Способ диагностики сахарного диабета Советский патент 1984 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, 9 частности к эндокринологии и гематологии, и может быть использовано для диагностики сахарного диабета. Известен способ диагностики сахарного диабета путем определения содержания иммунореактивного инсулина в крови при проведении пробы на толерантность к глюкозе 1 . Однако этот способ характеризует ся невысокой точностью. Известен способ диагностики сахарного диабета путем определения содержания гликозилированного гемоглобина в эритроцитах крови 2. Недостатком известного способа является его невысокая точность, по скольку повышенное содержание глико зилированного гемоглобина может быт у лиц с повышенным содержанием фемального гемоглобина, при наличии других генетических обусловленных аномальных форм гемоглобина, например у больных уремией.Цель изобретения - повышение точ ности диагностики. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу диагности ки сахарного диабета путем определе ния содержания гликозилированного гемоглобина в эритроцитах крови,дополнительно определяют содержание ферритина и трансферрина в сыворотке крови и при повышении содержания ферритина и гликозилированного гемоглобина и снижении уровня трансферрина диагностируют сахарный диабет. Способ осуществляют следующим об разом. В крови испытуемого проводят количественные определения трех биохи ческих маркеров: ферритина, трансфе рина и гликозилированного гемоглоби на. Для определения ферритина и тран феррина берут 5 мл венозной крови в сухую пробирку и отделяют сыворотку Для Ъпределения ферритина в пробирку, содержащ-ую 0,5 мл взвеси биогел Р-300, связанного с антителами прот ферритина печени, добавляют 0,1 мл исследуемой сыворотки, инкубируют пробирку 3 ч при 37°С. Избыток сыворотки отмывают 3 раза физиологиче ским раствором, в пробирку вносят 0,1 мл антисыворотки, меченой 232 йодом-125, и инкубируют 30 мин при 37°С; затем избыток меченоу антисыворотки отмывают 3 раза физиологическим раствором. Радиоактивность определяют на счетчике J-лучей и по активности высчитывают количество ферритина на основе предварительно построенной кривой связывания стандартных количеств ферритина в приведенных условиях. Определение трансферрина проводят следующим образом. 1 мл антисыворотки против трансферрина смешивают с 10 мл 1%-ного агара Дифко, разогретого до 56 С, и выливают в чашку Петри, охлаждают, делают лунки величиной 0,05 мм специальным пробойником, в лунки вносят по 2 мкл стандартной сыворотки в 3-х разедениях и исследуемых сывороток. На следующий день измеряют величину кольца преципитации, по стандартным разведениям строят кривую и по ней определяют содержание трансферрина в исследуемой пробе-. Для определения гликозилированного гемоглобина (ГЛИ-Нв) 1 мл эритроцитов отмьшают 3 раза физиологическим раствором, гемолизируют, добавляя 3 мл дистиллированной воды, диализуют в течение ночи против дистиллированной воды, центрифугируют при 8000 об/мин 1 ч и получают гемолизат. 1 мл гемолизата забуферивают, пропуская через колонку с Seph g-2S, забуференную фосфатньм буфером, рН 6,7; 0,1 М. 1 мл забуференного гемолизата наносят на колонку с БИО-Рекс-70, предварительно забуференнзто тем же буфером. Собирают первые 70 мл, измеряют оптическую плотность при 414 нм. Одновременно измеряют оптическую плотность исходного гемолизата. Процент гликозилированного Нв рассчитывают по фор-мулеilft 100% ти %НвА|с , оптическая плотность фракции, содержащей НвА-г.. ; оптическая плотность исходного гемолизата; разведение исходного гемолизата;объем фракции, мл. 3Содержание ферритина, трансферри на и гликозилированного гемоглобина в норме соответствует;: -180 30 мкг/мм; 260jH20 кг% и 2,14-0,6%. В тех случаях, когда содержание ферритина и гликозилированного гемоглобина выше нормы, а трансферрина ниже нормы, диагностируют сахарн диабет. Пример 1. У больной Л., 50 лет, при массовом эпидемиологическом обследовании выявлены следую щие данные: ферритин 598 мкг/л, тра феррин 160 мг %, Гли-Нв-2%, базально содержание глюкозы 95 %, гликозо толерантный тест (ГТТ): натощак 86 мг %, через 1 ч после нагрузки 140 мг %, через 2 ч 76 %, что соответствовало нормальным значениям, кроме уровня ферритина и трансферри на. Учитывая,что у .больной была отягощена наследственность в отношении сахарного диабета (мать и сестра болели сахарным диабетом), ее включили в группу потенциального диабета. Повторное обследование был проведено через 3 мес., результаты по ферритину и трансферрину оставались повьшенными, содержание Гли-Нв также повысилось (12,5%), но тест на толерантность к глюкозе был еще не изменен. Следующее обследование было проведено через 4 мес, при это обследовании содержания ферритина, трансферрина и Гли-Нв оставались увеличенными, но и показатели ГТТ были к этому времени также изменены натощак 98 мг%, через 1 ч 220 мг% 34 через 2 ч 170 мг%. По совокупности всех данных был поставлен диагноз латентного диабета. Пример 2. Больной А., 20 лет, при обследовании было выявлено повыщение ферритина 410 мкг/л, понижение трансферрина 145 мг%, однако уровень Гли-Нв был повьшен незначительно (6,5%), а ГТТ был нормальным: натощак 75 мг%, через 1 ч 135 мг%, через 2 ч 72 мг%. Больной был рыписан из стационара с рекомендацией повторного обследования через 4 мес. При повторном обследовании, кроме повышения ферритина и трансферрина, наблюдалось уже значительное повьш1ение Гли-Нв (16,5%),а также изменения в ГТТ: натощак 100 мг%, через 1 ч после нагрузки 250 мг%, через 2 ч 190 мг%. Больному был поставлен диагноз латентного диабета, а через год был диагностирован сахарный диабет. П р .и м е р 3. Больная А-ва, 6 лет. Диагноз - J -талассемия. При обследовании было выявлено повышение ферритина 500 мкг/л и Гли-Нв 7%, однако трансферрин оставался в пределах нормы 265 кг%, ГТТ тоже был в пределах нормы. При последующих наблюдениях нарушения углеводородного обмена обнаружено не было. Использование изобретения в медицинской практике позволяет повысить точность диагностики сахарного диабета на 25-30% и может быть использовано при диагностике потенциальной и латентной форм сахарного диабета.

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ САХАРНОГО .ДИАБЕТА путем определения содержания гликозилированного гемоглобина в эритроцитах крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности диагностики, дополнительно определяют содержание ферритина и трансферрина в сыворотке крови и при повышении содержания гликозилированного гемоглобина и ферритина и снижении уровня трансферрина диагностируют сахарный диабет. (Л С