Способ замораживания спермы птиц Советский патент 1985 года по МПК A61D7/02 

О5 00 Изобретение относится к разведению сельскохозяйственных птиц, а именно к способам замораживания спермы петухов при искусственном осеменении кур. Известен способ замораживания спермы птиц, заключающийся в том, что сперму разбавляют при комнатной температуре, эквилибрируют при 2 4°С в течение 60 мин, накапывают в виде гранул объемом О, О-0,15 мл на предварительно охлажденную до -60-75°С фторпластовую пластину, выдерживают пластину с гранулами в парах испаряющегося азота 60с и опускают в жидкий азот. Оттаивание гранул производят в пенициллиновых флаконах в водяной бане при 70-75°С в течение 7-10 с 1. Недостатком данного способа является нестабильная скорость охлаждения спермы из-за невозможности получения одинаковых по объему гранул, различий экспозиции нахождения гранул на фторопластовой пластине, соприкосновения гранул с окружающей воздушной средой. В результате этого биологическая полноценность cnepMHiiB после замораживания различна приводит к невысоким результатам по оплодотворенности яиц (61%) и по выводу молодняка (41,6%), при этом расход цельной спермы на одно осеменение в 8-10 раз больше обычного. Известен способ пристеночного намораживания препаратов крови, вакцин и сы- 30 вороток, заключающийся в том, что намораживание жидкости производят путем вращения флаконов е.мкостью 0,5-1,0 л вокруг их горизонтальной оси в ванне с охлаждающим раствором до (-20)(-40)°С. Данный способ применяется с целью увеличения поверхности биопрепаратов для сублимационной сушки. Применение этого способа для замораживания спермы сельскохозяйственных животных неприемлемо из-за несоответствия 40 режимов охлаждения необходимых для . разного вида биологических объектов, значительных различий замораживаемых жидкостей. Известен способ замораживания спермь птиц, преимущественно гусаков, заключающийся в охлаждении и разбавлении спермы, эквилибрации, внесении спермы в тонкостенные металлические кюветы в количестве 0,17-2,0 мм в каждую, замораживании со скоростью 40-60 град/мм до (-98) -(-127)°С, затем со скоростью 8-15 град/мин до - L96°C. Активность оттаянной спермы 3,7-0,12 балла, 6..ЛЕОД молодняка 53,2% 2. Недсста-:км данного способа - нестабильная скорость охлаждения (не оптимальная) из-за соприкосновения спермы в кюветах с воздухом, длительность времени замораживания (б-10 мин) и слол ность регулирования указанной скорости охлаждения. В результате этого биологическая полноценность спермиев (вывод молодняка от осеменения замороженной по такому режиму спермы) невысока и составляет 53,20/0. Цель изобретения - повышение оплодотворяющей способности спермы. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу замораживания спермы птиц, включающему разбавление спермы, охлаждение, эквилибрацию с криопротектором, замораживание в емкостях и последующее хранение спермы в жидком хладагенте, замораживание осуществляют в морозильной камере путем вращения емкости в горизонтальном положении вокруг продольной оси со скоростью 6-12 об/мин при температуре в морозильной камере (-60) - (-75) °С в течение 165-195 с с последующим введением в морозильную камеру царов азота в течение 45-65 с, причем сперму в емкость вносят в количестве, обеспечивающем толщину слоя спермы при вращении 0,1 - 1,0мм. Пример 1. Сперму петухов разбавляют средой для замораживания при комнатной температуре, разливают по 1-2 мл в стеклянные цилиндрические емкости, объемом 12 см , диаметром 0,2 м, что обеспечивает толщину слоя спермы при вращении 0,1 -1,0 мм. Закрепляют в устройство для вращения и помещают в холодильник при 2-4°С на 45 мин. В сперму добавляют криопротектор, эквилибрируют и помещают в морозильную камеру с температурой -75°G, где вращают горизонтально со скоростью 8 об/мин в течение 180с. Затем в камеру пускают пары азота на 60 с. Емкости с намороженной спермой толщиной 0,1 -1,0 мм опускают в хладагент для дальНейщего хранения. Оттаивают сперму в водяной бане при 50-55°С. Кур осеменяют один раз в 3-5 дней, первые два осеменения через день дозой 0,2-0,23 мл. Оплодотворенность яиц кур, осемененных оттаянной спермой, составляет в среднем 83,0%с выводом цыплят 71,8%. В табл. 1 представлены результаты оплодотворенности яиц и вывода молодняка, полученные по предлагаемому способу замораживания и известному. Пример 2. Сперму петухов разбавляют 1-1 средами для замораживания (Лейка ЛКС-1 ВИРГЖ-1 или ЛКС-1) при комватной температуре, разливают по 1-2мл в стеклянные цилиндрические емкости объемом 12 см, диаметром 0,2 м, закрепляют в устройстве для вращения, помещают в холодильник при 2-4°С на 45 мин, добавляют криопротектор, эквилибрируют и помещают в морозильную камеру при -75°С, где вращают горизонтально со скоростью 6 об/мин в течение 180с, затем в камеру на 60 с пускают пары азота. После этого емкости с намороженной спермой опускают в хладагент для хранения. Оттаивают в водяной бане при 50-55°С. Оплодотворенность яиц кур, о&емененных оттаянной спермой в дозе 0,2-0,23 мл в один раз в три дня, составляет соответственно 87,7; 82,7; 73,6; 74,2«/о.

В таблице 2 даны результаты искусственного осеменения кур спермой криоконсервированной с различными средами по предлагаемому способу.

Пример 3. Сперму гусей разбавляют 1:3 средой для замораживания при комнатной температуре, разливают по 1-2мл в флаконы из-под пенициллина (объемом 12 см и диаметром 0,2 м), закрепляют в устройство для вращения, помещают в холодильник при 2-4°С на 30 мин. Добавляют криопротектор (SVo этиленгликоля или 8 диметилацетамида), эквилибрируют и помещают в морозильную камеру при -75°С, где вращают горизонтально 180 с со скоростью 8 об/мин. Потом в камеру на 60с пускают пары азота, после чего флаконы со спермой, намороженной слоем толщиной 0,1 -1,0 мл, опускают в хладагент на хранение. Оттаивают в водяной бане при 60-65°С. Оплодотворенность яиц гусынь, осемененных оттаянной при 65°С спермой в дозе 0,2 мл один раз в пять дней, составляет 76,6 и 83, с выводом молодняка 69,1 и 74,70/0.

В табл. 3 представлены результаты искусственного осеменения гусей спермой

криоконсервированной по предлагаемому способу с различными криопротекторами. Пример 4. Сперму птиц разбавляют средой для замораживания, . разливают во флаконы из-под пеницилл 1на (объемом 12 см и диаметром 0,2 м), закрепляют в устройство для вращения и помещают в холодильник при 2-4°С на 45 мин, добавляют криопротектор, эквилибрируют и помещают в морозильную камеру при

0 -60°С, где вращают горизонтально со скоростью 12 об/мин, 180с, после чего в камеру пускают пары азота в течение 60 с. Емкость хранят в хладагенте. Оттаивают при 50-55°С, осеменяют кур по 0,2-0,23 мл раз в три дня. Оплодотворенность яиц кур, осемененных такой спермой, 55,0% (проинкубировано 400 яиц).

Пример 5. Сперму птиц разбавляют средой для замораживания, разливают во флаконы из-под пенициллина, закрепляют

0 в устройство для вращения и помещают в холодильник с 2-4°С на 45 мин, добавляют криопротектор, эквилибрируют и помещают в морозильную камеру при -120°С, где и вращают горизонтально со скоростью

2 12 об/мин, в течение 180 с, затем в камеру на 60 с пускают пары азота. Хранят емкости в хладагенте. Оттаивают при 50-55°С, доза осеменения - 0,2-0,23 мл. Оплодотворенность яиц кур, осемененных такой спермой, 18,7%.

Предложенный способ замораживания спермы птиц может быть применен в практических УСЛОВИЯХ для длительного хранения спермы и использования ее в селекционной работе.

СПОСОБ ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ ПТИЦ, включающий разбавление спермы, охлаждение, эквилибрацию с криопротектором, замораживание в емкостях и последующее хранение спермы в жидком хладагенте, отличающийся тем, что, с целью повышения оплодотворящей способности спермы, замораживание осуществляют в морозильной камере путем вращения . емкости в горизонтальном положении вокруг продольной оси со скоростью 6-12 об/мин при температуре в морозильной камере (-60) - (-75) °С в течение 165-195 с, с последующим введением в морозильную камеру паров азота в течение 45-65 с, причем сперму в емкость вносят в количестве, обеспечивающем толщину слоя спермы при вращении 0,1 -1,0 мм. о

1555

Предлагаемый Известный 1 320

Таблица 1

71,8

83,0 41,6 60,9

Таблица2