Способ определения жизнеспособности тканей Советский патент 1985 года по МПК A01N1/02 

tc СП

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано при определении жизнеспособности тканей, предназначеиньк для консервирования и трансплантации.

Целью изобретения является повышение точности определения жизнеспособности тканей.

Пример (таблица). Срезы незамороженной щитовидной железы весом 25 г, хранившейся 60 мин, поместили в I мл инкубационной среды состоящей из Кребс-Рингер-бикарбонатного буфера, 0,005 г глюкозы и 1 мк Кюри смеси С - аминокислот, инкубировали в течение 60 мин при в атмосфере 95% ( и 57, CG . Параллельно проводили инкубацию другого образца ткани, но при этом в состав среды инкубации дополнительно ввели инсулин в концентрации 5-10 М. После окончания инкубации реакцию останавливали помещением образцов на ледяную баню. Затем добавляли равный объем 20%-ной трихлоруксусной кислоты. Полученную суспензию нанесли на фильтры Сынпор (диаметр 0,4-0,6 мм). Осадки трижды промыли 8 мл охлажденной трихлор.уксусной кислоты, смесью спиртхлороформ (1:1), 70 и 96 этиловым спиртом. Фильтры высушили на воздухе поместили в 10 мл толуольного сцинтилятора и просчитали j-.x радиоактивность на счетчике SL-100 (Франция) Радиоактивность пробы (контрольная, незамороженная щитовидная железа) составила 591 ,33182,69 имп./мин/мл белка.

, Радиоактивность пробы с добавлени еминсулина составляла 1558,01 1159,95 имп./мин/мл ткани. Разница между этими показателями составляла 956,67 имп./мин./мл белка.

В аналогичных условиях определяли радиоактивность щитовидной железы, замороженной со скоростью 100°/мин без криопротектора до -196°С. Радиоактивность образцов щитовидной железы, жизнеспособность которых оценивали известным способом, составила 292,0128,0 имп./мин/мл белка. Если {Выразить эту величину в процентах пр отношению к контролю (таблица,2) который составляет 591,33t82,69 имп./мин/мл белка,то она составит 50

Параллельное исследование радиоактивности образца, которое производили после добавления в среду инкубации инсулина, показало, что величина составляет 287t57,5 имп./ мин/мл белка. Поскольку разница показателей, полученных с помощью предлагаемого способа и известного, равнялась О, то отношение величины, составляющей эту разницу, к контролю ( таблица ) также равняется О. Следовательно, согласно предлагаемому способу оценки жизнеспособности, данный показатель для щитовидной железы, замороженный до -196°С без применения криопротектора, составляе 0.

Дополнительный анализ микроскопического строения аллогенных трансплантантов щитовидной железы, изъятых на 20-е сутки после пересадки, выявил только в 2-х образцах из 10 (20%) сохранение на периферии участков фолликулярных клеток. В остальных случах фолликулярная структура тиреоидных трансплантантов не сохранилась и наблюдалось ее замещение соединительно-тканевыми элементами .

Щитовидную железу замораживали со скоростью 6,5°/мин до -19бС в присутствии 12,5% ДМСО-(Таблица, 3.

Анализ жизнеспособности этих образцов щитовидной железы, проведенной известным способом, показал, что указанный показатель составляет 50%.

В аналогичных условиях производили определение жизнеспособности щитовидной железы предлагаемым способом. Согласно полученным данным жизнеспособность составляла 20,2%.

Анализ микроскопического строения аллогенных трансплантантов щитовидной железы, консервированных указанным выше способом показал, что в 3-х образцах из 10 Сохранилось значительное количество участков фолликулярных клеток.

Определяли жизнеспособность щитовидной железы, консервированной с 12,5% ДМСО со скоростью 1°/мин до -196°С.(Таблица, 4 ). Жизнеспособность консервированной ткани, оцененной известным способом, составляла 107%, а предлагаемым 70,4%.

Проведенное изучение морфологического строения трансплантантов щитовидной железы, консервированных указанным выше способом, позволило установить сохранение в 7 случаях

из 10 фолликулярного строения транс плантантов.

Таким образом, данные о жизнеспособнс1стц криоконсервированной щитовидной железы, полученные известным способом, только в одном из 3-х случаев (таблица, 4 ) приблизительно совпадали с результатами, полученными при изучении микроскопи ческого строения трансплантантов, а данные, полученные предлагаемым

1725114

способом - в трех

из З-х случаев.

Приведенные примеры показывают, что предлагаемый способ позволяет 5 более высокой точностью определять жизнеспособность ткани, поскольку он предусматривает определение не только степени сохранения функциональной активности ткани, но и to оценку ее способности к репарации структурно-функциональных повреждений.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ТКАНЕЙ путем инкубации ткани в присутствии Кребс-Рингербуфера, глюкозы и смеси аминокислот, выделения суммарных белков и измерения включения в них аминокислот, отличаю-щийся тем, что, с целью повышения точности определения, проводят параллельно инкубацию ткани в среде, содержащей дополнительно инсулин в концентрации 10 -10 М, а о жизнеспособности тканей судят по разности между включением С }аминокислот i в присутствии инсулина и без него, причем жизнеспособность- ткани сд пропорциональна степени сохранения величины этой разности.

Сравнительная оценка жизнеспособности

консервированной щитовидной железы, проведенная известным способом и предлаглемым