первых 16 недель исследования, получали экулизумаб, и наоборот. Основными конечными точками были безопасность и эффективность, которые измеряли как процент пациентов, которые достигли снижения QMG на ≥ 3 балла. Влияние ингибирования C5 экулизумабом на QMG оценку происходило быстро (в течение 1 недели после начала лечения) и приводило к лучшим результатам применения экулизумаба по сравнению с плацебо при всех визитах исследования (p=0,0144). После первоначального 16-недельного периода лечения 6 из 7 пациентов, получавших экулизумаб, достигли улучшения QMG на ≥ 3 балла по сравнению с 4 из 7 пациентов в группе плацебо. Из тех пациентов, которые отвечали на экулизумаб, 4 достигли снижения QMG оценки на 8 баллов по сравнению с только 1 в группе плацебо.

QMG представляет собой стандартизированную и проверенную систему количественной оценки интенсивности, которая была разработана специально для MG и ранее использовалась в клинических испытаниях. Система оценки оценивает 13 параметров, относящихся к зрительной, бульбарной функции и функции конечностей (Barnet, C. et al. 2015. J Neuromuscul Dis. 2: 301-11). Каждый параметр оценивается по шкале от 0 до 3. Максимальная общая оценка составляет 39 баллов. Более высокие баллы соответствуют более тяжелому поражению. Последние данные показывают, что улучшение QMG оценки на 2-3 балла может считаться клинически значимым, в зависимости от тяжести заболевания [Barohn RJ et al. 1998. Ann N Y Acad Sci. 841:769-772; Katzberg HD et al. 2014. Muscle Nerve. 49(5):661-665].

Также было завершено исследование фазы 3 (NCT01997229), в котором участвовали 125 пациентов с положительным результатом на аутоантитела к AChR с оценкой по шкале Тяжелая Миастения-Повседневная Активность (MG-ADL) ≥ 6, которые ранее проходили оказавшееся неэффективным лечение с использованием 2 IST или 1 IST, и требовали хронического лечения с использованием плазмообмена или внутривенного иммуноглобулина. MG-ADL представляет собой быструю оценку по 8 параметрам, разработанную для оценки тяжести симптомов MG. Каждый параметр оценивается по шкале от 0 до 3. Максимальная общая оценка составляет 24 балла. Более высокие баллы связаны с более серьезными симптомами MG. Было показано, что MG-ADL коррелирует с другими утвержденными критериями оценки эффективности для MG (например, MG-QOL15r), а улучшение на 2 балла по шкале MG-ADL считается клинически значимым [Wolfe GI et al. 1999. Neurology. 52(7):1487-9; Muppidi S et al. 2011. Muscle Nerve. 44(5):727-31]. MG-QOL15r представляет собой оценку по 15 параметрам, которая была разработана для оценки качества жизни пациентов с MG на основе отчетов пациентов. Каждый параметр оценивается по шкале от 0 до 2. Максимальная общая оценка составляет 30 баллов. Более высокие баллы указывают на более серьезное влияние заболевания на аспекты жизни пациента [Burns, TM et al. 2010. Muscle Nerve. 41(2):219-26; Burns TM et al. 2016. Muscle Nerve. 54(6):1015-22].

Пациенты были рандомизированы 1:1 для приема плацебо или экулизумаба в течение 26-недельного периода лечения с последующим расширенным исследованием. Пациенты, получавшие экулизумаб, получали 900 мг в неделю в течение 4 недель с последующим введением 1200 мг каждые две недели путем в/в инфузии. Лечение экулизумабом не было связано со статистически значимым преимуществом по сравнению с плацебо в первичной конечной точке изменения MG-ADL по сравнению с исходным уровнем (p=0,0698) в этом исследовании. Тем не менее, статистически значимые результаты наблюдались в 18 из 22 заранее определенных анализов, включая вторичную конечную точку изменения оценки QMG от исходного уровня (p=0,0129). Взятые вместе, результаты этих двух клинических испытаний устанавливают, что ингибирование терминального каскада комплемента путем блокирования расщепления C5 является клинически подтвержденной мишенью для лечения gMG. Несмотря на отсутствие первичных конечных точек в исследовании фазы 3, экулизумаб был одобрен для лечения взрослых пациентов с MG с аутоантителами к AChR в США, ЕС и Японии в 2017 году на основе совокупности данных.

Связывание аутоантител к AChR с концевой пластинкой мышцы приводит к активации классического каскада комплемента и отложению МАК на постсинаптическом мышечном волокне, что приводит к локальному повреждению мышечной мембраны и снижению чувствительности мышцы к стимуляции нейроном. Ингибирование терминальной активности комплемента можно использовать для блокирования комплемент-опосредованного повреждения, связанного с MG (например, gMG и/или rMG). В некоторых вариантах осуществления описанные ингибиторы C5 можно использовать для лечения MG. Такие ингибиторы могут включать зилукоплан. Ингибирование расщепления C5 может предотвратить нисходящую сборку и активность MAC, например, в постсинаптических мембранах нервно-мышечных соединений пациента, и уменьшить или предотвратить нервно-мышечные проблемы, связанные с MG (например, gMG и/или rMG). В отличие от экулизумаба, зилукоплан связывается с C5b частью C5 и ингибирует расщепление до субъединиц C5a и C5b. Зилукоплан также связывает свободный C5b и предотвращает связывание с C6 и последующую сборку MAC. Соответственно, зилукоплан ингибирует сборку MAC через два разных механизма (см. Фиг. 1). Кроме того, зилукоплан специфически связывается с C5 и проявляет сильную и быструю ассоциацию с C5 в сочетании с низкой скоростью диссоциации.

Скрининг

Субъекты, принимающие лечение зилукопланом, могут пройти скрининг до введения зилукоплана. В контексте настоящей заявки термин “скрининг” относится к обзору или оценке, осуществляемым с целью выбора или фильтрации. Можно осуществить скрининг для выбора субъектов, нуждающихся в лечении. В некоторых вариантах осуществления изобретения субъекты проходят скрининг для выбора лиц, которые наиболее вероятно будут положительно отвечать на лечение. В некоторых вариантах осуществления изобретения скрининг осуществляют для исключения лиц с повышенным риском, связанным с лечением. Скрининг может включать балльную оценку по шкале QMG. Как описано ранее, QMG представляет собой стандартизированную и проверенную систему количественной оценки интенсивности, которая была разработана специально для MG и ранее использовалась в клинических испытаниях. Более высокие баллы свидетельствуют о более тяжелом поражении. Последние данные показывают, что улучшение оценки QMG на 2-3 балла может считаться клинически значимым, в зависимости от тяжести заболевания [Barohn RJ et al. 1998. Ann N Y Acad Sci. 841:769-772; Katzberg HD et al. 2014. Muscle Nerve. 49(5):661-665, содержание которого полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки]. В некоторых вариантах осуществления скрининг осуществляют для выбора субъектов с оценкой по шкале QMG ≥ 12. В некоторых вариантах осуществления выбранные субъекты имеют QMG оценки с ≥ 4 QMG оцениваемыми параметрами, достигающие ≥ 2 баллов.

Субъекты, получающие терапию MG до или во время скрининга, могут продолжать получать такую терапию в процесса скрининга, или может потребоваться, чтобы они воздержались от одного или нескольких видов лечения до или во время скрининга. В некоторых вариантах осуществления требуется период времени между предшествующей терапией MG и скрининговым обследованием. Период времени может потребоваться для получения надежных результатов конкретной скрининговой оценки. В некоторых вариантах осуществления субъекты, оцениваемые по шкале QMG, могут быть отстранены от терапии MG по меньшей мере за 10 часов до оценки по шкале QMG. Субъекты, оцениваемые по шкале QMG, могут быть отстранены от терапии ингибитором ацетилхолинэстеразы (например, лечения пиридостигмином) по меньшей мере за 10 часов до оценки по шкале QMG.

Скрининг может включать выбор субъектов в зависимости от возраста. В некоторых вариантах осуществления скрининг можно осуществлять для выбора субъектов в возрасте от 18 до 85 лет.

Скрининг может включать выбор субъектов, у которых ранее была диагностирована gMG. Диагноз gMG может быть установлен в соответствии с критериями Myasthenia Gravis Foundation of America (MGFA); Класс II-IVa (см. Howard, J.F., 2009. Myasthenia Gravis A Manual for the Health Care Provider, Myasthenia Gravis Foundation of America, Inc.)

Скрининг может включать оценку уровней биомаркеров. В некоторых вариантах осуществления биомаркеры включают уровни аутоантител к рецептору ацетилхолинэстеразы (AChR). Аутоантитела к AChR могут приводить к заболеванию, связывая AChR и стимулируя активацию комплемента. Соответственно, уровни аутоантител к AChR могут быть хорошим индикатором комплемент-опосредованного заболевания. В некоторых вариантах осуществления биомаркеры включают аутоантитела к мышечно-специфической тирозинкиназе (MuSK). Субъекты с антителами к MuSK являются частью отдельной подгруппы MG, ассоциируемой с менее предсказуемыми результатами лечения (Lavrnic, D. et al. 2005. J Neurol Neurosurg Psychiatry. 76: 1099-102). Скрининг может включать исключение субъектов с антителами к MuSK из лечения и/или оценок.

Скрининг может включать обзор предыдущего и текущего лечения субъекта. В некоторых вариантах осуществления пациенты проходят скрининг на основе недавних изменений в лечении. В некоторых вариантах осуществления пациенты проходят скрининг для подтверждения отсутствия изменений в дозе кортикостероидов или иммуносупрессорной терапии перед скринингом. Скрининг может исключать субъектов из лечения, у которых доза кортикостероидов или режим иммуносупрессорной терапии изменяются в течение 30 дней до скрининга.

Можно осуществить скрининг субъектов на беременность. В некоторых вариантах осуществления беременные могут быть исключены из лечения. Скрининг статуса беременности можно осуществлять на основании сывороточного теста на беременность. В некоторых вариантах осуществления изобретения скрининг на беременность может включать анализ мочи на беременность.

В некоторых вариантах осуществления скрининг можно осуществлять для выявления субъектов со стадией MG, которая возникает до достижения критической или кризисной стадии. Такой скрининг можно осуществлять для выявления субъектов до развития MG или на ранней стадии процесса заболевания, которым может помочь упреждающее или профилактическое лечение.

Лечение зилукопланом

Зилукоплан ингибирует образование C5a дозозависимым образом при активации классического пути и ингибирует образование C5b (как измерено по C5b-9 или MAC отложению на комплемент- активирующей поверхности) при активации классического и альтернативного пути комплемента. (Патент США № 9937222).

В некоторых вариантах осуществления способы по настоящему изобретению включают способы лечения MG путем введения зилукоплана субъекту. Лечение MG может включать gMG. Введение зилукоплана может представлять собой подкожное (п/к) введение. Зилукоплан можно вводить при дозе от около 0,01 мг/кг (мг зилукоплана/кг массы тела субъекта) до около 1,0 мг/кг, от около 0,02 мг/кг до около 2,0 мг/кг, от около 0,05 мг/кг до около 3,0 мг/кг, от около 0,10 мг/кг до около 4,0 мг/кг, от около 0,15 мг/кг до около 4,5 мг/кг, от около 0,20 мг/кг до около 5,0 мг/кг, от около 0,30 мг/кг до около 7,5 мг/кг, от около 0,40 мг/кг до около 10 мг/кг, от около 0,50 мг/кг до около 12,5 мг/кг, от около 0,1 мг/кг до около 0,6 мг/кг, от около 1,0 мг/кг до около 15 мг/кг, от около 2,0 мг/кг до около 20 мг/кг, от около 5,0 мг/кг до около 25 мг/кг, от около 10 мг/кг до около 45 мг/кг, от около 20 мг/кг до около 55 мг/кг, от около 30 мг/кг до около 65 мг/кг, от около 40 мг/кг до около 75 мг/кг, от около 50 мг/кг до около 150 мг/кг, от около 100 мг/кг до около 250 мг/кг, от около 200 мг/кг до около 350 мг/кг, от около 300 мг/кг до около 450 мг/кг, от около 400 мг/кг до около 550 мг/кг или от около 500 мг/кг до около 1000 мг/кг.

В некоторых вариантах осуществления зилукоплан можно вводить при дозе от около 0,10 мг/кг до около 0,42 мг/кг.

Способы по настоящему изобретению могут включать введение зилукоплана при суточной дозе от около 0,1 мг/кг до около 0,3 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления зилукоплан вводят при суточной дозе 0,3 мг/кг. QMG оценка у субъекта и/или MG-ADL оценка может снижаться в результате введения. QMG оценка может снижаться на ≥ 3 балла через 8 недель лечения. MG-ADL оценка может снижаться на ≥ 2 балла через 8 недель лечения. Риск необходимости вспомогательной резервной терапии (IVIG или плазмообмена) может снижаться.

Введение зилукоплана можно осуществлять самостоятельно. Введение зилукоплана может включать использование предварительно заполненных шприцов. Самостоятельное введение может включать использование устройств для самостоятельного введения. Устройства для самостоятельного введения могут включать, или могут быть включены в, предварительно заполненные шприцы.

Зилукоплан может обеспечиваться в растворе. Растворы зилукоплана могут включать водные растворы. Растворы зилукоплана могут включать фосфатно-солевой буферный раствор (PBS). Растворы зилукоплана могут не содержать консервантов. Зилукоплан может присутствовать в растворах при концентрации от около 0,01 мг/мл до около 1 мг/мл, от около 0,05 мг/мл до около 2 мг/мл, от около 1 мг/мл до около 5 мг/мл, от около 2 мг/мл до около 10 мг/мл, от около 4 мг/мл до около 16 мг/мл, от около 5 мг/мл до около 20 мг/мл, от около 8 мг/мл до около 24 мг/мл, от около 10 мг/мл до около 30 мг/мл, от около 12 мг/мл до около 32 мг/мл, от около 14 мг/мл до около 34 мг/мл, от около 16 мг/мл до около 36 мг/мл, от около 18 мг/мл до около 38 мг/мл, от около 20 мг/мл до около 40 мг/мл, от около 22 мг/мл до около 42 мг/мл, от около 24 мг/мл до около 44 мг/мл, от около 26 мг/мл до около 46 мг/мл, от около 28 мг/мл до около 48 мг/мл, от около 30 мг/мл до около 50 мг/мл, от около 35 мг/мл до около 55 мг/мл, от около 40 мг/мл до около 60 мг/мл, от около 45 мг/мл до около 75 мг/мл, от около 50 мг/мл до около 100 мг/мл, от около 60 мг/мл до около 200 мг/мл, от около 70 мг/мл до около 300 мг/мл, от около 80 мг/мл до около 400 мг/мл, от около 90 мг/мл до около 500 мг/мл или от около 100 мг/мл до около 1000 мг/мл.

В некоторых вариантах осуществления устройства для самостоятельного введения включают растворы зилукоплана. Устройства для самостоятельного введения могут включать растворы зилукоплана в объеме от около 0,010 мл до около 0,500 мл, от около 0,050 мл до около 0,600 мл, от около 0,100 мл до около 0,700 мл, от около 0,150 мл до около 0,810 мл, от около 0,200 мл до около 0,900 мл, от около 0,250 мл до около 1,00 мл, от около 0,300 мл до около 3,00 мл, от около 0,350 мл до около 3,50 мл, от около 0,400 мл до около 4,00 мл, от около 0,450 мл до около 4,50 мл, от около 0,500 мл до около 5,00 мл, от около 0,550 мл до около 10,0 мл, от около 0,600 мл до около 25,0 мл, от около 0,650 мл до около 50,0 мл, от около 0,700 мл до около 60,0 мл, от около 0,750 мл до около 75,0 мл, от около 0,800 мл до около 80,0 мл, от около 0,850 мл до около 85,0 мл, от около 0,900 мл до около 90,0 мл, от около 0,950 мл до около 95,0 мл, от около 1,00 мл до около 100 мл, от около 2,00 мл до около 200 мл, от около 5,00 мл до около 500 мл, от около 10,0 мл до около 750 мл, от около 25,0 мл до около 800 мл, от около 50,0 мл до около 900 мл или от около 100 мл до около 1000 мл.

Зилукоплан можно вводить непрерывно или в одной или нескольких дозах. В некоторых вариантах осуществления лечение осуществляют путем введения доз ежечасно, ежедневно, два раза в день, раз в неделю, два раза в неделю, раз в месяц, или используя комбинацию вышеуказанных введений. Лечение зилукопланом может включать ежедневное введение. Уровни зилукоплана в плазме у субъекта могут достигать максимальной концентрации (C_max) в первый день лечения. Гемолиз в сыворотке может ингибироваться лечением зилукопланом. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере 90% ингибирование гемолиза достигается в сыворотке субъекта при лечении зилукопланом. В период введения субъекты могут получать стандартное лечение gMG. Стандартное лечение MG может включать, но не ограничивается этим, плазмообмен, внутривенное введение иммуноглобулина (IVIG), биологические препараты (например, ритуксимаб или экулизумаб), лечение пиридостигмином, лечение кортикостероидами и/или лечение иммуносупрессантами. В некоторых вариантах осуществления субъекты получают лечение ингибитором холинэстеразы в процессе лечения зилукопланом.

Лечение зилукопланом для MG можно применять для различных пациентов с разными демографическими характеристиками и стадиями заболевания. Лечение можно осуществлять для пациентов с рефрактерной (резистентной или невосприимчивой к другим стандартным терапиям) или нерефрактерной MG. Рефрактерные субъекты могут включать субъектов, которые были резистентны или не отвечали на предшествующую терапию экулизумабом.

В некоторых вариантах осуществления пациентов со стадией MG, которая возникает до достижения критической или кризисной стадии, лечат зилукопланом. Такое лечение можно применять для лечения субъектов до развития MG или на ранней стадии процесса заболевания, чтобы обеспечить преимущества упреждающего или профилактического лечения.

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает зилукоплан для применения в способе лечения MG, включающем введение субъекту 0,1-0,3 мг/кг зилукоплана подкожно или внутривенно. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает зилукоплан для применения в способе лечения MG, включающем введение субъекту 0,1 мг/кг или 0,3 мг/кг зилукоплана подкожно или внутривенно. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает зилукоплан для применения в способе лечения MG, включающем введение субъекту 0,1 мг/кг или 0,3 мг/кг зилукоплана подкожно. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает зилукоплан для применения в способе лечения MG, включающем введение субъекту 0,3 мг/кг зилукоплана подкожно. В некоторых вариантах осуществления MG представляет собой gMG. В некоторых вариантах осуществления субъект является положительным на аутоантитела к AChR.

Оценка

У субъектов, получающих лечение MG зилукопланом, можно оценить эффективность во время или после лечения. В контексте настоящей заявки термин “принимающий лечение субъект” относится к субъекту, который прошел по меньшей мере одно лечение. Оценка субъекта, получавшего лечение Зилукопланом, может включать оценку одного или нескольких показателей эффективности. В некоторых вариантах осуществления для оценки может потребоваться приостановка лечения субъекта на определенный период для оценки. Некоторые оценки могут потребовать от субъектов поддерживать последовательное лечение до, во время и/или после оценок. Приостановленное или поддерживаемое лечение может представлять собой лечение зилукопланом. В некоторых вариантах осуществления приостановленное или поддерживаемое лечение включает другие методы лечения MG или не связанных с MG состояний.

Оценку можно осуществлять для оценки первичных конечных точек эффективности. В контексте настоящей заявки термин “первичная конечная точка” относится к результату, который отвечает на наиболее важный вопрос, рассматриваемый в конкретном исследовании. Термин “вторичная конечная точка” относится к результату, который отвечает на другие соответствующие вопросы, подчиненные основному вопросу. Первичная конечная точка эффективности представляет собой результат, который определяет, является ли лечение эффективным, в то время как вторичная конечная точка эффективности касается одного или нескольких периферический вопросов (например, влияние на качество жизни, серьезность побочных эффектов и т.д.).

Оценки можно осуществить для оценки характеристик рассматриваемой MG. В контексте настоящей заявки термин “характеристика MG” относится к физическому или психическому признаку или набору признаков, связанных с наличием или серьезностью MG у субъекта. Характеристики MG могут включать балльные оценки, полученные с использованием различных методов оценки заболевания. Характеристики MG могут включать, но не ограничиваются этим, QMG оценку, MG-ADL оценку, MG-QOL15r оценку и суммарную оценку MG. В некоторых вариантах осуществления у субъектов можно отслеживать характеристики MG с течением времени. Такой мониторинг можно осуществлять на протяжении периода заболевания MG. Мониторинг можно осуществлять на протяжении периода лечения заболевания. В некоторых вариантах осуществления изобретения оценку или мониторинг субъекта осуществляют для оценки изменений характеристик MG во время или после лечения субъекта зилукопланом.

В некоторых вариантах осуществления у субъектов, получающих лечение зилукопланом, определяют или контролируют оценку по шкале QMG. Как описано ранее, QMG представляет собой стандартизированную и проверенную систему количественной оценки интенсивности, которая была разработана специально для MG и ранее использовалась в клинических испытаниях. Система оценки оценивает 13 параметров, относящихся к зрительной, бульбарной функции и функции конечностей (Barnet, C. et al. 2015. J Neuromuscul Dis. 2: 301-11). Каждый параметр оценивается по шкале от 0 до 3. Максимальная общая оценка составляет 39 баллов. Более высокие баллы соответствуют более тяжелому поражению. Последние данные показывают, что улучшение QMG оценки на 2-3 балла может считаться клинически значимым, в зависимости от тяжести заболевания [Barohn RJ et al. 1998. Ann N Y Acad Sci. 841:769-772; Katzberg HD et al. 2014. Muscle Nerve. 49(5):661-665, содержание которого полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки]. Субъекты, оцениваемые по количеству баллов QMG, могут быть отстранены от терапии MG по меньшей мере за 10 часов до процедуры QMG оценки. Терапия MG может включать терапию ингибитором ацетилхолинэстеразы (например, лечение пиридостигмином) за по меньшей мере 10 часов до оценки по шкале QMG.

В некоторых вариантах осуществления изменение оценки по шкале QMG может быть первичной конечной точкой эффективности. Оценка QMG у получавшего лечение субъекта может снижаться. Оценка QMG может снижаться по меньшей мере на 3 балла. Оценка QMG может снижаться через 12 недель лечения зилукопланом или ранее. Оценку QMG у получавшего лечение субъекта можно отслеживать в течение курса лечения зилукопланом.

В некоторых вариантах осуществления изобретения оценки у получавшего зилукоплан субъекта могут включать тестирование и/или отслеживание одной или нескольких из MG-ADL оценки, MG-QOL15r оценки и суммарной оценки MG. Такие балльные оценки могут расцениваться как вторичные конечные точки эффективности. Как объяснялось ранее, MG-ADL представляет собой быструю оценку по 8 параметрам, разработанную для оценки тяжести симптомов MG. Каждый параметр оценивается по шкале от 0 до 3. Максимальная общая оценка составляет 24 балла. Более высокие баллы связаны с более серьезными симптомами MG. Было показано, что MG-ADL коррелирует с другими утвержденными критериями оценки эффективности для MG (например, MG-QOL15r), а улучшение на 2 балла по шкале MG-ADL считается клинически значимым [Wolfe GI et al. 1999. Neurology. 52(7):1487-9; Muppidi S et al. 2011. Muscle Nerve. 44(5):727-31], содержание которых полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки]. MG-QOL15r, как объяснялось ранее, представляет собой оценку по 15 параметрам, которая была разработана для оценки качества жизни пациентов с MG на основе отчетов пациентов. Каждый параметр оценивается по шкале от 0 до 2. Максимальная общая оценка составляет 30 баллов. Более высокие баллы указывают на более серьезное влияние заболевания на аспекты жизни пациента [Burns, TM et al. 2010. Muscle Nerve. 41(2):219-26; Burns TM et al. 2016. Muscle Nerve. 54(6):1015-22, содержание которых полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки]. Суммарная оценка MG представляет собой шкалу оценки по 10 параметрам, которая использовалась для измерения клинического статуса пациентов с MG, как в условиях практики, так и в клинических испытаниях, чтобы оценить ответ на лечение (Burns, TM et al., 2008. Muscle Nerve. 38: 1553-62). Оцениваются 10 параметров, связанных со зрительной, бульбарной, дыхательной функцией, функцией шеи и конечностей. Параметры взвешены, с баллами от 0 до 9. Максимальный общий балл составляет 50. Более высокие баллы при суммарной оценке MG указывают на более серьезное нарушение, вызванное заболеванием. Изменение на 3 балла в этой оценке считается клинически значимым [Burns, T.M. et al. 2010. Neurology. 74(18): 1434-40; Sadjadi, DB et al. 2012. Neurology. 2016;87(4):419-425, содержание которых включено в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте].

Тестирование или отслеживание MG-ADL, MG-QOL15r оценки и/или суммарной оценки MG можно использовать для выявления изменений по сравнению с исходной оценкой. В контексте настоящей заявки термин “исходная оценка” относится к оценке, полученной до начального лечения. Исходные оценки могут представлять собой оценки, полученные при переключении с одного лечения на другое. Переключение может быть с плацебо на активное фармацевтическое соединение. В некоторых вариантах осуществления лечение зилукопланом можно оценивать по снижению MG-ADL оценки по меньшей мере на 2 балла. Снижение может произойти через 12 недель лечения зилукопланом или раньше. В некоторых вариантах осуществления лечение зилукопланом можно оценивать по снижению суммарной оценки MG по меньшей мере на 3 балла. Снижение может произойти через 12 недель лечения зилукопланом или раньше.

В некоторых вариантах осуществления лечение зилукопланом приводит к снижению выраженности симптомов у субъекта. Уменьшение выраженности симптомов у субъекта может превышать снижение выраженности симптомов у субъекта, связанное с введением экулизумаба.

Методы оценки

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает способы оценки лечения MG. Такие способы могут включать скрининг кандидатов для оценки на соответствие по меньшей мере одному критерию участия в оценке. В контексте настоящей заявки термин “кандидат для оценки” относится к любому субъекту, рассматриваемому для участия в оценке (например, в клиническом исследовании). “Критерии участия в оценке” относится к критерию или фактору, используемому для выбора субъектов для включения в оценку. Кандидаты для оценки, выбранные для участия в оценке, указаны в настоящей заявке как “участники оценки”. В некоторых вариантах осуществления способы оценки лечения MG могут включать скрининг кандидата для оценки на соответствие по меньшей мере одному критерию участия в оценке; выбор участника оценки; введение лечения MG участнику оценки; и оценку по меньшей мере одной конечной точки эффективности.

В некоторых вариантах осуществления критерии участия в оценке включают диагноз MG. Диагноз MG может включать диагноз gMG. Диагноз gMG может быть поставлен в соответствии с критериями MGFA. В некоторых вариантах осуществления критерии участия в оценке включают QMG оценку. Выбор участников оценки может потребовать QMG оценок ≥ 12 у кандидатов для оценки. Некоторые кандидаты для оценки могли получать по меньшей мере одно альтернативное лечение MG (т.е. альтернативное испытываемому лечению MG, такое как стандартное лечение) перед скринингом. В некоторых вариантах осуществления у таких кандидатов можно определить QMG оценку по меньшей мере через 10 часов после самого последнего альтернативного лечения MG. Альтернативные лечения MG могут включать стандартное лечение MG, включая, но не ограничиваясь этим, лечение ингибитором холинэстеразы, лечение ингибитором ацетилхолинэстеразы, лечение пиридостигмином, лечение кортикостероидами и лечение иммуносупрессантами. Выбор участника оценки может потребовать оценки ≥ 2 для ≥ 4 QMG исследуемых параметров.

В некоторых вариантах осуществления критерии участия в оценке включают оценку возраста кандидата. В некоторых вариантах осуществления возраст кандидатов для оценки должен быть от 18 до 85 лет.

Критерии участия в оценке могут включать уровни биомаркеров у кандидата. В некоторых вариантах осуществления биомаркеры включают уровни аутоантител к рецептору ацетилхолинэстеразы (AChR). Аутоантитела к AChR могут привести к заболеванию, связываясь с AChR и стимулируя активацию комплемента. Соответственно, уровни аутоантител к AChR могут быть хорошим индикатором подверженности комплемент-опосредованному заболеванию.

Критерии участия в оценке могут включать статус кандидата, связанный с предыдущими и текущими альтернативными лечениями MG. В некоторых вариантах осуществления участников оценки выбирают на основе совместимости текущих или предыдущих альтернативных лечений MG. В некоторых вариантах осуществления выбирают кандидатов, у которых в последнее время не было изменений доз кортикостероидов или иммуносупрессорной терапии. Кандидаты, у которых изменилась доза кортикостероидов или режим иммуносупрессорной терапии в течение последних 30 дней, могут быть исключены из участия в оценке.

Критерии участия в оценке могут включать статус беременности. В некоторых вариантах осуществления беременные субъекты могут быть исключены из участия в оценке. Скрининг статуса беременности можно осуществлять на основании сывороточного теста на беременность. В некоторых вариантах осуществления скрининг на беременность может включать анализ мочи на беременность.

Способы оценки лечений MG могут включать введение лечений MG участникам оценки в течение периода оценки. В контексте настоящей заявки термин “период оценки” относится к периоду времени, в течение которого осуществляют конкретное исследование. Лечения можно вводить в течение периодов оценки от около одного дня до около 24 недель. Некоторые периоды оценки составляют около 12 недель или больше. Участники оценки могут продолжать получать стандартное лечение gMG в периоды оценки. Такие лечения могут включать, но не ограничиваются этим, лечение ингибитором холинэстеразы, лечение ингибитором ацетилхолинэстеразы, лечение пиридостигмином, лечение кортикостероидами и/или лечение иммуносупрессантами.

Конечные точки эффективности могут включать некоторые балльные оценки или изменения оценок, которые связаны с оценками для субъектов с MG. Такие оценки могут включать, но не ограничиваются этим, QMG оценку, MG-ADL оценку, MG-QOL15r оценку и суммарную оценку MG. В некоторых вариантах осуществления конечные точки эффективности включают снижение QMG оценки. Конечные точки эффективности могут включать уменьшения QMG оценки по меньшей мере на 3 балла. Для участников оценки получающих альтернативные лечения MG (например, лечение ингибитором ацетилхолинэстеразы) в период оценки, одно или несколько из этих лечений можно отложить на по меньшей мере 10 часов перед определением QMG оценки. В некоторых вариантах осуществления конечные точки эффективности включают снижение одной или нескольких из MG-ADL оценки, MG-QOL15r оценки и суммарной оценки MG по сравнению с исходной оценкой. Конечные точки эффективности могут включать снижение MG-ADL оценки на 2 балла по сравнению с исходной оценкой. Снижение MG-ADL оценки может произойти через 12 недель лечения MG или раньше.

В некоторых вариантах осуществления оценка конечных точек эффективности включает ряд оценок. Ряд оценок можно осуществлять с определенном порядке. В некоторых вариантах осуществления ряд оценок осуществляют в следующем порядке: (1) определение балла по шкале MG-QOL15r для участника оценки; (2) определение балла по шкале MG-ADL для участника оценки; (3) определение балла по шкале QMG для участника оценки; и (4) определение суммарной оценки MG для участника оценки.

Оценки конечных точек эффективности можно осуществлять один или несколько раз после введения лечений MG. Такие оценки можно осуществлять в определенные моменты времени и/или дни или можно осуществлять на периодической основе (например, ежечасно, ежедневно, раз в неделю, раз в месяц, или используя комбинацию вышеуказанных введений). В некоторых вариантах осуществления оценки осуществляют через 1 неделю, 2 недели, 4 недели, 8 недель и/или 12 недель после начала введения лечений MG.

Композиции

В некоторых вариантах осуществления соединения или композиции, например фармацевтические композиции, по настоящему изобретению формулируют в виде водных растворов. В некоторых случаях водные растворы также включают одну или несколько солей и/или один или несколько буферных агентов. Соли могут включать хлорид натрия, который может быть включен при концентрациях от около 0,05 мМ до около 50 мМ, от около 1 мМ до около 100 мМ, от около 20 мМ до около 200 мМ или от около 50 мМ до около 500 мМ. Другие растворы могут включать по меньшей мере 500 мМ хлорида натрия. В некоторых случаях водные растворы включают фосфат натрия. Фосфат натрия может быть включен в водные растворы при концентрации от около 0,005 мМ до около 5 мМ, от около 0,01 мМ до около 10 мМ, от около 0,1 мМ до около 50 мМ, от около 1 мМ до около 100 мМ, от около 5 мМ до около 150 мМ или от около 10 мМ до около 250 мМ. В некоторых случаях используют концентрации фосфата натрия по меньшей мере 250 мМ.

Композиции по настоящему изобретению могут включать ингибиторы C5 при концентрации от около 0,001 мг/мл до около 0,2 мг/мл, от около 0,01 мг/мл до около 2 мг/мл, от около 0,1 мг/мл до около 10 мг/мл, от около 0,5 мг/мл до около 5 мг/мл, от около 1 мг/мл до около 20 мг/мл, от около 15 мг/мл до около 40 мг/мл, от около 25 мг/мл до около 75 мг/мл, от около 50 мг/мл до около 200 мг/мл или от около 100 мг/мл до около 400 мг/мл. В некоторых случаях композиции включают ингибиторы C5 при концентрации по меньшей мере 400 мг/мл.

Композиции по настоящему изобретению могут включать ингибиторы C5 при концентрации, приблизительно, около или точно соответствующей любому из следующих значений: 0,001 мг/мл, 0,2 мг/мл, 0,01 мг/мл, 2 мг/мл, 0,1 мг/мл, 10 мг/мл, 0,5 мг/мл, 5 мг/мл, 1 мг/мл, 20 мг/мл, 15 мг/мл, 40 мг/мл, 25 мг/мл, 75 мг/мл, 50 мг/мл, 200 мг/мл, 100 мг/мл, или 400 мг/мл. В некоторых случаях композиции включают ингибиторы C5 при концентрации по меньшей мере 40 мг/мл.

В некоторых вариантах осуществления композиции по настоящему изобретению включают водные композиции, включающие по меньшей мере воду и ингибитор C5 (например, циклический полипептид, являющийся ингибитором C5). Водные композиции ингибитора C5 также могут включать одну или несколько солей и/или один или несколько буферных агентов. В некоторых случаях водные композиции включают воду, циклический полипептидный ингибитор C5, соль и буферный агент.

Водные композиции ингибитора могут иметь уровни pH от около 2,0 до около 3,0, от около 2,5 до около 3,5, от около 3,0 до около 4,0, от около 3,5 до около 4,5, от около 4,0 до около 5,0, от около 4,5 до около 5,5, от около 5,0 до около 6,0, от около 5,5 до около 6,5, от около 6,0 до около 7,0, от около 6,5 до около 7,5, от около 7,0 до около 8,0, от около 7,5 до около 8,5, от около 8,0 до около 9,0, от около 8,5 до около 9,5 или от около 9,0 до около 10,0.

В некоторых случаях соединения и композиции по настоящему изобретению получают в соответствии с правилами правильного производства (GMP) и/или существующими GMP (cGMP). Руководство по внедрению GMP и/или cGMP можно найти в одном или более из US Food and Drug Administration (FDA), World Health Organization (WHO) и International Conference on Harmonization (ICH).

Дозировка и введение

Для лечения человека ингибиторы C5 (например, зилукоплан и/или его активные метаболиты или варианты) можно сформулировать в виде фармацевтических композиций. В зависимости от субъекта, подлежащего лечению, способа введения и желаемого вида лечения (например, предотвращение, профилактика или терапия) ингибиторы C5 можно сформулировать в соответствии с этими параметрами. Обзор таких методов можно найти в Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Lippincott Williams & Wilkins, (2005); и Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York, каждый из которых включен в настоящую заявку посредством ссылки.

Ингибиторы C5 (например, зилукоплан и/или его активные метаболиты или варианты) могут обеспечиваться в терапевтически эффективном количестве. В некоторых случаях терапевтически эффективное количество ингибитора C5 может достигаться путем введения дозы от около 0,1 мг до около 1 мг, от около 0,5 мг до около 5 мг, от около 1 мг до около 20 мг, от около 5 мг до около 50 мг, от около 10 мг до около 100 мг, от около 20 мг до около 200 мг, или по меньшей мере 200 мг одного или нескольких ингибиторов C5.

В некоторых вариантах осуществления субъектам можно вводить терапевтическое количество ингибитора C5 (например, зилукоплана и/или его активных метаболитов или вариантов) на основании массы тела таких субъектов. В некоторых случаях ингибиторы C5 вводят при дозе от около 0,001 мг/кг до около 1,0 мг/кг, от около 0,01 мг/кг до около 2,0 мг/кг, от около 0,05 мг/кг до около 5,0 мг/кг, от около 0,03 мг/кг до около 3,0 мг/кг, от около 0,01 мг/кг до около 10 мг/кг, от около 0,1 мг/кг до около 2,0 мг/кг, от около 0,2 мг/кг до около 3,0 мг/кг, от около 0,4 мг/кг до около 4,0 мг/кг, от около 1,0 мг/кг до около 5,0 мг/кг, от около 2,0 мг/кг до около 4,0 мг/кг, от около 1,5 мг/кг до около 7,5 мг/кг, от около 5,0 мг/кг до около 15 мг/кг, от около 7,5 мг/кг до около 12,5 мг/кг, от около 10 мг/кг до около 20 мг/кг, от около 15 мг/кг до около 30 мг/кг, от около 20 мг/кг до около 40 мг/кг, от около 30 мг/кг до около 60 мг/кг, от около 40 мг/кг до около 80 мг/кг, от около 50 мг/кг до около 100 мг/кг или по меньшей мере 100 мг/кг. Такие диапазоны могут включать диапазоны, подходящие для введения человеку. Уровни доз могут сильно зависеть от природы состояния; эффективности лекарственного средства; состояния пациента; суждения лечащего врача; и частоты и способа введения. В некоторых вариантах осуществления зилукоплан и/или его активные метаболиты или варианты можно вводить при дозе от около 0,01 мг/кг до около 10 мг/кг. В некоторых случаях зилукоплан и/или его активные метаболиты или варианты можно вводить при дозе от около 0,1 мг/кг до около 3 мг/кг.

В некоторых случаях ингибиторы C5 (например, зилукоплан и/или его активные метаболиты или варианты) обеспечиваются при концентрациях, скорректированных для достижения желаемого уровня ингибитора C5 в образце, биологической системе или организме субъекта (например, уровня в плазме у субъекта). В некоторых случаях желаемые концентрации ингибиторов C5 в образце, биологической системе или в организме субъекта могут включать концентрации от около 0,001 мкМ до около 0,01 мкМ, от около 0,005 мкМ до около 0,05 мкМ, от около 0,02 мкМ до около 0,2 мкМ, от около 0,03 мкМ до около 0,3 мкМ, от около 0,05 мкМ до около 0,5 мкМ, от около 0,01 мкМ до около 2,0 мкМ, от около 0,1 мкМ до около 50 мкМ, от около 0,1 мкМ до около 10 мкМ, от около 0,1 мкМ до около 5 мкМ, от около 0,2 мкМ до около 20 мкМ, от около 5 мкМ до около 100 мкМ или от около 15 мкМ до около 200 мкМ. В некоторых случаях желаемые концентрации ингибиторов C5 в плазме субъекта могут быть от около 0,1 мкг/мл до около 1000 мкг/мл. Желаемая концентрация ингибиторов C5 в плазме субъекта может быть от около 0,01 мкг/мл до около 2 мкг/мл, от около 0,02 мкг/мл до около 4 мкг/мл, от около 0,05 мкг/мл до около 5 мкг/мл, от около 0,1 мкг/мл до около 1,0 мкг/мл, от около 0,2 мкг/мл до около 2,0 мкг/мл, от около 0,5 мкг/мл до около 5 мкг/мл, от около 1 мкг/мл до около 5 мкг/мл, от около 2 мкг/мл до около 10 мкг/мл, от около 3 мкг/мл до около 9 мкг/мл, от около 5 мкг/мл до около 20 мкг/мл, от около 10 мкг/мл до около 40 мкг/мл, от около 30 мкг/мл до около 60 мкг/мл, от около 40 мкг/мл до около 80 мкг/мл, от около 50 мкг/мл до около 100 мкг/мл, от около 75 мкг/мл до около 150 мкг/мл или по меньшей мере 150 мкг/мл. В других вариантах осуществления ингибиторы C5 вводят при дозе, достаточной для достижения максимальной концентрации в сыворотке (C_max) по меньшей мере 0,1 мкг/мл, по меньшей мере 0,5 мкг/мл, по меньшей мере 1 мкг/мл, по меньшей мере 5 мкг/мл, по меньшей мере 10 мкг/мл, по меньшей мере 50 мкг/мл, по меньшей мере 100 мкг/мл или по меньшей мере 1000 мкг/мл.

В некоторых вариантах осуществления ингибиторы C5 (например, зилукоплан и/или его активные метаболиты или варианты) вводят ежедневно при дозе, достаточной для доставки от около 0,1 мг/день до около 60 мг/день на кг массы тела субъекта. В некоторых случаях C_max, достигаемая при каждой дозе, составляет от около 0,1 мкг/мл до около 1000 мкг/мл. В таких случаях площадь под кривой (AUC) между дозами может быть от около 200 мкг*ч/мл до около 10000 мкг*ч/мл.

В соответствии с некоторыми способами по настоящему изобретению, ингибиторы C5 (например, зилукоплан и/или его активные метаболиты или варианты) обеспечиваются в концентрациях, необходимых для достижения желаемого эффекта. В некоторых случаях соединения и композиции по настоящему изобретению обеспечиваются в количестве, необходимом для уменьшения наполовину данной реакции или процесса. Концентрация, необходимая для достижения такого снижения, называется здесь полумаксимальной ингибирующей концентрацией или “IC₅₀”. Альтернативно, соединения и композиции по настоящему изобретению могут обеспечиваться в количестве, необходимом для увеличения данной реакции, активности или процесса наполовину. Концентрация, необходимая для такого увеличения, называется здесь полумаксимальной эффективной концентрацией или “ЕС₅₀”

Ингибиторы C5 (например, зилукоплан и/или его активные метаболиты или их варианты) могут присутствовать в количествах, составляющих 0,1-95% по массе от общей массы композиции. В некоторых случаях ингибиторы C5 обеспечиваются путем внутривенного (в/в) введения. В некоторых случаях ингибиторы C5 обеспечиваются путем подкожного (п/к) введения.

П/к введение ингибиторов С5 (например, зилукоплана и/или его активных метаболитов или их вариантов) в некоторых случаях может обеспечить преимущества по сравнению с внутривенным введением. П/к введение может включать самостоятельное введение с использованием устройства для введения, такого как устройство для самостоятельного введения. В контексте настоящей заявки термин “самостоятельное введение” относится к любой форме терапевтической доставки, которая полностью или частично осуществляется реципиентом терапевтического лечения. Устройства для самостоятельного введения могут включать устройства для самостоятельного введения инъекций. Самостоятельное введение может быть выгодным, так как пациенты могут сами себя лечить у себя дома, избегая необходимости ездить к предоставляющему услуги лицу или в медицинское учреждение. Кроме того, п/к лечение может позволить пациентам избежать долгосрочных осложнений, связанных с в/в введением, таких как инфекции, потеря венозного доступа, местный тромбоз и гематомы. В некоторых вариантах осуществления изобретения самостоятельное введение с использованием устройства для самостоятельного введения инъекции может повысить комплаентность пациента, его удовлетворенность, качество жизни, снизить затраты на лечение и/или потребность в лекарственных средствах.

В некоторых случаях ежедневное п/к введение обеспечивает стабильные концентрации ингибитора C5, которые достигаются в пределах 1-3 доз, 2-3 доз, 3-5 доз или 5-10 доз. В некоторых случаях ежедневные п/к дозы от около 0,1 мг/кг до около 0,3 мг/кг могут обеспечить устойчивые уровни ингибитора C5, превышающие или равные 2,5 мкг/мл, и/или ингибирование активности комплемента более чем на 90%.

Ингибиторы C5 (например, зилукоплан и/или его активные метаболиты или их варианты) могут демонстрировать медленную кинетику абсорбции (время до максимальной наблюдаемой концентрации более 4-8 часов) и высокую биодоступность (от около 75% до около 100%) после п/к введения.

В некоторых вариантах осуществления дозу и/или введение изменяют для модуляции времени полужизни (t_1/2) ингибитора C5 у субъекта или в жидкостях (например, в плазме) субъекта. В некоторых случаях t_1/2 составляет по меньшей мере 1 час, по меньшей мере 2 часа, по меньшей мере 4 часа, по меньшей мере 6 часов, по меньшей мере 8 часов, по меньшей мере 10 часов, по меньшей мере 12 часов, по меньшей мере 16 часов, по меньшей мере 20 часов, по меньшей мере 24 часа, по меньшей мере 36 часов, по меньшей мере 48 часов, по меньшей мере 60 часов, по меньшей мере 72 часа, по меньшей мере 96 часов, по меньшей мере 5 дней, по меньшей мере 6 дней, по меньшей мере 7 дней, по меньшей мере 8 дней, по меньшей мере 9 дней, по меньшей мере 10 дней, по меньшей мере 11 дней, по меньшей мере 12 дней, по меньшей мере 2 недели, по меньшей мере 3 недели, по меньшей мере 4 недели, по меньшей мере 5 недель, по меньшей мере 6 недель, по меньшей мере 7 недель, по меньшей мере 8 недель, по меньшей мере 9 недель, по меньшей мере 10 недель, по меньшей мере 11 недель, по меньшей мере 12 недель или по меньшей мере 16 недель.

В некоторых вариантах осуществления ингибиторы C5 (например, зилукоплан и/или его активные метаболиты или варианты) могут иметь длинное конечное t_1/2. Увеличенное конечное t_1/2 может быть следствием обширного связывания мишени и/или дополнительного связывания с белками плазмы. В некоторых случаях ингибиторы C5 показывают значения t_1/2 более 24 часов как в плазме, так и в цельной крови. В некоторых случаях ингибиторы C5 не теряют функциональной активности после инкубации в цельной крови человека при 37°C в течение 16 часов.

В некоторых вариантах осуществления дозу и/или введение изменяют для модуляции объема распределения ингибиторов C5 в равновесном состоянии. В некоторых случаях объем распределения ингибиторов C5 в равновесном состоянии составляет от около 0,1 мл/кг до около 1 мл/кг, от около 0,5 мл/кг до около 5 мл/кг, от около 1 мл/кг до около 10 мл/кг, от около 5 мл/кг до около 20 мл/кг, от около 15 мл/кг до около 30 мл/кг, от около 10 мл/кг до около 200 мл/кг, от около 20 мл/кг до около 60 мл/кг, от около 30 мл/кг до около 70 мл/кг, от около 50 мл/кг до около 200 мл/кг, от около 100 мл/кг до около 500 мл/кг или по меньшей мере 500 мл/кг. В некоторых случаях дозу и/или введение ингибиторов C5 регулируют, чтобы гарантировать, что объем распределения в равновесном состоянии равен по меньшей мере 50% от общего объема крови. В некоторых вариантах осуществления распределение ингибитора C5 может быть ограничено компартментом плазмы.

В некоторых вариантах осуществления ингибиторы C5 (например, зилукоплан и/или его активные метаболиты или варианты) демонстрируют общую скорость клиренса от около 0,001 мл/ч/кг до около 0,01 мл/ч/кг, от около 0,005 мл/ч/кг до около 0,05 мл/ч/кг, от около 0,01 мл/ч/кг до около 0,1 мл/ч/кг, от около 0,05 мл/ч/кг до около 0,5 мл/ч/кг, от около 0,1 мл/ч/кг до около 1 мл/ч/кг, от около 0,5 мл/ч/кг до около 5 мл/ч/кг, от около 0,04 мл/ч/кг до около 4 мл/ч/кг, от около 1 мл/ч/кг до около 10 мл/ч/кг, от около 5 мл/ч/кг до около 20 мл/ч/кг, от около 15 мл/ч/кг до около 30 мл/ч/кг или по меньшей мере 30 мл/ч/кг.

Периоды времени, в течение которых поддверживается максимальная концентрация ингибиторов C5 у субъектов (например, в сыворотке субъекта) (значения T_max), можно скорректировать путем изменения дозы и/или введения (например, подкожное введение). В некоторых случаях ингибиторы C5 имеют значения T_max от около 1 мин до около 10 мин, от около 5 мин до около 20 мин, от около 15 мин до около 45 мин, от около 30 мин до около 60 мин, от около 45 мин до около 90 мин, от около 1 часа до около 48 часов, от около 2 часов до около 10 часов, от около 5 часов до около 20 часов, от около 10 часов до около 60 часов, от около 1 дня до около 4 дней, от около 2 дней до около 10 дней, или по меньшей мере 10 дней.

В некоторых вариантах осуществления ингибиторы C5 (например, зилукоплан и/или его активные метаболиты или варианты) можно вводить без побочного действия. В некоторых случаях ингибиторы C5 не ингибируют hERG (ген специфических калиевых каналов сердца человека) даже при концентрациях меньше или равных 300 мкМ. П/к инъекция ингибиторов С5 в дозах до 10 мг/кг может хорошо переноситься и не вызывать каких-либо побочных эффектов со стороны сердечно-сосудистой системы (например, повышенного риска длительной реполяризации желудочков) и/или дыхательной системы.

Дозы ингибитора C5 можно определить с использованием уровня отсутствия наблюдаемых нежелательных эффектов (NOAEL), наблюдаемого у других видов. Такие виды могут включать обезьян, крыс, кроликов и мышей, но не ограничиваются этим. В некоторых случаях эквивалентные дозы для человека (HED) могут быть определены путем аллометрической шкалы на основе значений NOAEL, наблюдаемых у других видов. В некоторых случаях HED приводят к терапевтическому диапазону от примерно 2-кратного до примерно 5-кратного, от примерно 4-кратного до примерно 12-кратного, от примерно 5-кратного до примерно 15-кратного, от примерно 10-кратного до примерно 30-кратного, или по меньшей мере к 30-кратному. В некоторых случаях терапевтические диапазоны определяют с использованием экспозиции у приматов и расчетных уровней C_max у человека.

В некоторых вариантах осуществления ингибиторы C5 по настоящему изобретению обеспечивают возможность быстрого периода вымывания в случаях инфекции, когда длительное ингибирование системы комплемента оказывается пагубным.

Введение ингибитора C5 в соответствии с настоящим изобретением можно изменить для снижения потенциальных клинических рисков для субъектов. Инфекция Neisseria meningitidis является известным риском ингибиторов C5, включая экулизумаб. В некоторых случаях риск заражения Neisseria meningitides сводится к минимуму путем введения одной или нескольких профилактических мер. Такие меры могут включать исключение субъектов, которые уже могут быть колонизированы этими бактериями. В некоторых случаях профилактические меры могут включать совместное введение с одним или несколькими антибиотиками. В некоторых случаях можно одновременно вводить ципрофлоксацин. В некоторых случаях ципрофлоксацин можно одновременно вводить перорально в дозе от около 100 мг до около 1000 мг (например, 500 мг).

В некоторых вариантах осуществления ингибиторы C5 (например, зилукоплан и/или его активные метаболиты или варианты) вводят с частотой через каждый час, каждые 2 часа, каждые 4 часа, каждые 6 часов, каждые 12 часов, каждые 18 часов, каждые 24 часа, каждые 36 часов, каждые 72 часа, каждые 84 часа, каждые 96 часов, каждые 5 дней, каждые 7 дней, каждые 10 дней, каждые 14 дней, каждую неделю, каждые две недели, каждые 3 недели, каждые 4 недели, каждый месяц, каждые 2 месяца, каждые 3 месяца, каждые 4 месяца, каждые 5 месяцев, каждые 6 месяцев, каждый год, или по меньшей мере каждый год. В некоторых случаях ингибиторы C5 вводят один раз ежедневно или вводят в виде двух, трех или более дробных доз с подходящими интервалами в течение дня.

В некоторых вариантах осуществления ингибиторы C5 вводят в нескольких ежедневных дозах. В некоторых случаях ингибиторы C5 вводят раз в день в течение 7 дней. В некоторых случаях ингибиторы C5 вводят раз в день в течение 7-100 дней. В некоторых случаях ингибиторы C5 вводят раз в день в течение по меньшей мере 100 дней. В некоторых случаях ингибиторы C5 вводят раз в день в течение неопределенного периода.

Способы по настоящему изобретению могут включать введение ингибитора C5 (например, зилукоплана и/или его активных метаболитов или вариантов) при суточной дозе от около 0,1 мг/кг до около 0,3 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления ингибитор C5 (например, зилукоплан и/или его активные метаболиты или варианты) вводят при суточной дозе 0,3 мг/кг. QMG оценка и/или MG-ADL оценка у субъекта может снижаться в результате введения. QMG оценка может снижаться на ≥ 3 балла через 8 недель лечения. MG-ADL оценка может снижаться на ≥ 2 балла через 8 недель лечения. Риск необходимости вспомогательной резервной терапии (IVIG или плазмообмен) может снижаться.

Ингибиторы C5, вводимые внутривенно, можно вводить путем инфузии в течение периода времени, например, в течение 5 минут, 10 минут, 15 минут, 20 минут или 25 минут. Введение можно повторять, например, на регулярной основе, например ежечасно, ежедневно, еженедельно, раз в две недели (т.е. каждые две недели), в течение одного месяца, двух месяцев, трех месяцев, четырех месяцев или более четырех месяцев. После начальной схемы лечения лечение можно вводить реже. Например, после введения каждые две недели в течение трех месяцев введение можно повторять один раз в месяц, в течение шести месяцев, года или дольше. Введение ингибитора C5 может уменьшать, снижать, повышать или изменять связывание или любой физиологически вредный процесс (например, в клетке, ткани, крови, моче или другом компартменте пациента) на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80% или по меньшей мере 90% или более.

Перед введением полной дозы ингибитора C5 и/или композиции ингибитора C5 пациентам можно вводить меньшую дозу, например 5% от полной дозы, и контролировать побочные эффекты, такие как аллергическая реакция или инфузионная реакция, или при повышенном уровне липидов или кровяном давлении. В другом примере пациентов можно контролировать на нежелательные иммуностимулирующие эффекты, такие как повышенные уровни цитокинов (например, TNF-альфа, IL-1, IL-6 или IL-10).

Генетическая предрасположенность играет роль в развитии некоторых заболеваний или расстройств. Поэтому пациентов, нуждающихся в ингибиторах C5, можно идентифицировать на основании анализа семейного анамнеза или, например, скрининга на один или несколько генетических маркеров или вариантов. Лица, предоставляющие медицинские услуги (например, врачи или медсестры) или члены семьи могут проанализировать информацию семейного анамнеза перед назначением или введением терапевтических композиций по настоящему изобретению.

III. Наборы и устройства

В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает наборы и устройства. Такие наборы и устройства могут включать любое из соединений или композиций, описанных в настоящей заявке. В неограничивающем примере может быть включен зилукоплан.

Устройства по настоящему изобретению могут включать устройства для введения. В контексте настоящей заявки термин “устройство для введения” относится к любому инструменту для доставки вещества реципиенту. Устройства для введения могут включать устройства для самостоятельного введения. В контексте настоящей заявки термин “устройство для самостоятельного введения” относится к любому инструменту, используемому для предоставления вещества реципиенту, когда использование инструмента полностью или частично осуществляется реципиентом. Устройства для самостоятельного введения могут включать устройства для самостоятельного введения инъекций. “Устройства для самостоятельного введения инъекций” представляют собой устройства для самостоятельного введения, которые позволяют людям вводить вещества подкожно в собственное тело. Устройства для самостоятельного введения инъекций могут включать предварительно заполненные шприцы. В контексте настоящей заявки термин “предварительно заполненный шприц” относится к шприцу, который был загружен веществом или грузом до доступа или использования шприца оператором. Например, предварительно заполненные шприцы (также называемые “предварительно загруженные шприцы”) могут быть заполнены терапевтической композицией перед упаковкой в набор; перед отправкой шприца дистрибьютору, лицу, осуществляющему введение или оператору; или до доступа к нему субъекта, использующего шприц для самостоятельного введения. Благодаря стабильности циклических пептидов ингибиторы циклических пептидов (например, зилукоплан) особенно хорошо подходят для производства, хранения и распределения в предварительно загруженных шприцах. Кроме того, предварительно загруженные шприцы особенно хорошо подходят для самостоятельного введения (т.е. введения субъектом без помощи медицинского работника). Самостоятельное введение представляет собой удобный способ для субъектов получить лечение, не полагаясь на медицинских специалистов, которые могут находиться на расстоянии, либо к которым трудно получить доступ. Это делает варианты самостоятельного введения хорошо подходящими для лечения, требующего частых инъекций (например, ежедневных инъекций).

Предварительно заполненные шприцы могут быть из любого материала (например, из стекла, пластика или металла). В некоторых вариантах осуществления предварительно заполненные шприцы представляют собой стеклянные шприцы. Предварительно заполненные шприцы могут включать максимальный объем заполнения (то есть наибольшее количество жидкости, которое может содержаться) по меньшей мере 0,1 мл, по меньшей мере 0,2 мл, по меньшей мере 0,3 мл, по меньшей мере 0,4 мл, по меньшей мере 0,5 мл, по меньшей мере 0,75 мл, по меньшей мере 1,0 мл, по меньшей мере 1,5 мл, по меньшей мере 2,0 мл, по меньшей мере 5,0 мл, по меньшей мере 10 мл или более 10 мл. Шприцы могут включать иглы. Иглы могут быть любого размера. В некоторых вариантах осуществления шприцы включают иглы 29-го размера. Иглы могут быть собраны со шприцами, или их можно присоединять перед использованием шприца. Устройства для самостоятельного введения инъекций могут включать устройства для самостоятельного введения BD ULTRASAFE PLUS™ (BD, Franklin Lakes, NJ).

Устройства для введения могут включать устройства для самостоятельного введения инъекций, которые включают шприц и иглу и заранее определенный объем композиции зилукоплана. Композиция зилукоплана может быть фармацевтической композицией. Композиция может включать зилукоплан в концентрации от около 1 мг/мл до около 200 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация зилукоплана составляет около 40 мг/мл. Предварительно определенные объемы могут быть заранее определены на основе массы тела пациента. В некоторых вариантах осуществления заранее определенные объемы композиции зилукоплана модифицируют для облегчения введения зилукоплана субъекту в дозе от около 0,1 мг/кг до около 0,6 мг/кг. Объемы можно модифицировать для облегчения введения зилукоплана 0,3 мг/кг. Устройство для самостоятельного введения инъекции может включать устройство для самостоятельного введения BD ULTRASAFE PLUS™. В некоторых вариантах осуществления устройства для введения подготовлены для хранения при определенных температурах или температурных диапазонах. Некоторые устройства для введения можно подготовить для хранения при комнатной температуре. Некоторые устройства для введения могут быть подготовлены для хранения при температуре от около 2°C до около 8°C.

Предварительно заполненные шприцы могут включать пассивные предохранители иглы ULTRASAFE PLUS™ (Becton Dickenson, Franklin Lakes, NJ). Другие предварительно заполненные шприцы могут включать ручки для инъекций. Ручки для инъекций могут быть ручками с несколькими дозами. Некоторые предварительно заполненные шприцы могут включать иглу. В некоторых вариантах осуществления размер иглы составляет от около 20 до около 34. Размер иглы может быть от около 29 до около 31.

В некоторых вариантах осуществления наборы по настоящему изобретению включают наборы, осуществляющие описанные способы лечения MG. Такие наборы могут включать одно или несколько устройств для введения, описанных в настоящей заявке, и инструкции по использованию набора.

Компоненты набора могут быть упакованы в жидкой (например, водной или органической) среде или в сухой (например, лиофилизированной) форме. Наборы могут включать контейнеры, которые могут включать, но не ограничиваются этим, флаконы, пробирки, колбы, бутыли, шприцы или пакеты. Контейнеры набора могут использоваться для аликвотирования, хранения, сохранения, изоляции и/или защиты компонентов набора. Компоненты набора могут быть упакованы вместе или по отдельности. Некоторые наборы могут включать контейнеры со стерильным фармацевтически приемлемым буфером и/или другим разбавителем (например, фосфатно-солевой буферный раствор). В некоторых вариантах осуществления наборы включают контейнеры с компонентами набора в сухой форме, с отдельными контейнерами с раствором для растворения сухих компонентов. В некоторых вариантах осуществления наборы включают шприц для введения одного или нескольких компонентов набора.

Когда полипептиды обеспечиваются в виде высушенного порошка, предполагается, что от 10 микрограммов до 1000 миллиграммов полипептида, или как минимум или как максимум такие количества обеспечиваются в наборах.

Контейнеры могут включать по меньшей мере один флакон, пробирку, колбу, бутыль, шприц и/или другую емкость, в которую могут быть помещены полипептидные композиции, предпочтительно подходящим образом распределенные. Наборы могут также включать контейнеры для стерильного фармацевтически приемлемого буфера и/или другого разбавителя.

Наборы могут включать инструкции по использованию компонентов набора, а также по использованию любого другого реагента, не входящего в набор. Инструкции могут включать вариации, которые могут быть реализованы.

Наборы могут включать один или несколько предметов для лечения ран от шприца. Такие предметы могут включать, но не ограничиваются этим, спиртовые салфетки и перевязочные материалы (например, ватные шарики, сетчатые прокладки, бинты, ленту, марлю и т.д.). Наборы могут также включать контейнеры для утилизации использованных компонентов набора. Контейнеры для утилизации могут быть предназначены для утилизации острых предметов, таких как иглы и шприцы. Некоторые комплекты могут включать инструкции по утилизации острых предметов.

В некоторых вариантах осуществления наборы в соответствии с настоящим изобретением включают зилукоплан в порошкообразной форме или в растворе (например, в виде фармацевтических композиций). Растворы могут быть водными растворами. Растворы могут включать PBS. Растворы зилукоплана могут включать от около 4 мг/мл до около 200 мг/мл зилукоплана. В некоторых вариантах осуществления растворы зилукоплана включают около 40 мг/мл зилукоплана. Растворы зилукоплана могут содержать консерванты. В некоторых вариантах осуществления растворы зилукоплана не содержат консервантов.

В некоторых вариантах осуществления наборы подготавливают для хранения при определенных температурах или диапазонах температур. Некоторые наборы можно подготовить для хранения при комнатной температуре. Некоторые наборы могут быть подготовлены для хранения при температуре от около 2°C до около 8°C.

IV. Определения

Биодоступность: В контексте настоящей заявки термин “биодоступность” относится к системной доступности данного количества соединения (например, ингибитора C5), вводимого субъекту. Биодоступность можно оценить путем измерения площади под кривой (AUC) или максимальной концентрации в сыворотке или плазме (C_max) неизмененной формы соединения после введения соединения субъекту. AUC является определением площади под кривой при нанесении на график концентрации соединения в сыворотке или плазме по оси ординат (ось Y) против времени по абсциссе (ось X). Как правило, AUC для конкретного соединения может быть рассчитана с использованием методов, известных специалистам в данной области и/или описанных в GS Banker, Modern Pharmaceutics, Drugs and the Pharmaceutical Sciences, v. 72, Marcel Dekker, New York, Inc., 1996, содержание которого включено в настоящую заявку посредством ссылки во всей полноте.

Биологическая система: В контексте настоящей заявки термин “биологическая система” относится к клетке, группе клеток, ткани, органу, группе органов, органелле, биологической жидкости, биологическому пути передачи сигнала (например, рецептор-активируемому сигнальному пути, активируемому зарядом сигнальному пути, метаболическому пути, клеточному сигнальному пути и т.д.), группе белков, группе нуклеиновых кислот или группе молекул (включая, но не ограничиваясь этим, биомолекулы), которые выполняют по меньшей мере одну биологическую функцию или биологическую задачу в клеточных мембранах, клеточных компартментах, клетках, культурах клеток, тканях, органах, системах органов, организмах, многоклеточных организмах, биологических жидкостях или любых биологических структурах. В некоторых вариантах осуществления биологические системы представляют собой клеточные сигнальные пути, которые включают внутриклеточные и/или внеклеточные сигнальные биомолекулы. В некоторых вариантах осуществления биологические системы включают протеолитические каскады (например, каскад комплемента).

Буферный агент. В контексте настоящей заявки термин “буферный агент” относится к соединению, используемому в растворе с целью противодействия изменениям pH. Такие соединения могут включать, но не ограничиваются этим, уксусную кислоту, адипиновую кислоту, ацетат натрия, бензойную кислоту, лимонную кислоту, бензоат натрия, малеиновую кислоту, фосфат натрия, винную кислоту, молочную кислоту, метафосфат калия, глицин, бикарбонат натрия, фосфат калия, цитрат натрия и тартрат натрия.

Скорость клиренса: В контексте настоящей заявки термин “скорость клиренса” относится к скорости, с которой конкретное соединение выводится из биологической системы или жидкости.

Соединение: В контексте настоящей заявки термин “соединение” относится к отдельному химическому соединению. В некоторых вариантах осуществления конкретное соединение может существовать в одной или нескольких изомерных или изотопных формах (включая, но не ограничиваясь этим, стереоизомеры, геометрические изомеры и изотопы). В некоторых вариантах осуществления соединение обеспечивается или используется только в одной такой форме. В некоторых вариантах осуществления соединение обеспечивается или используется в виде смеси двух или более таких форм (включая, но не ограничиваясь этим, рацемическую смесь стереоизомеров). Специалистам в данной области должно быть понятно, что некоторые соединения существуют в разных формах, проявляют разные свойства и/или активности (включая, но не ограничиваясь этим, биологические активности). В таких случаях специалист в данной области может выбрать или избежать конкретных форм соединения для использования в соответствии с настоящим изобретением. Например, соединения, содержащие асимметрично замещенные атомы углерода, могут быть выделены в оптически активных или рацемических формах.

Циклический или циклизованный: В контексте настоящей заявки термин “циклический” относится к наличию непрерывной петли. Циклические молекулы не обязательно должны быть кольцевыми, они только соединены, чтобы образовать непрерывную цепочку субъединиц. Циклические полипептиды могут включать “циклическую петлю”, образованную, когда две аминокислоты соединены мостиковым фрагментом. Циклическая петля включает аминокислоты вдоль полипептида, присутствующего между мостиковыми аминокислотами. Циклические петли могут включать 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более аминокислот.

Нисходящее событие: В контексте настоящей заявки термин “нисходящий” или “нисходящее событие” относится к любому событию, происходящему после и/или в результате другого события. В некоторых случаях нисходящие события представляют собой события, происходящие после и в результате расщепления C5 и/или активации комплемента. Такие события могут включать, но не ограничиваются этим, образование продуктов расщепления C5, активацию MAC, гемолиз и гемолиз-связанное заболевание (например, PNH).

Равновесная константа диссоциации: В контексте настоящей заявки термин “равновесная константа диссоциации” или “K_D” относится к значению, представляющему тенденцию двух или более агентов (например, двух белков) к обратимому разделению. В некоторых случаях K_D указывает концентрацию первичного агента, при которой половина общих уровней вторичного агента связана с первичным агентом.

Период полужизни: В контексте настоящей заявки термин “период полужизни” или “t_1/2” относится к времени, которое требуется для данного процесса или концентрации соединения, чтобы достичь половины конечного значения. “Конечный период полужизни” или “конечный t_1/2” относится к времени, необходимому для снижения концентрации фактора в плазме наполовину после того, как концентрация фактора достигла псевдоравновесия.

Идентичность: В контексте настоящей заявки термин “идентичность” применительно к полипептидам или нуклеиновым кислотам относится к сравнительной взаимосвязи между последовательностями. Этот термин используется для описания степени родства последовательностей между полимерными последовательностями и может включать процент совпадающих мономерных компонентов с выравниванием пробелов (если таковые имеются), рассчитываемый с использованием конкретной математической модели или компьютерной программы (то есть “алгоритмов”). Идентичность родственных полипептидов можно легко рассчитать известными методами. Такие методы включают, но не ограничиваются этим, методы, описанные ранее другими (Lesk, A. M., ed., Computational Molecular Biology, Oxford University Press, New York, 1988; Smith, D. W., ed., Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Academic Press, New York, 1993; Griffin, A. M. et al., ed., Computer Analysis of Sequence Data, Part 1, Humana Press, New Jersey, 1994; von Heinje, G., Sequence Analysis in Molecular Biology, Academic Press, 1987; Gribskov, M. et al., ed., Sequence Analysis Primer, M. Stockton Press, New York, 1991; and Carillo et al., Applied Math, SIAM J, 1988, 48, 1073).

Ингибитор: В контексте настоящей заявки термин “ингибитор” относится к любому агенту, который блокирует или вызывает уменьшение возникновения определенного события; клеточного сигнала; химического пути; ферментативной реакции; клеточного процесса; взаимодействия между двумя или более объектами; биологического события; заболевания; расстройства; или состояния.

Начальная нагрузочная доза: В контексте настоящей заявки термин “начальная нагрузочная доза” относится к первой дозе терапевтического средства, которая может отличаться от одной или нескольких последующих доз. Начальные нагрузочные дозы можно использовать для достижения начальной концентрации терапевтического средства или уровня активности перед введением последующих доз.

Внутривенный: В контексте настоящей заявки термин “внутривенный” относится к области внутри кровеносного сосуда. Внутривенное введение обычно относится к доставке соединения в кровь посредством инъекции в кровеносный сосуд (например, в вену).

In vitro: В контексте настоящей заявки термин “in vitro” относится к событиям, которые происходят в искусственной среде (например, в пробирке или реакционном сосуде, в культуре клеток, в чашке Петри и т.д.), а не внутри организма (например, животного, растения или микроба).

In vivo: В контексте настоящей заявки термин “in vivo” относится к событиям, которые происходят в организме (например, животном, растении или микробе, или их в клетке или ткани).

Лактамовый мостик: В контексте настоящей заявки термин “лактамовый мостик” относится к амидной связи, которая образует мостик между химическими группами в молекуле. В некоторых случаях лактамовые мостики образуются между аминокислотами в полипептиде.

Линкер: Термин “линкер” в контексте настоящей заявки относится к группе атомов (например, 10-1000 атомов), молекуле (молекулам) или другим соединениям, используемым для соединения двух или более объектов. Линкеры могут соединять такие объекты посредством ковалентных или нековалентных (например, ионных или гидрофобных) взаимодействий. Линкеры могут включать цепи из двух или более полиэтиленгликолевых (ПЭГ) звеньев. В некоторых случаях линкеры могут быть расщепляемыми.

Минутный объем: В контексте настоящей заявки термин “минутный объем” относится к объему воздуха, вдыхаемого или выдыхаемого из легких субъекта в минуту.

Непротеиногенный: В контексте настоящей заявки термин “непротеиногенный” относится к любым неприродным белкам, таким как протеины с неприродными компонентами, такими как неприродные аминокислоты.

Пациент: В контексте настоящей заявки “пациент” относится к субъекту, который может подыскивать лечение или нуждаться в нем, который нуждается в лечении, получает лечение, будет получать лечение, или к субъекту, который находится под наблюдением квалифицированного специалиста по конкретному заболеванию или состоянию.

Фармацевтическая композиция: В контексте настоящей заявки термин “фармацевтическая композиция” относится к композиции с по меньшей мере одним активным ингредиентом (например, ингибитором C5) в форме и количестве, которые позволяют активному ингредиенту быть терапевтически эффективным.

Фармацевтически приемлемый: Фраза “фармацевтически приемлемый” используется в настоящей заявке для обозначения тех соединений, материалов, композиций и/или лекарственных форм, которые в рамках здравого медицинского заключения подходят для использования в контакте с тканями человека и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или других проблем или осложнений, соизмеримо с разумным соотношением польза/риск.

Фармацевтически приемлемые эксципиенты: Фраза “фармацевтически приемлемый эксципиент” в контексте настоящей заявки относится к любому ингредиенту, кроме активных веществ (например, активного вещества зилукоплана и/или его активных метаболитов или его вариантов), присутствующему в фармацевтической композиции и обладающему такими свойствами, чтобы быть по существу нетоксичным и не вызывать воспаления у пациента. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемый эксципиент представляет собой носитель, способный суспендировать или растворять активный агент. Эксципиенты могут включать, например: антиадгезивные вещества, антиоксиданты, связующие, покрытия, вспомогательные вещества для прессования, дезинтегранты, красители (пигменты), смягчающие вещества, эмульгаторы, наполнители (разбавители), пленкообразователи или покрытия, отдушки, ароматизаторы, глиданты (вещества, повышающие текучесть), смазывающие вещества, консерванты, печатные краски, сорбенты, суспендирующие или диспергирующие агенты, подсластители и гидратные воды. Примеры эксципиентов включают, но не ограничиваются этим: бутилированный гидрокситолуол (ВНТ), карбонат кальция, фосфат кальция (двухосновный), стеарат кальция, кроскармеллозу, сшитый поливинилпирролидон, лимонную кислоту, кросповидон, цистеин, этилцеллюлозу, желатин, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, лактозу, стеарат магния, мальтит, маннит, метионин, метилцеллюлозу, метилпарабен, микрокристаллическую целлюлозу, полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон, повидон, прежелатинизированный крахмал, пропилпарабен, ретинилпальмитат, шеллак, диоксид кремния, натрий карбоксиметилцеллюлозу, цитрат натрия, натрий крахмалгликолят, сорбит, крахмал (кукурузный), стеариновую кислоту, сахарозу, тальк, диоксид титана, витамин A, витамин E, витамин C и ксилит.

Плазменный компартмент: В контексте настоящей заявки термин “плазменный компартмент” относится к внутрисосудистому пространству, занимаемому плазмой крови.

Соль: В контексте настоящей заявки термин “соль” относится к соединению, состоящему из катиона со связанным анионом. Такие соединения могут включать хлорид натрия (NaCl) или другие классы солей, включая, но не ограничиваясь этим, ацетаты, хлориды, карбонаты, цианиды, нитриты, нитраты, сульфаты и фосфаты.

Образец: В контексте настоящей заявки термин “образец” относится к аликвоте или части, взятой из источника и/или предоставленной для анализа или обработки. В некоторых вариантах осуществления образец взят из биологического источника, такого как ткань, клетка или составляющая часть (например, жидкость организма, включая, но не ограничиваясь этим, кровь, слизь, лимфатическую жидкость, синовиальную жидкость, спинномозговую жидкость, слюну, амниотическую жидкость, амниотическую пуповинную кровь, мочу, вагинальную жидкость и сперму). В некоторых вариантах осуществления образец может представлять собой или включать гомогенат, лизат или экстракт, полученные из целого организма или части его тканей, клеток или составляющих частей, или их фракции или части, включая, но не ограничиваясь этим, например плазму, сыворотку, спинномозговую жидкость, лимфатическую жидкость, внешние участки кожи, дыхательные, кишечные и мочеполовые пути, слезы, слюну, молоко, клетки крови, опухоли или органы. В некоторых вариантах осуществления образец представляет собой или включает среду, такую как питательный бульон или гель, которая может содержать клеточные компоненты, такие как белки. В некоторых вариантах осуществления “первичный” образец представляет собой аликвоту источника. В некоторых вариантах осуществления первичный образец подвергают одной или нескольким стадиям обработки (например, разделению, очистке и т.д.) для подготовки образца для анализа или другого использования.

Подкожный: В контексте настоящей заявки термин “подкожный” относится к пространству под кожей. Подкожное введение означает доставку соединения под кожу.

Субъект: В контексте настоящей заявки термин “субъект” относится к любому организму, которому можно вводить или для которого можно применять соединение или способ в соответствии с изобретением, например, для экспериментальных, диагностических, профилактических и/или терапевтических целей. Типичные субъекты включают животных (например, млекопитающих, таких как мыши, крысы, кролики, свиньи, отличные от человека приматы и люди). Для некоторых применений субъектом является человек.

По существу: В контексте настоящей заявки термин “по существу” относится к качественному условию проявления полной или почти полной степени или уровня характеристики или свойства, представляющего интерес. Обычному специалисту в области биологии должно быть понятно, что биологические и химические явления редко, если вообще когда-либо, доходят до завершения и/или переходят к завершению или достигают или избегают абсолютного результата. Поэтому термин “по существу” используется в настоящей заявке для обозначения потенциального отсутствия полноты, присущего многим биологическим и химическим явлениям.

Терапевтически эффективное количество: В контексте настоящей заявки термин “терапевтически эффективное количество” означает количество доставляемого средства (например, ингибитора C5), которое является достаточным при введении субъекту, страдающему или подверженному заболеванию, расстройству и/или состоянию, для лечения, облегчения симптомов, диагностики, предотвращения и/или отсрочки начала заболевания, расстройства и/или состояния.

Дыхательный объем. В контексте настоящей заявки термин “дыхательный объем” относится к нормальному объему в легких воздуха, вытесняемого между вдохами (при отсутствии каких-либо дополнительных усилий).

T_max: В контексте настоящей заявки термин “T_max” относится к периоду времени, в течение которого сохраняется максимальная концентрация соединения в организме или жидкости субъекта.

Лечение: В контексте настоящей заявки термин “лечение” относится к частичному или полному облегчению, ослаблению, улучшению, купированию, отсрочке начала, ингибированию прогрессирования, облегчению тяжести и/или снижению частоты одного или нескольких симптомов или признаков конкретного заболевания, расстройства и/или состояния. Лечение можно вводить субъекту, у которого нет признаков заболевания, расстройства и/или состояния, и/или субъекту, у которого проявляются только ранние признаки заболевания, расстройства и/или состояния, с целью снижения риска развивающейся патологии, связанной с заболеванием, расстройством и/или состоянием.

Лечебная доза: В контексте настоящей заявки термин “лечебная доза” относится к одной или нескольким дозам терапевтического средства, вводимым в ходе лечения или облегчения терапевтического показания. Лечебные дозы могут быть скорректированы для поддержания желаемой концентрации или уровня активности терапевтического средства в жидкости организма или биологической системе.

Объем распределения: В контексте настоящей заявки термин “объем распределения” или “V_dist” относится к объему жидкости, необходимому для содержания общего количества соединения в организме в той же концентрации, что и в крови или плазме. Объем распределения может отражать степень, в которой соединение присутствует во внесосудистой ткани. Большой объем распределения отражает тенденцию соединения связываться с компонентами ткани по сравнению с компонентами белков плазмы. В клинических условиях V_dist можно использовать для определения нагрузочной дозы соединения для достижения стационарной концентрации этого соединения.

V. Эквиваленты и объем

Хотя были подробно показаны и описаны различные варианты осуществления изобретения, специалистам в данной области техники должно быть понятно, что возможны различные изменения в форме и деталях без отклонения от сущности и объема изобретения, как определено прилагаемой формулой изобретения.

Специалисты в данной области поймут или смогут установить, используя не более чем рутинное экспериментирование, многие эквиваленты конкретных вариантов осуществления в соответствии с изобретением, описанным в настоящей заявке. Объем настоящего изобретения не предназначен для ограничения приведенным выше описанием, а скорее изложен в прилагаемой формуле изобретения.

В формуле изобретения артикли, такие как “a”, “an” и “the”, могут означать один или несколько, если не указано иное или иным образом не очевидно из контекста. Притязания или описания, которые включают “или” между одним или несколькими членами группы, считаются удовлетворенными, если один, несколько или все члены группы присутствуют, используются или иным образом относятся к данному продукту или процессу, если не указано иное или если иное не очевидно из контекста. Изобретение включает варианты осуществления, в которых ровно один член группы присутствует, используется или иным образом относится к данному продукту или процессу. Изобретение включает варианты осуществления, в которых более одного или все члены группы присутствуют, используются или иным образом относятся к данному продукту или процессу.

Также следует отметить, что термин “включающий” предполагается как открытый и разрешает, но не требует, включение дополнительных элементов или стадий. Когда используется термин “включающий”, термины “состоящий из” и “или включая”, таким образом, также охватываются и раскрываются.

Если указаны диапазоны, включены конечные точки. Кроме того, должно быть понятно, что, если не указано иное или иное не очевидно из контекста и понимания среднего специалиста в данной области, значения, выраженные в виде диапазонов, могут принимать любое конкретное значение или поддиапазон в пределах указанных диапазонов в различных вариантах осуществления изобретения, с точностью до десятых единиц нижнего предела диапазона, если контекст явно не диктует иное.

Кроме того, должно быть понятно, что любой конкретный вариант осуществления настоящего изобретения, относящийся к известному уровню техники, может быть явно исключен из любого одного или нескольких пунктов формулы изобретения. Поскольку такие варианты осуществления считаются известными среднему специалисту в данной области техники, они могут быть исключены, даже если исключение не изложено здесь явно. Любой конкретный вариант осуществления композиций по изобретению (например, любая нуклеиновая кислота или белок, кодируемый ею; любой способ получения; любой способ применения и т.д.) может быть исключен из любого одного или нескольких пунктов формулы изобретения по любой причине, независимо от того, связано это с существованием известного уровня техники или нет.

Все цитируемые источники, например, ссылки, публикации, базы данных, записи в базах данных и методы, цитируемые в настоящей заявке, включены в настоящую заявку посредством ссылки, даже если это прямо не указано в цитировании. В случае противоречащих утверждений в цитируемом источнике и в настоящей заявке утверждение в настоящей заявке имеет преимущественную силу.

Заголовки разделов и таблиц не предназначены для ограничения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Получение водного раствора зилукоплана

Полипептиды синтезировали с использованием стандартных твердофазных Fmoc/tBu методов. Синтез осуществляли на автоматическом микроволновом пептидном синтезаторе Liberty (CEM, Matthews NC) с использованием стандартных протоколов с амидной смолой Ринка, хотя также можно использовать другие автоматические синтезаторы без микроволнового нагрева. Все аминокислоты получали из коммерческих источников. В качестве связывающего реагента использовали 2-(6-хлор-1-H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3,-тетраметиламиний гексафторфосфат (HCTU), а в качестве основания использовали диизопропилэтиламин (DIEA). Полипептиды отщепляли от смолы с использованием 95% TFA, 2,5% TIS и 2,5% воды в течение 3 часов и выделяли путем осаждения эфиром. Неочищенные полипептиды очищали обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ с использованием колонки C18, с градиентом ацетонитрил/вода 0,1% TFA от 20% до 50% в течение 30 мин. Фракции, содержащие чистые полипептиды, собирали и лиофилизировали и все полипептиды анализировали методом ЖХ-МС.

Зилукоплан (SEQ ID NO: 1; CAS номер: 1841136-73-9) получали в виде циклического пептида, содержащего 15 аминокислот (4 из которых являются неприродными аминокислотами), ацетилированный N-конец и C-концевую карбоновую кислоту. C-концевой лизин серцевинного пептида имеет модифицированную боковую цепь с образованием N-ε-(PEG24-γ-глутаминовая кислота-N-α-гексадеканоил)лизинового остатка. Эта модифицированная боковая цепь включает полиэтиленгликолевый спейсер (ПЭГ24), присоединенный к остатку L-γ глутаминовой кислоты, который дериватизирован пальмитоильной группой. Циклизация зилукоплана происходит через лактамовый мостик между боковыми цепями L-Lys1 и L-Asp6. Все из аминокислот в зилукоплане являются L-аминокислотами. Зилукоплан имеет молекулярную массу 3562,23 г/моль и химическую формулу C₁₇₂H₂₇₈N₂₄O₅₅.

Подобно экулизумабу, зилукоплан блокирует протеолитическое расщепление C5 на C5a и C5b. В отличие от экулизумаба, зилукоплан также может связываться с C5b и блокировать связывание C6, что препятствует последующей сборке MAC.

Зилукоплан получали в виде водного раствора для инъекций, содержащего 40 мг/мл зилукоплана в не содержащей консервантов стерильной композиции 50 мМ фосфата натрия и 76 мМ хлорида натрия при pH 7,0. Полученную композицию использовали для получения медицинского продукта, в соответствии с текущей надлежащей производственной практикой (cGMPs), при этом медицинский продукт включал предварительно заполненный 1-мл стеклянный шприц со вставленнойй иглой 29 размера, ½ дюйма, помещенный в устройство для самостоятельного введения BD ULTRASAFE PLUS™ (BD, Franklin Lakes, NJ).

Пример 2. Введение и хранение зилукоплана

Зилукоплан вводят путем подкожной (п/к) или внутривенной (в/в) инъекции, а вводимую дозу (объем дозы) корректируют в зависимости от массы тела пациента на основе мг/кг. Это достигается с использованием набора фиксированных доз, сопоставляемых с диапазонами массы тела. В целом, дозировка для человека основана на широком диапазоне массы тела от 43 до 109 кг. Субъектам с более высокой массой тела (> 109 кг) корректируют дозы в индивидуальном порядке после консультации с медицинским наблюдателем.

Зилукоплан хранят при температуре от 2°C до 8°C [от 36°F до 46°F]. После выдачи пациентам зилукоплан хранят при контролируемой комнатной температуре (от 20°C до 25°C [от 68°F до 77°F]) до 30 дней с защитой от источников чрезмерных колебаний температуры, таких как высокая температура или воздействие света. Желательно избегать хранения зилукоплана вне комнатных температур. В этих условиях зилукоплан можно хранить до 30 дней.

Пример 3. Оценка лечения тяжелой миастении зилукопланом

Многоцентровое рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование осуществляли для оценки безопасности, переносимости и предварительной эффективности зилукоплана при лечении субъектов с gMG. План исследования схематически показан на Фиг. 2. В процессе исследования субъектов рандомизировали в соотношении 1:1:1 для получения ежедневно п/к доз 0,1 мг/кг зилукоплана, 0,3 мг/кг зилукоплана, или соответствующего плацебо. Рандомизацию стратифицировали на основании скрининговой оценки по шкале Quantitative Myasthenia Gravis (QMG) (≤ 17 vs ≥18).

Основная часть исследования включала период скрининга до 4 недель и 12-недельный период лечения. В ходе периода лечения субъекты возвращались в клинику раз в неделю для первых 2 визитов (День 8 и День 15) после визита в День 1, с последующими визитами на Неделе 4 (День 29), Неделе 8 (День 57) и Неделе 12 (День 84) для оценки безопасности, переносимости и предварительной эффективности. Дополнительные оценки включали опросники по качеству жизни (QOL), образцы на биомаркеры, фармакокинетику, фармакодинамику и необязательную фармакогеномику. Оценки безопасности включали медицинский осмотр, показатели жизненно важных функций, ЭКГ, клинические лабораторные тесты, нежелательные явления и иммуногенность.

Зилукоплан и соответствующее плацебо поставляли в виде стерильных водных растворов без консервантов, которыми предварительно заполняли 1-мл стеклянные шприцы со вставленными иглами 29 размера, 1/2 дюйма, помещенные в устройства для самостоятельного введения. Объемы заполнения были скорректированы в зависимости от диапазона массы тела субъектов для достижения нужного диапазона доз в мг/кг. Субъекты были проинструктированы, как самостоятельно вводить подкожные дозы ежедневно.

Дозы зилукоплана определяли на основании целевой дозы и массы тела, с использованием фиксированных доз, сопоставляемых с диапазонами массы тела. Эти диапазоны были сгруппированы на основании массы тела таким образом, чтобы каждый субъект получал не меньше чем целевую минимальную дозу, чтобы избежать субтерапевтического дозирования. Для дозы 0,1 мг/кг, субъекты получали, как минимум, фиксированную дозу 0,1 мг/кг (диапазон: от 0,10 до 0,14 мг/кг). Для дозы 0,3 мг/кг, субъекты получали минимальную дозу 0,3 мг/кг (диапазон: от 0,30 до 0,42 мг/кг). В таблице 2 приведены дозы зилукоплана 0,1 и 0,3 мг/кг. Субъектам с более высокой массой тела (> 150 кг) корректировали дозы в индивидуальном порядке. Соответствующее плацебо было предоставлено в 2 расфасовках: 0,220 мл для дозы 0,1 мг/кг и 0,574 мл для дозы 0,3 мг/кг.

Таблица 2
Представленные дозы зилукоплана на основании массы тела Целевая доза (мг/кг) Представление дозы Диапазон массы тела (кг) Диапазон доз (мг/кг) Объем наполнения (мл) Доза (мг) 0,1 0,150 6 ≥ 43 - < 61 0,10-0,14 0,1 0,220 8,8 ≥ 61 - < 88 0,10-0,14 0,1 0,310 12,4 ≥ 88 - < 109 0,11-0,14 0,3 0,416 16,6 ≥ 43 - < 56 0,30-0,39 0,3 0,574 23 ≥ 56 - < 77 0,30-0,41 0,3 0,810 32,4 ≥ 77 - ≤ 150 0,30-0,42

Скрининг

Скрининг осуществляли для определения пригодности субъекта для участия в исследовании. Скрининг включал QMG оценку. Популяция пациентов, наиболее подходящая для лечения зилукопланом, должна была иметь QMG оценку ≥ 12 при скрининге и на исходном уровне (отсутствие лечения ингибитором ацетилхолинэстеразы, например пиридостигмином, в течение по меньшей мере 10 часов) с оценками ≥ 4 исследуемых параметров ≥ 2 балла. Другие критерии включения в исследование, оцениваемые при скрининге, включали возраст от 18 до 85 лет; диагноз gMG [в соответствии с критериями Myasthenia Gravis Foundation of America (MGFA); класс II-IVa] во время скрининга; положительный серологический тест на аутоантитела к AChR; отсутствие изменений дозы кортикостероидов в течение по меньшей мере 30 дней до этапа включения или ожидаемых изменений в течение 12-недельного периода лечения; и отсутствие изменений в иммуносупрессорной терапии, в том числе дозы, по меньшей мере за 30 дней до этапа включения или ожидаемых изменений в течение 12-недельного периода лечения. Субъекты, которые являются женщинами детородного возраста, должны были иметь отрицательный сывороточный тест на беременность при скрининге и отрицательный тест мочи на беременность за 24 часа до первой дозы исследуемого препарата, сексуально активные женщины с детородным потенциалом (т.е. женщины, не находящиеся в постменопаузе или которые не подвергались гистерэктомии, двусторонней овариэктомии или двусторонней перевязке маточных труб) и все субъекты мужского пола (которые не подвергались хирургической стерилизации путем вазэктомии) согласились использовать эффективные средства контрацепции во время исследования.

В процессе скрининга осуществляли оценки, которые включали анализ истории болезни и демографических данных, в том числе сбор истории болезни с диагнозом gMG в соответствии с критериями MGFA (Класс II-IVa); серологический тест на аутоантитела к AChR; оценку по шкале QMG; измерение роста и массы тела; оценку жизненно важных функций [частота сердечных сокращений (HR), температура тела и артериальное давление в сидячем положении]; ЭКГ в 12 отведениях; оценку предшествующей вакцинации против Neisseria meningitidis; сбор образцов крови для лабораторных исследований [гематология, химия, коагуляция, тест на аденозиндезаминазу (ADA) и фармакогеномный анализ]; сбор образцов мочи для анализа мочи; и сывороточные тесты на беременность у женщин детородного возраста.

Субъекты, соответствующие любому из следующих критериев, были исключены из исследования: (1) тимэктомия в период 6 месяцев до этапа включения или планируемая в течение 12-недельного периода лечения; (2) нарушение функции щитовидной железы, определяемое на основании местных стандартов; (3) известная положительная серология на мышечно-специфическую киназу (MuSK) или связанный с липопротеиновым рецептором пептид 4 (LRP4); (4) статус минимального проявления (MMS) тяжелой миастении на основании клинической оценки; (5) рассчитанная скорость клубочковой фильтрации <60 мл/мин/1,73 м² на основании уравнения модификации диеты при почечной болезни (Modification of Diet in Renal Disease (MDRD)) при скрининге:

;

(6) повышенные функциональные пробы печени (LFT), определяемые как общий билирубин или трансаминазы [аспартатаминотрансфераза (AST)/аланинаминотрансфераза (ALT)], > 2 раза превышающие верхний предел нормы (× ULN); (7) история менингококковой инфекции; (8) текущая или недавняя системная инфекция за 2 недели до этапа включения или инфекция, требующая внутривенного введения антибиотиков, за 4 недели до этапа включения; (9) беременные, планирующие забеременеть или кормящие женщины; (10) недавнее хирургическое вмешательство, требующее общей анестезии, за 2 недели до скрининга, или хирургическое вмешательство, которое ожидается во время скрининга или 12-недельного периода лечения; (11) лечение экспериментальным лекарственным средством или другим ингибитором комплемента за 30 дней или 5 периодов полувыведения экспериментального лекарственного средства (в зависимости от того, что больше) до этапа включения; (12) лечение ритуксимабом за 6 месяцев до этапа включения; (13) продолжающееся лечение с внутривенным введением иммуноглобулина G (IVIG) или плазмообменом (PLEX) или за 4 недели до этапа включения; (14) активное новообразование (кроме доброкачественной тимомы), требующее хирургического вмешательства, химиотерапии или облучения в течение предшествующих 12 месяцев (субъекты со злокачественными новообразованиями в анамнезе, перенесшие лечебную резекцию или не нуждающиеся в лечении в течение по меньшей мере 12 месяцев до скрининга, без обнаруживаемых рецидивов допускаются); (15) фиксированная слабость (‘изматывающая’ MG) на основании клинической оценки; (16) история любого серьезного медицинского или психического расстройства, которое делает субъекта непригодным для участия в исследовании; и (17) участие в другом параллельном клиническом исследовании, включающем экспериментальное терапевтическое вмешательство (разрешено участие в обсервационных исследованиях и/или регистрационных исследованиях).

Период лечения

Рандомизированные субъекты получали зилукоплан 0,1 мг/кг, зилукоплан 0,3 мг/кг или соответствующее плацебо, которые вводили подкожно в первый день посещения. После обучения и подготовки в клинике все субъекты самостоятельно вводили ежедневные п/к дозы исследуемого лекарственного средства в слепом режиме в соответствии с рандомизированным назначением лечения в течение последующих 12 недель. Инъекционное устройство было предоставлено для использования во время исследования. Ожидалось, что субъекты будут продолжать получать стабильные дозы стандартной терапии (SOC) для gMG на протяжении всего исследования, включая пиридостигмин, кортикостероиды или иммуносупрессанты. Введение в дни визитов исследования откладывали до завершения определения оценки по шкале QMG и сбора крови [для анализа фармакокинетики (PK) и фармакодинамики (PD)]. В дни, когда одновременно вводили вспомогательную резервную терапию, введение исследуемого лекарственного средства задерживали и возобновляли после завершения вспомогательной резервной терапии и отбора образцов для PK/PD анализа. Вспомогательная резервная терапия включала усиление терапии gMG из-за ухудшения клинического статуса субъекта. Во время вспомогательной резервной терапии субъекты получали лечение иммуноглобулином (IVIG) или плазмообмен.

Во время основной части исследования общая продолжительность участия в исследовании для всех субъектов составляла примерно до 16 недель, включая период скрининга до 4 недель и 12-недельный период лечения. Для продолжения применения зилукоплана была предусмотрена дополнительная часть исследования.

Субъекты получали лечение зилукопланом 0,1 мг/кг, зилукопланом 0,3 мг/кг или соответствующее плацебо, в соответствии с рандомизацией, с 1-го по 84-й день в течение периода лечения основной части исследования. Субъекты, завершившие визит в День 84 (включая рандомизированных в группу плацебо), имели возможность продолжить лечение зилукопланом в дополнительной части исследования.

Процедуры окончания исследования и заключительного исследования включали измерение массы тела; обзор и документирование сопутствующих лечений; симптом-направленное физикальное обследование; оценку жизненно важных функций (например, частоты сердечных сокращений, температуры тела и артериального давления в сидячем положении); ЭКГ в 12 отведениях; сбор образцов крови для лабораторных исследований (гематология, химия, коагуляция, тест на ADA, фармакокинетический анализ, фармакодинамический анализ и анализ биомаркеров); сбор мочи для общего анализа мочи; анализ мочи на беременность для женщин детородного возраста; определение оценки по шкале QMG; и оценки по шкале MG-ADL, MG-QOL15r и совокупной оценки MG (MGC).

Анализ образцов

В ходе основной части исследования образцы крови для PK и PD анализа собирали у всех субъектов во временных точках, представленных в Таблице 3. Сбор образцов крови для PK и PD анализа в дополнительной части исследования был спланирован так же, как при сценариях вспомогательной резервной терапии. Кроме того, взятие крови на Неделе 36 дополнительной части исследования планировалось в соответствии с графиком “День 1”, описанным для сбора крови в основной части исследования.

Таблица 3
Временные точки для сбора крови День 1 День 84 Во время вспомогательной резервной терапии В центрах, где вводят вспомогательную резервную терапию локально В центрах, где НЕ вводят вспомогательную резервную терапию локально До введения препарата
(за 1 час до первой дозы исследуемого лекарственного средства) До введения препарата
(любое время до Дня 84 введения исследуемого лекарственного средства) За 1 час до введения вспомогательной резервной терапии До введения первого курса вспомогательной резервной терапии 1 час после введения
(± 30 минут) 1 час после введения
(± 30 минут) Для PK (только для плазмообмена): Измеряли в обмененной плазме
Для PD: За 1 час до введения вспомогательной резервной терапии Для PK: До введения первого курса вспомогательной резервной терапии Для PD: После введения последнего курса вспомогательной резервной терапии 3 часа после введения
(± 30 минут) В течение 1 часа после введения вспомогательной резервной терапии После введения последнего курса вспомогательной резервной терапии 6 часов после введения
(± 90 минут)

Во все другие дни визитов исследования отдельные PK и PD образцы собирали до введения исследуемого лекарственного средства. Концентрации зилукоплана и его метаболитов в плазме измеряли во всех образцах крови.

Образцы крови для анализов на безопасность собирали в следующих временных точках в День 1: (i) до введения препарата (за 1 час до введения первой дозы исследуемого лекарственного средства) и (ii) через 6 часов после введения (± 90 минут). При всех других визитах исследования образцы для анализа на безопасность собирали до введения исследуемого лекарственного средства. Дополнительный образец крови для анализа брали через 6 часов после введения (± 90 минут) в День 84 у субъектов, имеющих намерение участвовать в дополнительной части исследования. Аналиты, анализируемые в образцах крови, включали аналиты, перечисленные в Таблице 4.

Таблица 4
Аналиты из образцов крови Аналит Аланинаминотрансфераза (ALT) Альбумин Щелочная фосфатаза (ALP) Амилаза Аспартатаминотрансфераза (AST) Бикарбонат Жечные кислоты Билирубин (общий, прямой и непрямой) Азот мочевины в крови (BUN) Кальций Хлорид Креатинин Гамма-глутамилтрансфераза (GGT) Глюкоза Липаза Калий Натрий Общий белок Мочевая кислота Гематокрит Гемоглобин Средний объем эритроцитов (MCV) Количество тромбоцитов Количество лейкоцитов (WBC) и лейкоцитарная формула (%) Международное нормализованное отношение (INR)/протромбиновое время (PT) Фибриноген Частичное тромбопластиновое время (PTT) или активированное частичное тромбопластиновое время (aPTT) C-реактивный белок (CRP) Креатинфосфокиназа (CPK)

Анализ биомаркеров патофизиологии MG [например, фиксация комплемента, функция комплемента, белки пути комплемента, характеристика аутоантител (титр и класс иммуноглобулинов) и маркеры воспаления] был доступен для более глубокого исследования клинической эффективности и безопасности зилукоплана у субъектов с gMG. Оценка уровней белков комплемента и активности комплемента может быть использована для оценки ответа на зилукоплан и для понимания характеристик субъектов, связанных с вариациями ответа на лекарственный препарат. Анализ маркеров воспаления можно использовать для оценки корреляции с функцией комплемента и клиническим ответом на зилукоплан. Перечень аналитов может быть создан путем обзора литературы, текущих клинических исследований и продолжающейся исследовательской работы и завершен после завершения исследования.

Первичной конечной точкой эффективности было изменение QMG оценки от исходного уровня до Недели 12 (День 84). QMG оценка представляет собой стандартизированную и проверенную систему количественной оценки интенсивности, которая была разработана специально для MG и ранее использовалась в клинических испытаниях. Более высокие баллы свидетельствуют о более тяжелом поражении. Последние данные показывают, что улучшение QMG оценки на 2-3 балла может считаться клинически значимым, в зависимости от тяжести заболевания [Barohn, RJ et al. 1998, Ann N Y Acad Sci. 841:769-72; Katzberg, HD et al. 2014, Muscle Nerve, 49 (5):661-5]. QMG оценка проводилась при каждом визите исследования и при скрининге для оценки соответствия субъектов критериям отбора. QMG оценка проводилась примерно в одно и то же время дня (предпочтительно утром) при каждом визите на протяжении всего исследования. Если субъект получал ингибитор холинэстеразы (например, пиридостигмин), дозу отменяли по меньшей мере за 10 часов до теста QMG. Дозовые группы 0,3 мг/кг и 0,1 мг/кг сравнивали с дозовой группой плацебо, и линейные тенденции оценивали на основе всех трех групп лечения.

Вторичные конечные точки эффективности включали изменение на Неделе 12 по сравнению с исходным уровнем MG-ADL, MG-QOL15r оценок и суммарной оценки MG. Каждую из активных доз сравнивали с группой плацебо. Что касается субъектов со снижением QMG оценки на ≥3 балла на Неделе 12 и субъектов, нуждающихся в вспомогательной резервной терапии в течение 12-недельного периода лечения, процент субъектов, достигших конечной точки для каждой из групп активного лечения, сравнивали с группой плацебо.

Определенный порядок анализа конечных точек эффективности был спланирован таким образом, чтобы снизить утомляемость субъектов и повысить надежность результатов. Сначала осуществляли анализ MG-QOL15r, затем анализ MG-ADL, определение QMG оценки и суммарной оценки MG. Оценки осуществлял один и тот же специалист на протяжении всего исследования, чтобы уменьшить вариативность оценок.

Результаты

Были получены результаты исследования от широкой демографически хорошо сбалансированной популяции участников. Исходные характеристики до исследования для участников исследования представлены в Таблице 5. В таблице “SD” означает “стандартное отклонение”, и “SOC” означает “стандартное лечение”.

Таблица 5
Исходные характеристики участников исследования Характеристика Плацебо
(n=15) 0,1 мг/кг зилукоплана (n=15) 0,3 мг/кг зилукоплана (n=14) Возраст, годы, среднее значение (SD) 48,4 (15,7) 45,5 (15,7) 54,6 (15,5) Мужчины, n (%) 4 (26,7%) 7 (46,7%) 10 (71,4%) Масса тела, кг, среднее значение (SD) 85,27 (21,44) 93,71 (24,72) 110,9 (30,79) BMI, среднее значение (SD) 30,856 (7,386) 32,804 (6,548) 36,000 (8,242) Раса, n (%)
Белые
Азиаты
Черные или афро-американцы 12(80,0%)
1(6,7%)
2(13,3%) 13(86,7%)
0
2(13,3%) 11(78,6%)
1(7,1%)
2(14,3%) MGFA класс при скрининге
II
III
IV 7(46,7%)
8(53,3%)
0 5(33,3%)
10(66,7%)
0 5(35,7%)
5(35,7%)
4(28,6%) Возраст при начале заболевания, годы, среднее значение (SD) 40,3 (17,79) 37,3 (16,04) 46,9 (19,48) Продолжительность заболевания, годы, среднее значение (SD) 8,04 (0,1, 20,9) 8,71 (1,6, 24,1) 8,3 (0,5, 26,0) Исходная QMG оценка, среднее значение (SD) 18,7 (4,0) 18,7 (4,0) 19,1 (5,1) Исходная MG-ADL оценка, среднее значение (SD) 8,8 (3,6) 6,9 (3,3) 7,6 (2,6) Исходная MGC оценка, среднее значение (SD) 18,7 (5,7) 14,5 (6,3) 14,6 (6,3) Исходная MG-QOL15r оценка, среднее значение (SD) 15,9 (7,4) 19,1 (5,0) 16,5 (7,3) Предшествующие терапии MG (стандартное лечение)
пиридостигмин, n (%)
Кортикостероиды, n (%)
Иммуносупрессанты, n (%) 14(93,3%)
13(86,7%)
12(80,0%) 15(100%)
13(86,7%)
12(80,0%) 14(100%)
14(100%)
9(64,3%) Предшествующее введение IVIG, n (%) 9 (60,0%) 8 (53,3%) 10 (71,4%) Предшествующий плазмообмен, n (%) 7 (46,7%) 9 (60,0%) 7 (50,0%) Предшествующая тимэктомия, n (%) 5 (33,3%) 8 (53,3%) 7 (50,0%) Предшествующий MG криз, требующий интубации, n (%) 3 (20,0%) 4 (26,7%) 2 (14,3%)

Популяция включала субъектов с исходными характеристиками заболевания, указывающими на рефрактерный, а также нерефрактерный статус заболевания. Исходные характеристики заболевания, включая классификацию MGFA и показатели эффективности, также были хорошо сбалансированы среди участников исследования. В исследовании 15 субъектов получали плацебо, 15 субъектов получали зилукоплан в низкой дозе (0,1 мг/кг) и 14 субъектов получали зилукоплан в высокой дозе (3 мг/кг). Критерий значимости был предварительно определен при одностороннем альфа 0,1.

Исходные демографические характеристики были схожими во всех группах, что касается среднего возраста (от 48,4 до 54,6 лет), расовой принадлежности (от 78,6 до 86,7% белых), средней массы тела (от 85,27 до 110,9 кг) и среднего BMI (от 30,856 до 36,000). Наблюдался дисбаланс между группами по половому признаку: 71,4%, 46,7% и 26,7% мужчин в группах зилукоплана 0,3 мг/кг, зилукоплана 0,1 мг/кг и плацебо, соответственно. Однако не известно, играет ли пол значительную роль в ответе на лечение при gMG.

Медицинский анамнез, включая продолжительность заболевания, предшествующий MG криз, предшествующую тимэктомию и предшествующее лечение пиридостигмином, терапию кортикостероидами, иммунодепрессанты или вспомогательную резервную терапию с IVIG или PLEX, был хорошо сбалансирован по группам лечения. Более 90% субъектов в каждой группе получали ингибиторы ацетилхолинэстеразы; более 85% получали кортикостероиды; от 64,3 до 80% получали иммуносупрессивную терапию; от 53,3 до 71,4% получали IVIG; и от 46,7 до 60,0% прошли плазмообмен.

Степень тяжести заболевания MG, измеренная по классификации MGFA, была одинаковой во всех группах лечения, при этом все пациенты в группах зилукоплана и плацебо 0,1 мг/кг относились к классу MGFA II (легкая степень тяжести) и III (умеренная степень тяжести заболевания), хотя в группу зилукоплана 0,3 мг/кг также входили четыре пациента с IV классом MGFA (тяжелое заболевание).

Специфические исходные характеристики MG были хорошо сбалансированы по первичным (QMG) и первым вторичным (MG-ADL) оценкам конечных точек со средними исходными значениями QMG 19,1, 18,7 и 18,7; и средними баллами MG-ADL 7,6, 6,9 и 8,8 в группах зилукоплана 0,3 мг/кг, зилукоплана 0,1 мг/кг и плацебо, соответственно. MG-QOL15r оценка была примерно на три балла выше в группе зилукоплана 0,1 мг/кг по сравнению с группой зилукоплана 0,3 мг/кг, со средними MG-QOL15r баллами 16,5, 19,1 и 15,9 в группах 0,3 мг/кг зилукоплана, 0,1 мг/кг зилукоплана и плацебо, соответственно. MGC оценка была на > 4 балла выше в группе плацебо по сравнению с двумя другими группами, со средними MGC баллами 14,6, 14,5 и 18,7 в группах 0,3 мг/кг зилукоплана, 0,1 мг/кг зилукоплана и плацебо, соответственно.

Результаты клинической эффективности представлены в Таблице 6. В таблице p-значения являются односторонними на основании анализа модели ковариации (ANCOVA), с исходными значениями в качестве ковариат и с использованием переноса данных последнего наблюдения (LOCF) для субъектов, которые получали вспомогательную резервную терапию. “LS” означает “наименьшие квадраты”, “CFB” означает изменение от исходного уровня, а “se” означает “стандартную ошибку”.

Таблица 6
Результаты клинической эффективности Значение QMG MG-ADL MG-QOL15r MGC 0,3 мг/кг зилукоплана CFB LS среднее значение(se) -6,0 (1,2) -3,4 (0,9) -5,9 (1,7) -7,4 (1,6) 0,1 мг/кг зилукоплана CFB LS среднее значение(se) -5,5 (1,2) -3,3 (0,9) -7,4 (1,7) -5,3 (1,5) Плацебо LS среднее значение CFB (se) -3,2 (1,2) -1,1 (0,9) -2,1 (1,7) -3,3 (1,6) 0,3 мг/кг зилукоплана CFB LS средняя разница vs. плацебо -2,8 (1,7) -2,3 (1,3) -3,7 (2,4) -4,1 (2,2) p-значение 0,05 0,04 0,06 0,04 0,1 мг/кг зилукоплан CFB LS средняя разница vs. плацебо (se) -2,3 (1,7) -2,2 (1,3) -5,3 (2,4) -2,0 (2,2) p-значение 0,09 0,05 0,02 0,19

Группы лечения 0,3 мг/кг показали клинически значимое и статистически значимое улучшение QMG оценки (≥ 3 балла) по сравнению с исходным уровнем во временной точке 12 недель (Фиг. 3), при средней разнице по сравнению с плацебо -2,8. Клинически значимое и статистически значимое улучшение MG-ADL оценки (≥ 2 балла) по сравнению с исходным уровнем также наблюдалось в этой группе лечения на Неделе 12 (Фиг. 4), со средней разницей по сравнению с плацебо -2,3. Клинически значимые и статистически значимые улучшения также наблюдались в группе лечения низкой дозой, демонстрируя лишь немного меньшие изменения по сравнению с исходным уровнем, чем те, которые наблюдались у субъектов с более высокими дозами. При лечении более низкими дозами (0,1 мг/кг) наблюдалось клинически значимое и статистически значимое улучшение QMG оценки со средней разницей в -2,3 балла по сравнению с плацебо на Неделе 12 (Фиг. 5). Клинически значимые и статистически значимые изменения MG-ADL оценки на Неделе 12 также наблюдались в этой группе (средняя разница -2,2 по сравнению с плацебо; Фиг. 6). Изменения MG-ADL оценки от исходного уровня для плацебо по сравнению со средними изменениями объединенных групп лечения зилукопланом с низкой и высокой дозой (n=29) показаны на Фиг. 7 и демонстрируют статистически значимое преимущество лечения зилукопланом по сравнению с плацебо (средняя разница -2,2 по сравнению с плацебо; p=0,047, 2-сторонний). При сравнении отвечающих на лечение субъектов и субъектов, отвечающих на плацебо, в группе высокой дозы и плацебо через 12 недель, самые высокие уровни улучшения QMG оценки и MG-ADL - все были в группе лечения зилукопланом, и, как правило, было больше пациентов, получавших зилукоплан, с улучшениями при каждом уровне отсечки по сравнению с плацебо.

Зилукоплан снижал потребность в вспомогательной резервной терапии, при этом только один субъект (7%) в группе лечения с низкой дозой и ноль субъектов в группе лечения с высокой дозой нуждались в вспомогательной резервной терапии (по сравнению с тремя субъектами (20%), нуждающимися в вспомогательной резервной терапии в группе плацебо). Не наблюдалось значительных различий в конечных точках между группами лечения на основании ковариат предшествующей терапии (иммуносупрессивная терапия, IVIG или PLEX), все с P значениями выше 0,20.

Анализ отвечающих на лечение осуществляли для конечных точек QMG и MG-ADL. Клинически значимый ответ по общему баллу QMG определяли как улучшение на три или более балла, что согласуется с верхним пределом установленной минимальной клинически значимой разницы (MCID) для QMG (Barohn et al. 1998; Katzberg et al. 2014). Доля отвечающих на Неделе 12 с использованием отсечки ≥3 балла по QMG была выше для субъектов, получавших 0,3 мг/кг зилукоплана (n=10/14) и 0,1 мг/кг зилукоплана (n=10/15) по сравнению с группой плацебо (n=8/15) (Фиг. 8). Дополнительные заранее запланированные анализы показали преимущество для групп, получавших зилукоплан, при всех отсечках по QMG, при этом не было ни одного пациента с ухудшением в группе 0,3 мг/кг зилукоплана по сравнению с тремя и двумя субъектами в группах 0,1 мг/кг зилукоплана и плацебо, соответственно. Ни одно из этих различий не было статистически значимым, за исключением группы 0,1 мг/кг зилукоплана по сравнению с плацебо при отсечках улучшения ≥7 баллов и ≥11 баллов (Таблица 7), без какой-либо поправки на множественное тестирование. В целом, данные соответствовали первичному анализу, в целом показывая более высокий клинический ответ в группах, получавших зилукоплан, чем в группе плацебо.

Таблица 7
Доля субъектов с улучшением/ухудшением QMG оценок на Неделе 12 Отсечка 0,3 мг/кг зилукоплана
n=14 0,1 мг/кг зилукоплана
n=15 Плацебо
n=15 Ухудшение 0 (0%) 3 (20,0%) 2 (13,3%) Улучшение на ≥3 балла 10 (71,4%) 10 (66,7%) 8 (53,3%) Улучшение на ≥7 баллов 6 (42,9%) 8 (53,3%)* 3 (20,0%) Улучшение на ≥11 баллов 2 (14,3%) 4 (26,7%)* 0 (0%) * p<0,1 (точный критерий Фишера, сравнение с использованием одностороннего p-значения каждой дозовой группы зилукоплана versus плацебо).

Общепринятой MCID по общему баллу MG-ADL является улучшение на два или более балла (Wolfe et al. 1999; Muppidi et al. 2011). Анализы также включали более высокие отсечки вплоть до разницы на по меньшей мере 11 баллов. Доля отвечающих на лечение на Неделе 12 с использованием отсечки ≥2 балла по MG-ADL была выше у субъектов, получавших зилукоплан в дозе 0,3 мг/кг (n=10/14, 71,4%) и 0,1 мг/кг (n=10/15), по сравнению с группой плацебо (n=8/15) (Фиг. 9 и Таблица 8).

Таблица 8
Доля субъектов с улучшением/ухудшением MG-ADL оценок на Неделе 12 Отсечка 0,3 мг/кг зилукоплана
n=14 0,1 мг/кг зилукоплана
n=15 Плацебо
n=15 Ухудшение 1 (7,1%)* 1 (6,7%)* 5 (33,3%) Улучшение на ≥2 балла 10 (71,4%) 9 (60,0%) 8 (53,3%) * p<0,1 (Точный критерий Фишера, одностороннее p, без поправки на множественное тестирование).

Оценивали конечную точку минимального проявления симптомов (MSE), чтобы определить, сколько субъектов избавились или практически избавились от симптомов MG (на основе достижения общей MG-ADL оценки 0 или 1) при терапии зилукопланом. В этом исследовании 35,7% (5/14) субъектов в группе 0,3 мг/кг зилукоплана достигли MG-ADL 0 или 1, по сравнению с 26,7% (4/15) в группе 0,1 мг/кг зилукоплана и 13,3% (2/15) в группе плацебо (скорректированные на плацебо показатели показаны на Фиг. 10). Кроме того, процент достижения для группы лечения высокими дозами был выше по сравнению с наблюдаемым при 26-недельном лечении экулизумабом (на основе результатов исследования экулизумаба, представленных в Vissing, J. et al., 2018. AANEM Abstract 193). Этот анализ подчеркнул высокую степень, до которой возможно достижение улучшения субъективного восприятия бремени болезни за короткий период времени при применении зилукоплана. В этом анализе снова была очевидна зависимость доза-ответ, с более высокой долей пациентов, достигших MSE в группе введения 0,3 мг/кг зилукоплана.

Осуществляли редкий отбор образцов для оценки фармакокинетических и фармакодинамических данных. Стабильные концентрации зилукоплана в плазме достигались в течение первых двух недель лечения, и дальнейшего накопления не наблюдалось (Фиг. 11). Уровни зилукоплана в стабильном состоянии (через две недели или позже) в дозовой группе 0,3 мг/кг зилукоплана находились в диапазоне от 7168 нг/мл до 13710 нг/мл, в то время как они составляли от 2364 нг/мл до 7290 нг/мл в дозовой группе 0,1 мг/кг зилукоплана. Доза зилукоплана 0,3 мг/кг постоянно обеспечивала полное ингибирование терминального пути комплемента, что измерялось с использованием реакции гемолиза с бараньими эритроцитами (sRBC) (постоянное ингибирование ≥95%). Доза зилукоплана 0,1 мг/кг, напротив, не всегда приводила к полному ингибированию гемолиза (Фиг. 12). Фармакокинетические и фармакодинамические результаты тесно коррелировали у пациентов с gMG (Фиг. 13), что указывает на полное ингибирование терминального пути комплемента при концентрациях зилукоплана в плазме выше примерно 9000 нг/мл.

В целом, лечение зилукопланом как высокими, так и низкими дозами было эффективным с минимальными побочными эффектами, а более высокие дозы приводили к более устойчивому клиническому улучшению.

Пример 4. Дополнительная часть

По завершении периода лечения в основной части исследования, описанном в приведенном выше примере, всем субъектам была предоставлена возможность получать зилукоплан в дополнительной части исследования при условии, что они соответствовали критериям выбора для дополнительной части. Субъекты, распределенные в группу лечения зилукопланом во время основной части исследования, продолжали получать ту же дозу исследуемого препарата во время дополнительной части. Субъекты, распределенные в группу плацебо во время основной части исследования, были рандомизированы в соотношении 1:1 для получения суточных доз 0,1 мг/кг зилукоплана или 0,3 мг/кг зилукоплана. Оценки и визиты в течение первых 12 недель дополнительной части исследования были идентичны основной части исследования для всех субъектов, чтобы обеспечить надлежащий мониторинг субъектов, переходящих с плацебо к активному лечению, и сохранить неосведомленность субъектов о назначении лечения.

Критерии отбора для включения в дополнительную часть включали: (1) положительный серологический тест на аутоантитела к AChR; (2) отрицательный сывороточный тест на беременность при скрининге женщин, способных к деторождению, и отрицательный тест мочи на беременность за 24 часа до первой дозы исследуемого лекарственного средства; (3) согласие на использование эффективных средств контрацепции во время исследования для сексуально активных субъектов женского пола с детородным потенциалом (т.е. женщин, не находящихся в постменопаузе или у которых не проводилась гистерэктомия, двусторонняя овариэктомия или двусторонняя перевязка маточных труб) и всех мужчин (которые не подвергались хирургической стерилизации путем вазэктомии); (4) использование любых неразрешенных лечений в соответствии с критериями исключения из основной части исследования или изменение дозировки любых других сопутствующих лекарственных средств, если нет медицинских показаний; (5) и никаких новых медицинских состояний с момента включения в основную часть исследования.

Во время дополнительной части исследования биопсийные срезы, полученные от субъектов, перенесших тимэктомию, лимфаденэктомию или другое хирургическое удаление, были отправлены на исследовательский иммуногистохимический анализ и анализ на биомаркеры.

41 пациент завершили 12-недельную дополнительную часть исследования (общий период лечения 24 недели). Устойчивые ответы наблюдали для каждой конечной точки: (1) QMG, снижение на 8,7 балла по сравнению с исходным уровнем, p <0,0001 (Фиг. 14); (2) MG-ADL, снижение на 4,5 балла по сравнению с исходным уровнем, p <0,0001 (Фиг. 15); (3) Совокупная оценка MG, снижение на 10,2 балла по сравнению с исходным уровнем, p <0,0001 (Фиг. 16); и MG-QOL15r, снижение на 7,5 балла по сравнению с исходным уровнем, p=0,0006 (Фиг. 17).

Субъекты плацебо, переходящие на активное лекарственное средство через 12 недель, также испытали быстрое, клинически значимое и статистически значимое улучшение для каждой конечной точки: (1) QMG, снижение на 3,1 балла по сравнению с уровнем до лечения (уровень, ассоциированный с 12-недельным лечением плацебо), p=0,01 (Фиг. 14); (2) MG-ADL, снижение на 3,6 балла по сравнению с уровнем до лечения, p=0,0004 (Фиг. 15); (3) Совокупная оценка MG, снижение на 5,5 балла по сравнению с уровнем до лечения, p=0,004 (Фиг. 16); и MG-QOL15r, снижение на 4,0 балла по сравнению с уровнем до лечения, p=0,04 (Фиг. 17).

Пример 5. Фармакогеномный анализ

Фармакогеномный анализ осуществляли на образцах крови, полученных при скрининге. Геномные исследования [например, секвенирование дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), анализ числа копий ДНК и профилирование экспрессии рибонуклеиновой кислоты] включают определение, коррелируют ли конкретные геномные характеристики с ответом или резистентностью к исследуемому препарату.

Пример 6. Общий анализ мочи

Анализ мочи осуществляют на образцах, собранных во время скрининга и во время всех визитов исследования и вспомогательной резервной терапии для оценки pH, удельного веса, белка (качественный), глюкозы (качественный), кетонов (качественный), билирубина (качественный), уробилиногена, скрытой крови, гемоглобина и клеток. При необходимости осуществляют микроскопическое исследование для подтверждения результатов измерения.

Пример 7. Исследование III фазы

Единое глобальное рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое многоцентровое исследование в параллельных группах (n=130), в котором испытывали лечение путем ежедневного подкожного введения 0,3 мг/кг зилукоплана по сравнению с плацебо в течение 12-недель, осуществляли для оценки эффективности зилукоплана у субъектов с gMG. После 12-недельного периода двойного слепого плацебо-контролируемого исследования все субъекты имели возможность получать зилукоплан в открытом дополнительном периоде исследования. Оценивали изменения оценок MG-ADL (первичная конечная точка), QMG, суммарной оценки MG и MG-QOL15r у субъектов в процессе и после лечения на основной и дополнительной стадии исследования.

Пациенты с gMG зачисляются в исследование при условии удовлетворения основным критериям включения: (1) клиническая классификация MGFA Класс II-IV; (2) положительный серологический тест на анти-AChR антитела; (3) MG-ADL оценка ≥ 5; (4) QMG общая оценка ≥ 12; (5) отсутствие изменения дозы кортикостероидов или иммуносупрессорной терапии в течение по меньшей мере четырех недель, предшествующих рандомизации, или ожидаемых изменений в течение 12-недельного периода лечения; и не подвергались PLEX или не получали IVIG в течение по меньшей мере четырех недель и ритуксимаб в течение по меньшей мере 12 месяцев, предшествующих введению. Отбор основан на положительном статусе анти-AChR, чтобы исключить пациентов, которые, как ожидается, не ответят на терапию ингибитором комплемента из-за отсутствия комплемент-связывающих антител, таких как анти-MUSK антитело-положительные пациенты; и гарантировать, что все пациенты, участвующие в исследовании, имеют клинически, а также лабораторно подтвержденный диагноз MG. Исследуемая популяция не ограничивается ‘рефрактерными к лечению’ пациентами, и допускается набор пациентов с разными типами заболевания. Нет никаких механистических оснований полагать, что ингибирование терминального комплемента эффективно только у пациентов, исчерпавших все другие методы лечения.

Пример 8. Зилукоплан ингибирует аутоантитело-индуцируемую активность комплемента на нейромышечном соединении (NMJ)

Получали совместные культуры человеческих мышечных трубочек и клеток нейробластомы и культивировали с человеческой сывороткой в ​​качестве модели NMJ in vitro. Клетки культивировали с или без 10 мкМ зилукоплана и 637 антител против ацетилхолинового рецептора (AChR) либо IgG1, либо IgG4 формата. Известно, что IgG1 антитела способствуют комплемент-опосредованному отложению C5b-9, тогда как у IgG4 антител нет такой функции. Последующее отложение C5b-9 наблюдали при помощи иммунофлуоресценции с использованием анти-C5b-9 антитела (aE11, AbCam, Cambridge, UK). Отложение C5b-9 наблюдали в клетках, культивированных с анти-AChR 637 IgG1, но без зилукоплана. Отложение C5b-9 отсутствовало в клетках, культивированных в тех же условиях, но с 10 мкМ зилукоплана. Поскольку комплемент-опосредованное разрушение NMJ способствует патогенезу gMG, эти данные иллюстрируют механистическое обоснование положительных клинических ответов, наблюдаемых в описанных выше исследованиях на людях.

Пример 9. Проникающая способность зилукоплана

Проникающую способность зилукоплана in vitro оценивали с использованием модели базальной мембраны. В модели оценивали диффузию зилукоплана через гелевую мембрану внеклеточного матрикса (ЕСМ) (полученную, как описано в Arends, F. et al. 2016. IntechOpen, DOI: 10.5772/62519) и сравнивали с диффузией экулизумаба. В модели соединения вводили в верхний резервуар, который был отделен от нижнего резервуара гелевой мембраной ECM. Была получена гелевая мембрана ЕСМ, включающая компоненты матрикса, имитирующие компоненты, обнаруженные в базальной пластинке нервно-мышечных соединений. Проникающую способность соединений через мембрану оценивали путем их детекции в нижнем резервуаре. Более 20% зилукоплана, введенного в верхний резервуар, диффундировало в нижний резервуар через 12 часов и более 60% через 24 часа (см. Фиг. 18). Напротив, менее 20% экулизумаба диффундировало в нижний резервуар через 24 часа. Результаты демонстрируют превосходную проникающую способность зилукоплана через базальную мембрану по сравнению с экулизумабом (примерно в четыре раза выше), что свидетельствует о преимущественном проникновении в ткани.

Повышенная проникающая способность зилукоплана была подтверждена количественным анализом всего тела (QWBA). Для этого исследования С-концевой лизин зилукоплана метили радиоактивным изотопом ¹⁴С и вводили крысам. Животных визуализировали для определения концентрации радиоактивно меченного зилукоплана с течением времени (24 часа) в различных органах и тканях. Площадь под кривой концентрации (AUC) для каждого анализируемого органа или ткани выражали как процент от AUC в плазме, чтобы получить значение биодистрибуции, представленное в Таблице 9 ниже. Прогнозируемые значения биодистрибуции экулизумаба, основанные на исследованиях биодистрибуции моноклональных антител, опубликованные в Shah, D.K., et al. 2013. mAbs. 5:297-305, приведены для сравнения.

Таблица 9
Сравнение биодистрибуции Орган/ткань Биодистрибуция экулизумаба, % Биодистрибуция зилукоплана, % Легкое 14,9 37,5 Сердце 10,2 22,9 Мышца 3,97 7,0 Тонкий кишечник 5,22 10,9 Толстый кишечник 5,03 21,7 Селезенка 12,8 15,5 Печень 12,1 27,1 Кость 7,27 15,3 Желудок 4,98 8,5 Лимфоузлы 8,46 12,8 Жировая ткань 4,78 16,2 Головной мозг 0,35 0,9 Поджелудочная железа 6,4 15,8 Семенники 5,88 15,5 Тимус 6,62 7,8

Эти результаты подтверждают использование зилукоплана для ингибирования активности C5 в тканях, где необходимо проникновение в ткани ингибитора C5, и где способность экулизумаба к проникновению в ткани является недостаточной.

Пример 10. Взаимодействие зилукоплана с другими лекарственными средствами

Исследования взаимодействия зилукоплана с другими лекарственными средствами in vivo осуществляли с потенциальными сопутствующими препаратами на отличных от человека приматах. В первом исследовали эффекты циклоспорина А на фармакокинетику зилукоплана и наоборот. Циклоспорин A является известным ингибитором транспортирующих органические анионы полипептидов (OATP) 1B1 и OATP1B3 и является потенциальным сопутствующим препаратом при PNH. Никаких эффектов на экспозицию зилукоплана не наблюдали после введения циклоспорина A, и никаких эффектов на экспозицию циклоспорина A не наблюдали после введения зилукоплана. Эти результаты подтверждают способы лечения комплемент-связанных показаний (например, тяжелой миастении) у субъектов путем совместного введения зилукоплана и циклоспорина А.

Второе исследование взаимодействия с другими лекарственными средствами in vivo осуществляли с зилукопланом и ингибитором рециклинга неонатального Fc-рецептора (FcRN), DX-2507, функционально эквивалентным вариантом DX-2504 с мутациями Cys в Ala для улучшения технологичности (описано в Nixon, AE et al. 2015. Front Immunol. 6:176). Ингибируя FcRN, DX-2504 ингибирует Fc-опосредованную рециркуляцию, тем самым уменьшая период полужизни IgG антител. Введение DX-2504 служит моделью для лечения внутривенным иммуноглобулином (IVIG), которое сокращает период полужизни IgG антител за счет подавления механизма рециркуляции Fc большими дозами иммуноглобулина. Фармакокинетика и фармакодинамика зилукоплана не изменялись при одновременном введении анти-FcRN моноклональных антител DX-2507 обезьянам Cynomolgus. Кроме того, у пациента, получавшего одновременно терапевтические дозы IVIG, изменений в уровнях зилукоплана не наблюдалось. Эти результаты указывают на отсутствие эффектов ингибирования FcRN на фармакокинетику зилукоплана и подтверждают способы лечения комплемент-связанных показаний (например, тяжелой миастении) у субъектов путем комбинированного введения зилукоплана и ингибитора FcRN (DX-2504, DX-2507 или IVIG).

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> RA PHARMACEUTICALS, INC.

<120> ЛЕЧЕНИЕ НЕВРОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЗИЛУКОПЛАНОМ

<130> 2011.1035PCT

<140> PCT/US2019/XXXXXX

<141> 2019-10-22

<150> 62/899,864

<151> 2019-09-13

<150> 62/844,388

<151> 2019-05-07

<150> 62/837,974

<151> 2019-04-24

<150> 62/815,575

<151> 2019-03-08

<150> 62/777,524

<151> 2018-12-10

<150> 62/748,659

<151> 2018-10-22

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<221> источник

<223> /примечание="Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид"

<220>

<223> N-конец Ac

<220>

<221> SITE

<222> (1)..(6)

<223> /примечание="Лактамовый мостик между остатками"

<220>

<221> MOD_RES

<222> (7)..(7)

<223> N-метил-аспарагиновая кислота

<220>

<221> MOD_RES

<222> (8)..(8)

<223> Трет-батилглицин

<220>

<221> MOD_RES

<222> (10)..(10)

<223> 7-азатриптофан

<220>

<221> MOD_RES

<222> (14)..(14)

<223> Циклогексилглицин

<220>

<221> MOD_RES

<222> (15)..(15)

<223> N-эпсилон-(ПЭГ24-гамма-глутаминовая кислота-N-альфа-гексадеканоил)Lys

<400> 1

Lys Val Glu Arg Phe Asp Xaa Xaa Tyr Xaa Glu Tyr Pro Xaa Lys

1 5 10 15

<---

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, и может быть использовано при лечении миастении гравис (MG). Применение по изобретению касается лечения MG зилукопланом. Лечение включает ежедневное подкожное введение зилукоплана субъекту в дозе от 0,1 мг зилукоплана на кг массы тела до 0,6 мг зилукоплана на кг массы тела. Использование изобретения позволяет достичь уменьшения проявления симптомов MG, повышения клинического ответа на лечение, снижения потребности во вспомогательной терапии. 21 з.п. ф-лы, 9 табл., 18 ил., 10 пр.

1. Применение зилукоплана для лечения миастении гравис (MG), причем лечение включает ежедневное подкожное (п/к) введение зилукоплана субъекту в дозе от 0,1 мг зилукоплана на кг массы тела до 0,6 мг зилукоплана на кг массы тела.

2. Применение по п.1, где MG представляет собой генерализованную MG (gMG).

3. Применение по п.1 или 2, где зилукоплан вводят в целевой дозе 0,3 мг/кг.

4. Применение по п.1 или 2, где зилукоплан вводят в суточной дозе от 0,3 мг/кг до 0,42 мг/кг.

5. Применение по п.4, где зилукоплан вводят в дозе 0,3 мг/кг.

6. Применение по пп.1-5, где зилукоплан находится в растворе и раствор содержит от 4 мг/мл до 200 мг/мл зилукоплана.

7. Применение по п.6, где раствор содержит 40 мг/мл зилукоплана.

8. Применение по любому из пп.1-7, где введение включает использование предварительно заполненного шприца.

9. Применение по любому из пп.1-7, где введение включает самостоятельное введение с использованием устройства для самостоятельного введения.

10. Применение по п.9, где устройство для самостоятельного введения содержит предварительно заполненный шприц.

11. Применение по любому из пп.6-10, где зилукоплан находится в растворе, не содержащем консервантов.

12. Применение по п.9, где устройство для самостоятельного введения включает объем раствора зилукоплана от 0,15 мл до 0,81 мл.

13. Применение по любому из пп.1-12, где субъект проходит скрининг перед введением зилукоплана.

14. Применение по п.13, где скрининг включает оценку количественного показателя миастении гравис (Quantitative Myastenia Gravis (QMG).

15. Применение по п.14, где показатель QMG у субъекта составляет ≥ 12.

16. Применение по п.13, где скрининг включает определение уровней аутоантител к рецептору ацетилхолинэстеразы (AChR).

17. Применение по любому из пп.1-16, где ингибируется образование пор мембраноатакующего комплекса (MAC) в области нейромышечного соединения (NMJ) у субъекта.

18. Применение по любому из пп.1-17, где зилукоплан вводят в комбинации с терапевтическим средством.

19. Применение по п.18, где терапевтическое средство выбрано из экулизумаба, пиридостигмина, кортикостероида и иммуносупрессанта.

20. Применение по п.19, где иммуносупрессант включает соединение, выбранное из одного или более из азатиоприна, циклоспорина, циклоспорина А, микофенолят мофетила, метотрексата, такролимуса, циклофосфамида и ритуксимаба.

21. Применение по п.19, где терапевтическое средство включает ингибитор неонатального Fc-рецептора (FcRN).

22. Применение по п.21, где неонатальный ингибитор FcRN включает внутривенный иммуноглобулин (IVIG).