Камера для культивирования клеток в монослое Советский патент 1985 года по МПК C12M3/04 

Изобретение относится к устройствам для культивирования клеток и может быть использовано в экспериментальной цитологии и биохимии. Известна камера для культивровани клето1с в монослое, выполненная из светооптически прозрачного и нетокси ного для клеток материала и содержащая патрубок с пробкой. Камера может быть использована для пересева иссле дуемьк культур, а также для получен биомассы клеток для аналитических исследований. Для наблюдения за ростом клеток на дне камеры последнюю помещают на предметный столик инвертированного микроскопа. Так как дно камеры и ее верхняя стенка плоские и параллельные друг другу, то исключаются какие-либо оптические искажения, что позволяет качественно осуществлять прижизненный микроскопический анализ выращиваемых клеток: оценивать характер роста монослоя, производить морфометрические исследования, фотографировать клетки LH. Однако в известной камере отсутствует возможность заполнения камеры искусственной газовой смесью с мининальньми Потерями этого газа. Кроме TorOj затруднено создание внутри камеры искусственной атмосферы задан ного состава без разбавления ее воздухом, содержащимся внутри камеры Это обусловлено тем, что процесс вытеснения воздуха из камеры через имеющийся патрубок, например, после введения в патрубок (камеру) (канюли) от газометра, требует значительного объема газа, превьппающего объем камеры в несколько раз, однако и в этом случае вытеснение остатка воздуха будет неполным вследствие перемешивания его с вводимым , и , таким образом, введенная в камер искусственная газовая смесь будет несколько отличаться от заданной. В момент извлечения из камеры трубки (а также введения в патрубок культуральной среда со взвесью клеток, есл таковая не была введена в камеру предварительно перед замещением воздуха камеры искусственной газовой смесью), возникает дополнительное турбулентное движение смеси и воздух извне вновь попадает в камеру в неконтролируемом колнчествЬ. Учитывая что некоторые газы, например, содержащие метку, являются дорогими и дефицитными, то фактор непроизродительной потери газов становится весьма актуальным. Кроме того, в эксперименте могут быть использованы такие газы, попадание которых в атмосферу помещения в процессе заполнения ими камеры недопустимо (например, содержащие радиоактивную метку, обладающие токсическим действием и т.п.). Цель изобретения - снижение расхода искусственной газовой смеси в процессе заполнения ею камеры. Для достижения указанной цели камера дл культивирования клеток в монослое, выполненная из светооптически прозрачного и нетоксичного для клеток материала и содержащая патрубок с пробкой, снабжена двумя бессмазочнь1ми газовыми кранами, установленными с противоположных сторон камеры и дополнительным патрубком с проколочным элементом. На фиг.1 схаметично изображена камера, разрез по линии бессмазочньгх газовых кранов (патрубок и дополнительный патрубок с проколочным элементом не изображены) на фиг.2 то же, разрез камеры по линии патрубок - дополнительный патрубок С проколочньм элементом (бессмазочные газовые краны не показаны). Камера I выполнена из нетоксичного для клеточных культур стекла, имеет круглую форму, плоское дно и аналогичную верхнюю стенку. Диаметрально противоположно расположены патрубок 2, герметизируемый резиновой пробкой 3 и дополнительный патрубок А с проколочным элементом 5. Оба патрубка соединены с полостью камеры в месте стыка верхней и боковой стенок, что исключает затекание питательной среды 6 в эти патруб ки при Незначительном наклоне камеры в момент ее переноса. С двух других противоположных сторон камеры на уровне стыка верхней и боковой стенок вмонтированы бессмазочные газовые краны 7, расположенные под углом 45-50 к горизонтальной плоскости и содержащие в качестве KOHCTpyKtHBHoro элемента штуцер 8.. Угол 45-50f является оптимальным, так как при его уменьшении возможно затекание питательйой среды в конический патрубок бессмазочных газовых кранов, а прн приближении этого угла к прямому затрудняются условия манипулировзння кранами на этапе заполнения камеры искусственной смесью, в особенности при вытеснении газом деионизированной воды, когда камеру необходимо переворачи вать. Кроме того, эти краны могли бы помешать просмотру монослоя кле ток при помещении камеры на столик инвертированного микроскопа. Бессмазочный газовый кран 7 вьш нен в виде оснащенного штуцером 8 цилиндрического патрубкаг. На диста ном конце патрубок имеет отбортовк Конический патрубок соединяется с камерой. Головка 9 крана служит для перемещения внутри дилиндричес го патрубка запорного штока 10 (в дистальном Отделе имеет левую резь бу) с; уплотнительными кольцами 11, который упирается краями торца в стенки конической части патрубка 1 На наружной поверхности цилиндрической части патрубка находится резьбовая муфта с разрезом и навин ченной на ней стопорной гайкой и головкой 9 крана,. Запорный шток, резьбо1 ая куфта, . стопорная гайка и головка крана выполнены из биоло гически инертного материала, напри мер фторопласта. Камеру стерилизуют обычным способом в автоклаве. Оба бессмазочных крана 7 закрьшают, вращая голоЕ ки 9, при этом запорные штоки 10 с уплотнительными кольцами II упираются краями торца в конически патрубки 12, герметизируя камеру. Дополнительный Патрубок 4 закрьюают проволочным элементом (пробкой из эластичной резины). Через патрубок камеру;заполняют денонизнрованной водой, после чего его закрывают резиновой пробкой 3. Один из бессмазочных газовых кранов 7 через штуцер 8 шлангом соединяют с газометром, срдержащю искусственную газовую смесь, предаЕазначеиную для заполнения ею камеры, а другой кран- с барботёром (водным затвором). Бессмазочные газовые краны открывают, вращая головки 9 в противоположную сторону, после чего . через штуцер 8 бессмазрчного гааового крана 7 вытесняют искусствеиноЙ газовой смесью, подаваемой из газометра, соединенного шлангом с этим штуцером. В случае необходамос газ в камеру может быть подан (гтернльным, что достигается вк оомейием в цепь газометр-штуцер 8 бессмазочиого газового крана 7 .устройства для холодной стерилизации жидкоетей и газов , например миллипоровый фильтр. Вытесняемая искусственной газовой смесью жидкость поступает через штуцер 8 противоположного бессмазочного газового Крана 7 и шланг, соединенный с ним, в барботер, откуда может быть удален в какую-либо систему и случайно вытесненный из камеры в небольшом количестве газ. По окончании вытеснения деионизнрованной воды искусственной газовбй смесью бессмазочные газовые краны 7 закрывают и шланг, идущий от газометра, отсоединяют от штуцера 8. В шприц набирают культуральную среду со взвесью клеток, например, в объеме 10 мл к с помощью тонкой иглы ее вводят в камеру через проколочный элемент 5; при этом бессмазочный газовый кран 7, соединенный шлангом через патрубок 8 с водным затвором, открьшают и объем газа, равный объему вводимой культуральной среды 6, вытесняется из камеры. Иглу шприца из прополочного элемента 5 удаляют И тонкое отверстие в этом элементе герметизируется за счет эластичных свойств резины. Бессмазочный газовый кран 7 закрывают и от его штуцера 8 отсоединяют шланг, идущий к барботе ру (если используемая искусственная газовая смесь в виду тех нли иных причин должна экономно расходоваться, то вытесненнь1Й из камеры через барботер в какое-либо устройство газ может быть использован повторно для заполнения к.амер). Камеру переносят в термостат. Через определенные интервалы времени (часы, сутки) камеру извлекают нз термостата и помещают на предметный столик инвертированного микроскопа, оценивая характер роста монослоя 13 клеТок. По окончании процесса культивирования клеток патрубок 2 открьюают, сливают культуг ральную среду, смывают и извлекают монрслой клеток, прсле чего биомассу готовят для дальнейшего анализа, например, с помощью масс-спектрометра, В случае применения искусственной газовой смеси, содержащей радиоактивную меТку или токсичные компоненты, когда попадание ее в атмосферу помещения лаборатории недопустимо, камеру .через штуцер 8 бессмазочного крана 7 и шланг соединяют со специальным устройством, в которое выводят искусственную газовую смесь посредством

КАМЕРА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК В МОНОСЛОЕ, вьтолненная из светооптически прозрачного и нетоксичного для клеток материала и содержащая патрубок с пробкой, отличающаяся тем, что, с целью снижения расхода искусственной газовой смеси в процессе заполнения ею камеры, последняя снабжена умя бессмазочными газовьми кранами, установленными с противоположных сторон камеры и дополнительным патрубком с проколочным элементом. ел 00 ел О5 и/, г