Способ определения биологической активности нуклеозидов Советский патент 1985 года по МПК G01N33/50 

;л

4i Изобретение относится к медитдине медицинской промьшшенности, а именно к способам определения биологической и лечебной активности нуклеозидов, являющихся основой лекарственных пре паратов, их активным началом. Цель изобретения - упрощение и удешевление способа. Способ поясняется следующим прим ром. Пример. В питательную смесь состоящую из морской воды соленостью 17% и среды Гольдберга, усиленной в 10 раз, вносят в опытную серию инозин в количестве 0,01 М, при этом для сравнительной оценки биологичес кой активности берут венгерский и советский инозин. В контрольную серию инозин не добавляют. В питательную смесь опытных и контрольных серий, каждая серия в трех повторностях, вносят взвесь клеток микроводорослей, обладающих подвижностью, Platymonas viriolis в количестве (4-5)- 10 клеток на 100 мл каждой пробы. Опытные и контрольные пробы по мещают на световую решетку с освещенностью 7000 лк и культивируют пр температуре . Через 24 ч из каждой пробы отбирают по капле суспензии микроводорослей, помещают в камеру Горяева или Мора и определяю под микроскопом с использованием секундомера время прохождения подвижной клеткой малого квадрата каме ры, имеющего сторону, равную 1/20 мм

Определение активности 0,001 М инозина при разных способах его получения Общее число клеток при определении скорости движения, подсчитанное в малом квадрате, должно быть не менее 7-12 единиц. Это количество обеспечивает достаточно высокую (95%) статистическую достоверность средних величин. Так, как для советского инозина при п 13 средняя скорость движения клеток составила (5,3+1,8) , а для венгерского инозина, в той же концентрации 0,01 М, при п 12 средняя скорость движения кле клеток Platymonas viriolis соответствовала (5,25+1 ,55) 10 м/с, в то время как в контроле эта величина п 9 составляла (2,3+0,06) . Сравнение указанных величин с использованием критерия Стьюдента показало достоверность различия с уровнем значимости 99,9% (t 5,8 и t 5,4 соответственно). Из данных, представленных в таблице видно, что наибольшей активностью обладает инозин озвученный, полученный медным способом. Таким образом, предложенный способ позволяет эффективно и достоверно по скорости движения микроводорослей оценивать биологическую эффективность нуклеозидов, например инозина, без дорогостоящих испытаний на мутантах кишечной палочки или животных, выбирать оптимальную технологию и отвергать способы, приводящие к получению неактивных форм лекарственных веществ.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НУКЛЕОЗИДОВ путем, культивирования микроорганизмов на питательной среде с добавлением нуклеозидов и последующей оценкой изменения физиологического состояния культивируемых клеток, отличающийся тем, Что, с целью упрощения способа, проводят культивирование подвижных морских микроводорослей в среде Гольдберга, усиленной в 10 раз и приготовленной на морской воде соленостью 16-18%, при освещенности 6000-8000 лк и 18-2бс, а оценку изменения физиологического состояния клеток проводят через 2426 ч после внесения их в среду кульш тивирования по скорости движения (/) клеток.

Инозин сорбционмый

озвученный

Инозин сорбционньм неозвучен}1ЫЙ

3,94 2,81

Инозин озвученный, полученный медным способом 6,79

Инозин неозвученный, полученный медным способом 6,69