КОНСОРЦИУМ ШТАММОВ-АНТАГОНИСТОВ ДЛЯ БОРЬБЫ С БАКТЕРИАЛЬНЫМИ И ГРИБКОВЫМИ БОЛЕЗНЯМИ РАСТЕНИЙ Российский патент 2000 года по МПК A01N63/00 C12N1/20 C12P39/00 

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и представляет собой консорциум штаммов-антагонистов, который может быть использован для защиты культурных растений от фитопатогенных бактерий и грибов.

Интенсивное применение в сельском хозяйстве химических средств защиты растений приводит к загрязнению окружающей среды, нарушению экологического равновесия в природе и, как следствие, появлению новых устойчивых форм патогенов. В связи с этим возникает проблема поиска и разработки новых экологически безопасных способов защиты растений, основанных на экологическом взаимодействии организмов в природе (антагонизм, хищничество, паразитизм и т. п. ). Одним из таких перспективных способов является использование микроорганизмов-антагонистов и продуктов их жизнедеятельности для разработки и создания биопрепаратов, направленных на подавление фитопатогенной микрофлоры.

Известен и описан ряд штаммов:
Pseudomonas sp. B-3481, снижающий и предотвращающий развитие слизистого и сосудистого бактериозов у капусты (Джалилов Ф.С.-У. и др., 1990);
Pseudomonas putida B-1743Д, используемый для стимуляции роста растений и защиты растений от грибов рода Fusarium и бактерий Erwinia (Кочетков В.В. и др., 1990).

Pseudomonas fluorescens CR-328Д, проявляющий антагонистическую активность против грибов вида Alternaria sp., Botrytis cinerea, Fusarium heterosporum, F. moniliforme, Helminthosporium sativum, Sclerotinia sclerotiorum, Verticillium dahlide (Хмель T.A. и др., 1995);
Bacillus polymixa 9A, используемого для подавления фитопатогенного гриба Verticillium dahleum (Kado C.J. и др., 1984).

Общим недостатком вышеуказанных штаммов является высокая вероятность возникновения устойчивости у фитопатогенов при длительном применении монокультуры данных бактерий-антагонистов. Кроме того, спектр действия данных культур в каждом конкретном случае ограничен и не затрагивает, например, таких опасных возбудителей, как бактерии Agrobacterium и Corynebacterium, гриб Erysifales.

Известен и описан консорциум штаммов микроорганизмов-деструкторов Pseudomonas putida, Bacillus subtilis и Bacillus subtilis, используемый для очистки сточных вод (Рой А.А. и др., 1988). Однако данный консорциум бактерий может найти применение только в текстильной промышленности.

Целью изобретения является получение нового экологически безопасного и эффективного микробного препарата для борьбы с болезнями культурных растений. Для достижения поставленной цели предложен консорциум из четырех штаммов почвенных бактерий-антагонистов: Bacillus polymixa, Bacillus thuringiensis, Pantoea agglomerans, Pseudomonas chlororatis.

Преимуществом предлагаемого консорциума бактерий является то, что фитопатогены одновременно подвергаются воздействию комплекса антимикробных метаболитов, вырабатываемых антагонистами, что усиливает эффект. B.polymixa, P. chlororatis и Pantoea agglomerans продуцируют антибиотические вещества, активные против фитопатогенных грибов и бактерий. Штамм P.aglomersans также выделяет хитинолитический фермент, активный против грибов. Штамм B.thuringiensis оказывает на растения стимулирующий эффект. Кроме того, важным фактором, характеризующим данные штаммы, является их способность колонизировать ризосферу растений.

Штаммы, входящие в консорциум, не обладают фитопатогенностью, о чем свидетельствует отсутствие некротических пятен на листьях обрабатываемых культур (томаты, огурцы, капуста и др.) при нанесении на них суспензии испытуемых штаммов.

Штаммы Bacillus polymixa, Bacillus thuringiensis, Pantoea agglomerans, Pseudomonas chlororatis не обладают патогенностью, о чем свидетельствуют высокие значения LD50, полученные в пробах на мышах. Данные штаммы также не способны к инвазии, что свидетельствует об их безопасности для животных.

Для выращивания штаммов и получения препарата используют среду 925 (Langley, Kado, 1972) следующего состава, г/л:
K₂HPO₄ - 3; NaH₂PO₄ - 1; NH₄Cl - 1; сахароза - 10; MgSO₄ - 0,3; пептон - 2; водопроводная вода - 1 л.

В качестве полноценной среды используют среду МПБ (мясопептонный бульон).

Консорциум штаммов-антатонистов получают путем смешивания культур бактерий, выращенных в среде 925 в соотношении 1:1:1:1.

Штаммы хранятся на питательных косяках в холодильнике. Возобновление культуры осуществляют путем пересева на свежие косяки через 4-5 месяцев.

Штаммы идентифицировали по определителю ("Bergey's manual. .." v.1, 1984).

Выделенные штаммы депонированы во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов при ГНИИгенетика под номерами:
Bacillus polymixa - ВКПМ В-7539; Bacillus thuringiensis ВКПМ В-7540; Pantoea agglomerans - ВКПМ В-7541; Pseudomonas chlororatis - ВКПМ В-7542.

Характеристика штамма Bacillus polymixa ВКПМ В-7539.

Новый штамм B.polymixa выделен из почвы (Московская обл.).

Морфологические признаки. Грам-положительные, прямые, подвижные палочки, размером 2,0-4 мкм x 0,8 мкм. Образует эллиптические или цилиндрические, центрально-расположенные эндоспоры. На полноценной среде колонии мелкие, округлые, цвет колоний: светло-коричневый.

Физиологические свойства. Оптимальный рост при 32^oC. Штамм не растет при 5^oC, сохраняет признаки роста при 45^oC. Факультативный анаэроб.

Продуцирует ацетоин при распаде глюкозы. Образует кислоту при сбраживании арабинозы и ксилозы (маннита - слабо). Образует пектиназу, желатиназу, левансахаразу. Гидролизует крахмал, индол не образует. Каталаза положителен, не продуцирует цитразу. Расщепляет глюкозу с образованием кислоты и газа (слабо). Образует кислоту из глюкозы, лактозы, маннита, сорбита, арабинозы, мальтозы. Нитраты не редуцирует. В 10% NaCl не растет.

Устойчивость к антибиотикам: амикацину (10 мкг/мл), бисептолу (200 мкг/мл), полимиксину В (300 мкг/мл), фузидину (10 мкг/мл).

Характеристика штамма Bacillus thuringiensis ВКПМ В-7540.

Новый штамм Bacillus thuringiensis выделен из черноземной почвы (г. Саратов).

Морфологические признаки. Грам-положительные палочки, подвижные, перитрихи. Размеры 4-6 мкм x 1,0-1,2 мкм. Колонии серовато-белые, гладкие, по краям перистые, крупные. На поздних стадиях стационарного роста образует споры в субтерминальном положении, формирует белковые кристаллы, ромбовидной формы.

Физиологические свойства. Факультативный анаэроб, температурный оптимум роста 28-32^oC, не растет при 50^oC, оптимум pH 7,0-7,4. Крахмал гидролизует, клетчатку не усваивает. Продуцирует протеазы - желатину разжижает, молоко пептонизирует. Глюкозу усваивает, сахарозу, маннозу, галактозу, лактозу не сбраживает. Нитраты не редуцирует.

Штамм обладает токсичностью для гусениц 2-3 возраста вощиной моли (Galleria melonella), непарного шелкопряда.

Устойчивость к антибиотикам: ампициллину (10 мкг/мл), бензилпенициллину (10 мкг/мл), полимиксину (300 мкг/мл).

Характеристика штамма Pantoea agglomerans ВКПМ В-7541.

Новый штамм P. agglomerans выделен из корней виноградника, пораженного бактериальным раком, почва - типичный серозем, Республика Узбекистан.

Морфологические признаки. Клетки - грам-отрицательные палочки, прямые, слегка изогнутые, средней величины. Размер клеток 2-4 мкм x 0.6-0.8 мкм. Сохраняют подвижность при температуре от 22^oC до 37^oC. Цвет колоний: на среде МПБ и 925 белые с матовым оттенком, на диагностической среде сульфата висмута с бриллиантовым зеленым - колонии зеленые и коричневые.

Физиологические свойства. Факультативный анаэроб; оксидаза отрицательные, каталаза положительные. Флюоресцирующий пигмент не образует; желатину не разжижает, крахмал не гидролизует. Не нуждается в специфических факторах роста. Не образует β-галактозидазу, индол, сероводород, лизин и орнитин, уреазу. Ферментирует глюкозу, арабинозу, маннит, сорбит, сахарозу, ксилозу; не ферментирует адонит, мальтозу, инозит. При ферментации глюкозы образует кислоту (реакция с бромтимоловым синим и метиловым красным положительная); ферментация глюкозы сопровождается образованием газа и ацетоина (реакция Фогес-Мотульского положительная); при ферментации лактозы образует кислоту; при ферментации рамнозы кислоту не образует; леван из сахарозы не образуют. 3-кетолактозу не образует; способен использовать цитрат в качестве источника углерода; не утилизируют малонат натрия; не утилизирует мочевину.

Устойчивость к антибиотикам: ампициллину (10 мкг/мл), бензилпенициллину (10 мкг/мл), олеандомицину (10 мкг/мл), линкомицину (15 мкг/мл), кефзолу (10 мкг/мл), фузидину (10 мкг/мл).

Характеристика штамма Pseudomonas chlororatis ВКПМ В-7542.

Новый штамм Pseudomonas chlororatis выделен из суглинистой почвы в Саранской области.

Морфологические признаки. Клетки прямые, мелкие палочки 3,0 мкм x 0,8-1,0 мкм, подвижные, грам-отрицательные. Эндоспор не содержит. Цвет колоний: серовато-матовый. На диагностических средах Кинга продуцирует зеленый флюоресцирующий пигмент, который со временем розовеет.

Физиологические свойства: Аэроб. Клетки растут в пределах от 4 до 38^oC, с температурным оптимумом 25-30^oC, оптимум pH - 7-8. Образуют 3-кетолактозу. Прототроф. Использует в качестве источников углерода глюкозу, фруктозу, сахарозу, глицерин, дульцит, инозит, маннит. При ферментации этих веществ образуется кислота без газа. В качестве источников азота используют как минеральные соли в аммонийной форме, так и в органической форме в виде пептона, аминокислот. Нитраты не редуцируют. Крахмал не гидролизуют. Желатину разжижают. Молоко свертывают, но не пептонизируют. Образуют индол, сероводород, аммиак. Разлагают с образованием кислоты аминокислоты: l-гистидин, dl-лизин, dl-орнитин, l-аргинин, l-пролин, dl-серин; с образованием щелочи аминокислоты: l-аланин, l-аспарагин, 1-глутамин.

Устойчивость к антибиотикам: ампициллину (10 мкг/мл), бензилпенициллину (10 мкг/мл), эритромицину (10 мкг/мл).

Далее приводятся примеры, показывающие эффективность применения бактерий-антагонистов против фитопатогенных грибов и бактерий, как по отдельности, так и в составе консорциума штаммов.

Пример 1, демонстрирующий антагонизм штаммов В. polymixa ВКПМ В-7539, В. thuringiensis ВКПМ В-7540, P. agglomerans ВКПМ В-7541, P.chlororatis ВКПМ В-7542 в отношении фитопатогенной бактерии Corynebacterium michiganese и гриба Fusarium oxysporum.

Штаммы бактерий-антагонистов выращивали уколом на поверхности агаризованной среды 925 при 30^oC двое суток. После чего колонии убивали парами хлороформа в течение 30-40 минут и чашки Петри выдерживали в течение 40 - 60 минут открытыми в стерильных условиях для полного удаления остатков хлороформа. Затем на поверхность чашек наносили газон тестируемой культуры. Для получения газона культуру бактерии C.michiganese выращивали до концентрации 10⁷ кл/мл в среде 925 и вносили в 0,7% питательный агар в разведении 1:100. Чашки Петри культивировали в условиях, оптимальных для роста тестируемого штамма, при температуре 30^oC трое суток.

Гриб F. oxysporum выращивали отдельно на чашке со средой 925, после чего брали петлей фрагмент мицелия и ресуспендировали в стерильной воде так, чтобы получить концентрацию 10⁸ кфе/мл. Затем вносили в 0,7% питательный агар в разведении 1:10 и равномерно разливали на поверхность чашек Петри. После чего уколом вносили бактерии-антагонисты. Чашки ставили на 28^oC и выращивали от 3 до 5 суток, пока мицелий гриба не образовывал однородный газон.

Зоны ингибирования роста фитопатогенов определяли как радиус зоны просветления вокруг колонии штамма-антагониста (см. табл. А).

Пример 2, демонстрирующий антагонизм штаммов В. polymixa ВКПМ В-7539, В. thuringiensis ВКПМ В-7540, P. agglomerans ВКПМ В-7541, P.chlororatis ВКПМ В-7542 по отдельности и в составе консорциума в отношении фитопатогенной бактерии Agrobacterium tumefaciens.

При инфицировании растений коланхое патогенными штаммами A.tumefaciens на листьях возникают хорошо различимые опухоли - корончатые галлы. Для изучения антагонистической активности на нижнюю поверхность листьев коланхое наносили уколы (10 уколов на растение) шприцом, содержащим: отдельно онкогенный штамм A. tumefaciens 1D1 или штамм 1D1 в смеси с бактериями-антагонистами или консорциумом штаммов-антагонистов. Через 3-5 недель наблюдали и подсчитывали процент образования галлов. Полное подавление образования галлов при инфекции штаммом A.tumefaciens наблюдали в случае использования консорциума штаммов-антагонистов. Отдельные культуры подавляли образование галлов со следующей эффективностью, %:
B.polymixa - 20
B.thuringiensis - 100
P.agglomerans - 80
P.chlororatis - 85
консорциум - 100
Примеры 3-10, демонстрирующие эффективность действия штаммов-антагонистов по отдельности и в составе консорциума против возбудителей болезней растений в полевых и вегетационных опытах.

Полевые и вегетационные опыты на моделях фитопатоген-хозяин проводили согласно методическим руководствам (Доспехов, 1985).

Исследования проводили на естественном инфекционном фоне, а также на искусственном инфекционном фоне, который создавали согласно методическим руководствам (Чумаков и др., 1979).

Индекс подавления болезни растений штаммами антагонистами определяли по формуле

где N_k - количество пораженных растений в контроле,
N_о - количество пораженных растений в опыте.

Для получения препарата отдельных бактерий-антагонистов или консорциума штаммов-антагонистов штаммы бактерий-антагонистов выращивали на среде 925 до плотности 10⁹ кл/мл. Затем препарат отдельных бактерий-антагонистов или их консорциума использовали в виде 0,2% суспензии для обработки опытных растений (семян), инфицированных или пораженных заболеванием растений на любых фазах вегетации, включая стадию плодоношения. Нормы расхода препарата составляли 0,5 л на квадратный метр. Периодичность обработки - зависела от степени поражения растений.

Пример 3, демонстрирующий эффективность действия штаммов-антагонистов по отдельности и в составе консорциума против мучнистой росы огурцов в условиях теплицы.

К числу наиболее вредоносных фитопатогенов, поражающих огурцы в условиях закрытого грунта, относятся возбудители мучнистой росы огурцов грибы из порядка Erysiphales. Для исследования способности отобранных нами штаммов-бактерий подавлять развитие мучнистой росы в условиях теплицы совхоза-комбинат "Московский" были выделены участки, на которых около 100% листьев были поражены мучнистой росой. Растения с признаками поражения болезнью обрабатывали 4 раза с интервалом в один день культуральной жидкостью штаммов-антагонистов B. polymixa ВКПМ В-7539, B.thuringiensis ВКПМ В-7540, P.agglomerans ВКПМ В-7541, Pseudomonas chlororatis ВКПМ В-7542 по отдельности и в составе консорциума. Наблюдения за развитием болезни на исследованных растениях и их состоянием были проведены через 14 дней после начала обработки растений суспензиями бактерий. Индекс подавления болезни консорциумом штаммов-антагонистов был выше чем у растений, обработанных отдельными штаммами. Обработка огурцов в условиях теплицы штаммами-антагонистами предотвратила дальнейшее развитие мучнистой росы на листьях огурцов, при этом наблюдали замедление роста существующих на листьях плодовых тел грибов, и в ряде случаев прекращение их жизнедеятельности. Индекс подавления болезни консорциумом штаммов-антагонистов был выше, чем при обработке отдельными штаммами. Результаты экспериментов приведены в таблице 1.

Пример 4, демонстрирующий эффективность действия штаммов-антагонистов по отдельности и в составе консорциума против мучнистой росы томатов в условиях теплицы.

Опыты проведены аналогично примеру 3, но с использованием в качестве модели растения томатов, пораженных мучнистой росой. И в этом случае индекс подавления болезни консорциумом штаммов-антагонистов был выше, чем при обработке растений отдельными штаммами. Результаты приведены в таблице 1.

Пример 5, демонстрирующий эффективность действия штаммов-антагонистов по отдельности и в составе консорциума против серой гнили томатов в условиях теплицы.

В условиях защищенного грунта фитопатогенный гриб Botrytis cinerea, вызывающий заболевание "серая гниль", наносит ощутимый ущерб плантациям томатов. Для проверки биоконтролирующей активности консорциума штаммов-антагонистов в условиях теплицы совхоза-комбината "Московский" были проведены эксперименты на больных растениях. При этом для исследований были отобраны группы растений (по 20 - 30 кустов) с практически одинаковой степенью поражености стеблей серой гнилью, которую оценивали в баллах, - от 1 (поверхностные поражения стебля) до 5 (полное поражение стебля по площади сечения). При обработке стеблей томатов суспензией клеток штаммов-антагонистов были использованы два методических подхода. В первом случае растения c признаками повреждения стебля спороносящей серой гнилью обрабатывались суспензией соответствующих штаммов бактерий по отдельности или в составе консорциума. Во втором случае обработка раны велась после соскабливания поврежденных серой гнилью участков на стеблях. В качестве контроля служили варианты, в которых растения обрабатывались дистиллированной водой. Наблюдения за состоянием растений были проведены через 40 дней после обработки растений суспензией клеток штаммов-антагонистов по отдельности или в составе консорциума. Наилучшие результаты были получены в вариантах c удалением поврежденной ткани, которую производили непосредственно перед обработкой растений препаратами штаммов-антагонистов. Результаты представлены в таблице 1.

Пример 6, демонстрирующий эффективность действия штаммов-антагонистов по отдельности и в составе консорциума против серой гнили огурцов в условиях теплицы.

Опыты проведены аналогично примеру 5, но c использованием в качестве модели растений огурцов, пораженных серой гнилью. При этом не проводили ручную обработку пораженных участков. Результаты приведены в таблице 1.

Пример 7, демонстрирующий эффективность действия штаммов-антагонистов по отдельности и в составе консорциума, против угловатой пятнистости огурца в вегетационных опытах.

Возбудитель угловатой пятнистости бактерия Pseudomonas syringae pv.lachrymans поражает надземные органы огурца в течение всего периода его вегетации, начиная с появления семядолей. Для исследования биоконтролирующей активности клеток штаммов-антагонистов семена огурцов сорта "Парад" обрабатывали патогенным штаммом P.syringae pv.lachrymans, а затем культуральными жидкостями штаммов-антагонистов по отдельности или в составе консорциума. В контроле семена обрабатывали дистиллированной водой. Проращивание семян проводили при температуре 28^oC в течение 72 часов, а затем в течение 12 - 15 дней при комнатной температуре на чашках Петри на поверхности фильтровальной бумаги, смоченной дистиллированной водой. Подсчет поражения проростков огурцов угловатой пятнистостью проводили через две недели. Результаты данного опыта представлены в таблице 1. Как видно из таблицы, и в этом случае индекс подавления болезни консорциумом штаммов-антагонистов составлял 93%, и был выше, чем штаммами-антагонистами в отдельности.

Пример 8, демонстрирующий эффективность действия штаммов-антагонистов по отдельности и в составе консорциума против сосудистого бактериоза капусты в вегетационных опытах.

Возбудитель болезни сосудистый бактериоз крестоцветных бактерия Xanthomonas campestris pv.campestris поражает растения практически во все фазы его развития. Для определения эффективности действия штаммов-антагонистов были проведены опыты аналогично примеру 7, но с использованием в качестве модели семян капусты, инфицированных бактерией X.campestris pv. campestris. Результаты приведены в таблице 1.

Пример 9, демонстрирующий эффективность действия штаммов-антагонистов по отдельности и в составе консорциума против корневой гнили хлопчатника в вегетационных опытах.

Обыкновенная корневая гниль хлопчатника, вызываемая фитопатогенным грибом Rhizoctonia solani проявляется у данной сельскохозяйственной культуры на ранних стадиях ее развития (до стадии 6 - 8 листьев) и приводит к существенному изреживанию всходов или их полной гибели. Для изучения действия штаммов-антагонистов вегетационные сосуды, наполненные на 2/3 объема супесчаной почвой (pH 7.2), засевались семенами хлопчатника (по 9 - 12 семян на каждую повторность), а затем покрывались слоем почвы, инфицированной суспензией гриба R. solani из расчета 1.5 мг/кг почвы, после чего обрабатывали поверхность почвы суспензиями отдельных штаммов-антагонистов или консорциумом штаммов-антагонистов. Через 7 дней после посева семян в почву проводили повторную обработку растений суспензией бактерий. Учет проводили через две недели после начала опыта. Степень поражения проростков хлопка определяли как процент пораженных корневой гнилью проростков к общему количеству посеянных семян. И в этом случае индекс подавления болезни консорциумом штаммов-антагонистов был максимальным и составлял 82,3%. Результаты приведены в таблице 1.

Пример 10, демонстрирующий эффективность действия штаммов-антагонистов по отдельности и в составе консорциума против рака клевера лугового в полевых опытах.

Поражение травостоев клевера лугового возбудителем рака Whetzelinis trifoliorum приводит к сильному повреждению культуры и может вызвать полное выпадение растений первого и второго года возделывания. Для изучения эффективности использования штаммов-антагонистов для защиты клевера лугового от болезней, вызываемых грибом W.trifoliorum были проведены мелкоделяночные полевые опыты на базе ВНИИ кормов (пос. Луговая, Московской обл.) на делянках площадью 1,7 м² на жестком инфекционном фоне. За 2 недели до высева семян клевера в открытый грунт они были обработаны и инкрустированы суспензиями бактерий-антагонистов в отдельности или консорциумом штаммов-антагонистов. Для эффективной инкрустации бактерий-антагонистов использовали смесь суспензии данных бактерий с 2% раствором КМЦ-целлюлозы. Наблюдения за ростом и развитием растений на опытном участке проводили в течение двух лет. Подсчет результатов проводили на 2 год. Лучший показатель индекса подавления болезни был в случае использования смеси бактерий, входящих в консорциум. Результаты представлены в таблице 1.

Пример 11, демонстрирующий эффективность действия консорциума штаммов-антагонистов против гельминтоспориоза ячменя в полевых опытах в сравнении с химическими пестицидами.

Фитопатогенный гриб Helminthosporium sativum вызывает корневую гниль злаковых растений. Препарат испытывали в производственных условиях на базе колхоза им. Щепкина Яковлевского р-на Белгородской обл. на площади 20 га в 1995 году. В качестве эталонных протравителей использовали фунгициды раксил и байтан в стандартных концентрациях. Посевной материал, 5 т семенного ячменя сорта "Романтик" обрабатывали консорциумом штаммов-антагонистов в протравочной машине ПС-10 и высевали с нормой высева 240 кг/га. Участок под демонстрационным опытом - тяжело суглинистая почва, чернозем. Во время вегетации осадков не выпадало, что явилось дополнительным фактором, провоцирующим развитие гельминтоспориоза. Данные по пораженности растений фиксировали через 1,5 месяца в стадии начала налива зерна у ячменя. Результаты показали, что пораженность, определенная стандартным методом, на опытных участках составила, % по отношению к контролю:
Раксил - 26
Байтан - 11
Консорциум штаммов-антагонистов - 13
Таким образом необходимо отметить, что во всех приведенных примерах эффективность действия консорциума штаммов-антагонистов превышала эффективность подавления фитопатогенов культурами отдельных штаммов. Кроме того, высокие и стабильные показатели антибактериальной и фунгицидной активности препарата консорциума штаммов-антагонистов на различных моделях фитопатоген-хозяин указывают на перспективы эффективного применения данного препарата для защиты растений в сельском хозяйстве. В связи с тем, что пестицидная активность препарата сравнима с активностью химических агентов (например раксила, байтана), данный биопрепарат может позволить уменьшить масштабы применения химических средств защиты растений и стабилизировать ухудшающуюся экологическую обстановку.

ЛИТЕРАТУРА
1. Патент СССР N 1793878, 07.02.93.

2. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта (с основами статистической обработки результатов исследований). - М.: Агропромиздат, 1985, с.351.

3. Патент СССР N 1805849, 30.03.93.

4. Авторское свидетельство СССР N 1592330, 15.09.90.

5. Патент СССР N 1817874, 20.05.95.

6. Чумаков А.Е., Власов Ю.И., Бушкова Л.Н., Сидорова С.Ф., Гуськова Л.А. Инфекционные фоны в фитопатологии /Под ред Ю.Н Фадеева. - М.: Колос, 1979, с. 208.

7. "Bergey's manual of Systematic Bacteriology". V.1, ed. Krieg N.R. et al., Baltimore/London, 1984.

9. Kado C.J., Liu S.-T. Rapid procedure for detection and isolation of large and small plasmids. J.Bacteriol., 1981, 145, 1365 - 1373.

10. Kado C.J., Schhathorst W.C., Arad H.R. Method of using B.polymixa 9A to protect plants against Verticillium dahleum vilt. Патент N 4663162, США. Заявлено 14.03.84. N 589608. Опубл. 05.05.1987.

11. King E.O., Ward M.K., Raney D.E. Two simple media for the demonstration of pyocyanin and fluorescein. J.Lab.Clin. Med., 1954, 44, 301 - 307.

12. Lynch J. M. Biological control of plant diseases: achievements and prospects. In: Brighton Crop Protection Conference-Pest and Diseases, 1988, 587-596.

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности к средствам защиты растений, и представляет собой консорциум штаммов-антагонистов для получения этих средств. Консорциум состоит из четырех штаммов почвенных бактерий-антагонистов: Bacillus polymixa, Bacillus thuringiensis, Pantoea agglomerans, P. chlororatis. Предназначен для получения препарата против бактериальных и грибных болезней растений. Препарат может быть использован в условиях открытого и закрытого грунтов, на всех стадиях роста растений для эффективного подавления развития серой гнили и мучнистой росы у томата и огурца, бактериального рака у клевера, сосудистого бактериоза у качанной капусты, угловатой пятнистости у огурца, фузариозного увядания у томата, гельминтоспороза у ячменя, корневых гнилей у хлопчатника. 2 табл.

Консорциум штаммов-антагонистов Bacillus polymixa ВКПМ В-7539, Bacillus thuringiensis ВКПМ В-7540, Pantoea agglomerans ВКПМ В-7541, Pseudomonas chlororatis ВКПМ В-7542 для получения препарата против бактериальных и грибных болезней растений.