Способ криоконсервации спермиев тутового шелкопряда Советский патент 1985 года по МПК A01K67/04 

Oi 00

Изобретение относится к сельскому хозяйству f в частности к шелководству, и может ть использовано в селекционной и племенной работе с . тутовым шелкопрядом.

Цель изобретения - повьшение оплодотворяющей способности спермиев тутового шелкопряда при длительном хранении.

Пример, Сразу же после получения копулятивных сумок их помещают в криозащитную среду следующего состава: сахароза 11,5 г глицерин 5 мг, желток куриного яйца 20 мл, вода 100мл. Затем копулятивные сумки со средой помещают в холодильник При на 5 ч. Замораяа1вание проводят в форме гранул объемом 0,2 мл в ячейках фторопластовой кассеты, охлажденной в парах азота до -80 С. В каждой грануле замораживают одну копулятивнзпо сумку. После полной кристаллизации гранулы переносят в жидкий азот (), в котором их хранят,

ЛАЯ оттаивания замороженную гранулу помещают в 2,9%-ный раствор лимоннокислого натрия, предварительно подогретого до , После этого флакон сразу же переносят в водную баню при 25С.

Биологическую полноценность спермиев тутового шелкопряда определяют по следующим показателям: активность спермиев определяют визуально (под микроскопом с увеличением 100-200 раз) и выражают в процентах живых спермиев; выживаемость спермиев определяют по ГОСТ 20,909,, принятому для спермиев быков, показатель выражает время жизни cnepiмиев в часах при оптимальных условиях (t 25 С),

Оплодотворяющую способность спермиев определяют сразу же после оттаивания копулятивных сумок. Для этого оттаивакщую копулятивную сумку помещают в 2,9%-ный раствор цитрата натрия, прокалывают пастеровской

микропипеткой, отсасывают спермии, а затем вводят пипетку в копулятивное отверстие неоплодотворенной самки и вдувают спермии внутрь отверстия самки. Одновременно неоплодотворенных самок той же партии осеменяют спермой, полученной из копулятивных сумок без замораживания (опыт I). Базовым контролем (опыт ij) служит естественное осеменение самок путем спаривания их с самцами. Продолжительность спаривания 120 мин.

Опыты проводили с породой Б-1 ул. в 1981-82 гг. Проведено две серии опытов по приведенной методике замораживания спермиев тутового шелкопряда. В первом otOdTe спермии хранил 30 дн, во втором - 180«Осеменяли по 50 самок на вариант. Результаты опытов замораживания на качество спермиев тутового шелкопряда представлены в Табл. 1.

Данные табл. 1 свидетельствуют о том, что в процессе замораживания по разработанной методике сохраняется живыми до 50% спермиев (до замораживания Подвижных в опыте I 53,5%, после оттаивания 34,58%, в опыте К 80% до замораживания и 38,9% после оттаивания).

Результаты оценки оплодотворяющей способности сперкгаев при искусственном осеменении представлены в табл. 2,Из приведенных данных ввдно, что спермии тутового шелкопряда, хранящиеся по предлагаемому способу по оплодотворяющей способности не уступают контрольным, используемым для осеменения сразу после извлечения из копулятивной сумки (без замораживания),

Таким образом, предлагаемый способ длительного хранения спермиев тутового шелкопряда позволяет сохранить их высокую биологическую активность в течение длительного времени хранения.

Т а бл и ц а 1

СПОСОБ КРИОКОНСЕРВАЦИИ СПЕРМИЕВ ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА путем введения спермиав в криопротектор, замораживания и последукмцего хранения, отличающийся тем, что, с целью повьпаения оплодотворяющей способности спермиев, замораживание и хранение спермиев ведут в копулятивных сумках, извлеченных из оплодотворенных самок, при температуре жидкого азота. сл с

Качество незамороженной спермы; активность спермиев, % выживаемость, ч

Качество замороженной спермы в копулятивных сумках:

активность спермиев, % выживаемость, ч

Качество замороженной спермы вне капсул:

активность спермиев, % выжив аемо с ть, ч

Качество замороженной спермы При (по известному способу):

80,1 + 4,72

53,5 i 3,1 8,78 2,61 5,25 ч: 1,

38,9 6,11

34,58+4,381 2,78 + 0,403 3,08 :;0,256

15,8 f 1,41

I4,25t1,24 1,31 + 0,20

1,оз;о,18