Штамм @ @ @ -215,обладающий фунгицидным действием в отношении фитопатогенных грибов Советский патент 1985 года по МПК C12P1/04 C12P1/04 C12R1/07 

4 i4

СО

-vj

ч Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано для борьбы с фитопатогенными грибами - возбудителями заболеваний сельскохозяйственных культур. Известен штамм культуры Bacillus thuringiensis, используемый для получения энтомопато енных бактериальных препаратов, применяемых в сельском и лесном хозяйстве для борьбы с вредными насекомыми lj . Однако известный штамм не подавляет роста и развития фитопатогенных грибов - возбудителей таких заболева НИИ- сельскохозяйственных культур как вертициллезное увядание хлопчатника фузариоз овощей, корневая гниль бахчевых. Технических культур, мучниста роса огурцов и т.д. Цель изобретения - получение штам ма, обладающего фунгицидными свойствами к ряду .фитопатогенных микроорганизмов, вызывающих заболевание растений., Цель достигается.с помощью штамма Bacillus thuringiensis ига1-215. Штамм получен в результате отбора естественных вариантов штамма 26 кул туры ВТ sub sp. gallerial, депонирован в коллекции Центрального музея промьшшенных микроорганизмов ВНИИгенетика под номером В-29-18 и хара теризуется следующими признаками. Морфологические признаки. Клетки палочковидные, прямые, с закругленными концами, подвижные, расположенные одиночно, парами или цепочками, на агаризованных средах цепочки короткие, на мясо-пептонном агаре , величина клеток в экспоненциальной фазе развития равна 0,7-0,9 х 2,03,0 ммк.. Грамположительные. Перит-. рихи. Споры крупные, овальной формы, расположены центрально или субтерминально. Особенностью штамма является отсутствие белкового параспорального включения - кристалл-токсина. Культуральные и физиолого-биохимические признаки. На мясо-пептонном агаре колонии среднего размера, диаметр колоний достигает 4-6 мм 5-суточной культуры. Пигмент не образует. Колонии светло-серые, матовые, с неровными кр; ями, с поверхности сухие, внутри вязкой консистенции. Л На мясо-пептонном бульоне образует пленку, осадок на 6-7 сутки. На коа гулированном желтке и на ломтиках картофеля дает рост, колонии складчатой формы,пигмент на картофеле светло-бурый. Молоко коагулирует и пептонизирует без образования пигмента. Не образует лецитиназу на яичножелтковых средах, уреазу на среде с мочевиной. Желатину разжижает. Крахмал гидролизует. На среде с казеином дает зоны просветления. Хитиназу образует. Нитраты в нитриты восстанавливает. Хорошо усваивает глюкозу, сахарозу, крахмал, маннит, удовлетворительно - целлобиозу. Не использует арабинозу, ксилозу, маннозу. Активен по отношению эскулина и не разлагает .салицин. Использует пептон, ферментативные и кислотные гидролйзаты БВК, дрожжевой автолизат, отвары и бульоны, 1 укурузные и пшеничные экстракты. Серологические свойства. Штамм ИГО1-215 не проявляет антигенного родства с сыворотками 15 серовариантов Bacillus thuringiensis. Биологическая активность штамма определялась общеизвестными методами: методом блочков, лунок, колодцев, фильтровальных дисков, смоченных культуральной жидкостью. Концентрация грибов составляла 100 спор/мл. Полученный штамм не продуцирует термостабильный р-экзотоксин и не обладает инсектицидной активностью. Он проявляет антагонистические свойства против ряда фитопатогенных микроорганизмов и имеет широкий спектр действия. Штамм выращивают на производствен ной дрожже-полисахаридной среде (ДПС). Состав среды, %: дрожжи 3,0; кукурузная мука 1,5; NaCl 0,5, водопро водная вода, рН до стерилизации 7,4. Интенсивный рост культуры на данной среде наблюдается к 12-15 ч при -28-30 С. Спорообразование отмечается к 19-22 ч и заканчивается к 44-48 ч. Процент свободных спор составляет 96%. Титр жизнеспособных спор в конце ферментации на данной среде составляет 2,5-3,0 млрд/мл. Максимальный выход был 4 млрд/мл. Штамм хранится на косяках с карто фельным агаром или под вазелиновым маслом на мясо-пептонном агаре при температуре 3-4 С или в лиофильно высушенном состоянии в ампулах. После 12 месяцев культурасохраняет основные морфолого-культуральные, физиологические и антагонистические свойства. Использование штамма иллюстрирует ся следующими примерами. Пример- 1. В качестве посевного материала используют штамм ИПМ-215, выращенный в течение 2 суто на картофельном агаре. Культивирование проводят в качалочных колбах емкостью 750 мл с 50 мл ДПС/240 260 об/мин, 28°С, 48 ч. Число жизнеспособных спор определяют методом глубинного титрования на мясо-пептонном агара. Антагонистические свойства культуральной жидкости, полученной в про цессе ферментации, проверяют по отношению ряда фитопатогенных грибов: Verticilliupj dahtiae,. Ihielaviopsis basicola, alter naria tenuissitna, bot rytis cinerea, Helminthosporium sativumj Fusarium Culmorum. Наибольший эффект действия отмечен по отношению к Verticillium dahtial. Зона подавления роста соответствовала 50-60 мм. Культурат ьная жидкость, разведенная от 10 до 10, сохраняет фунгицидные свойства, однако эффект действия снижается. Пример 2. Культуру нарабатывают в ферментереАПК-210 путем периодического культивирования в течение 48 ч на среде ДПС. Условия ферментации: 28-30°С, число оборотов мешалки 300-400 об/мин, подача воздуха 1:1, насыщение 0 -100%. В качестве инокулята используют суспензию спор двухсуточной культуры с картофельным агаром. Культуральную жидкость штамма ИПМ-215 сепарируют и высушивают на распылительной сушилке Ангидро. Температура воздуха на входе 140160°С, на выходе 75-85 С. Титр высушенного препарата 1, спор/мл. Высушенная культ ральная жидкость представляет собой сьтучий порошок кремового цвета. Этот порошок был испытан в тепличном хозяйстае совхоза Большевик против гриба Sphaerotheca - возбудителя мучнистой росы огурцов. Обработка растений npenaiратом, полученным на основе штамма ИПМ-215, подавляет развитие мучнистой росы в течение 2 недель. Использование штамма Bacillus thuringiensis ШТМ-215 позволяет расширить арсенал средств для борьбы с вредителями сельскохозяйственных культур.

Штамм Bacillus thuringiensis ИПМ-215, Б-29-18 (Центральный музей промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика), обладающий фунгищщным действием в отношении фитопатогенных грибов.