Способ прогнозирования выхода жизнеспособного потомства по инкубируемой икры рыб на ранних стадиях эмбриогенеза Советский патент 1986 года по МПК A01K61/00 

Изобретение относится к рыбному хозяйству, в частности к рыбоводст- ну, и предназначено для прогнозирования выхода жизнеспособного потомства при промышленном разведении .таких лососевых рыб, как радужная форель.

Цель изобретения - повышение надежности и точности прогнозирования выхода жизнеспособного потонет- в а из инкубируемой рпсры на ранних стадиях эмбриогенеза и упрощение способа.

Согласно предлагаемому способу применение смеси красителей позволя- ет дифференцировать от нормально развивающихся эмбрионов не только неоплодотворенные икринки, но и оплодотворенные, но развиванхциеся аномально, что способствует повышени эффективности форелевых хозяйств при одновременном сокращении трудоемкости процесса и снижении требований к уровню квалификации рыбоводов,

Способ осуществляют следуюпщм образом.

Приготовляют раствор красителей тетранитротетразолевого синего (THTC и феназинметасульфата (ФМС). Готовый раствор сохраняет свое качество в течение двух суток при вьщерживании в темноте, при 2-4°С. Берут пробу икры на стадии крупноклеточной бластулы в. количестве 100-200 шт., помещают в чашки Петри и заливают раствором красителя в соотношении 50 мл на 100 шт. икринок, после чего чашки с пробой помещают в темное место и вьщерживают при 20-22 С. Через сутки чашки с пробой ставят на белу бумагу и в течение 10-15 мин проводят визуальный анализ окрашивания. При этом отбирают икринки не окрашеные и приобретшие точечную окраску в области бластодиска, подсчитывают их и по их суммарной доле в пробе судят о вЬгходе жизнеспособного потомства.

Неоплодотворенные икринки окрашиваются более 1/10 части поверхности желтка. Икринки оплодотворенные, но аномально развивающиеся, окрашиваются менее 1/10 части поверхности желтка, но окраска расплывчатая. Ик ринки оплодотворенные и нормально развивающиеся не окрашиваются или приобретают точечную окраску в об

5 0

S

о

5

5

0

ласти бластодиска, т.е. окрашивается только бластодиск.

Предварительно приготовили водные растворы ТНТС и ФМС в двух разведениях каждый, содержащих эти компоненты на. 1 л раствора в количествах 40,0 и 50,0 мг первый и 14,0 и 10,0 второй, отвечающих граничным значениям концентрации согласно предлагаемому способу, и два раствора ТНТС с концентрациями, содержащими 30,0 и 60,0 мг вещества на 1 л раствора. Из приготовленных растворов составили их смеси в восьми сочетаниях каждого из четырех разведений ТНТС с каждым из двух разведений ФМС.

Для реализации способа использо- , вали часть икры радужной форели из производственной закладки на инкубацию, которая бьша осеменена 13.03.84. На четвертые сутки инкубации 17.03.84 по достижении стадии крупноклеточной бластулы из этой партии отобрали 2000 икринок. Отобранную икру разделили на пять равных групп по 400 П1Т. в каждой. Опыты при каждом значении концентрации раствора основного красителя ТНТС, а также в контроле проводили в двух партиях по 200 шт. в калодой. Окрашивание проводили в чашках Петри. Выдерживание икры в смеси красителей проводили при 21 Со Экспозицию икринок в смеси растворов красителей проводили через 0,5 сут, через 1 сут и через 1,5 сут.

Пример 1. В два водных раствора красителя, содержащих ТНТС и ФМС в количестве 40,0 мг и 10 мг

(а)соответственно и 40 мг и 14 мг

(б)соответственно, помещали по 200 шт. икринок, которые выдерживали вначале 0,5 сут, затем 1 сут и

1 ,5 сут.

Пример 2. В два водных раствора красителя, содержащих ТНТС и ФМС в количестве 50 мг и 10 мг (а) соответственно и 50 мг и (б) соответственно, и помещали по 200 икринок, которые вьщерживали при условиях, аналогичных примеру 1.

Пример 3. В два водных раствора красителя, содержаш 1Й ТНТС и ФМС в количестве 30 мги 10 мг (а) соответственно и 30 мг и 14 мг (б) соответственно, помещали такое же количество икринок в аналогичные условия,как в гфимере 1,

Пример 4.В два водных раствора, содержащих ТНТС и ФМС в количестве 60 мг и 10 мг (а) соответственно и 60 мг и 14 мг (б) соот- ветственно, помещали такое же количество икринок в аналогичные условия, как в примере 1.

Результаты осуществления способа по примерам приведены в таблице.

Из таблицы видно, что при всех концентрациях растворов ТНТС и ФМС в течение 0,5 сут не происходит окрашивания бластомеров, по которым можно судить о жизнеспособности икринок.

Наибольшее совпадение доли жизне- способных икринок с контролем оказалось при окрашивании красителем ТНТС 6 концентрациях 40,0 мг и 50 мг, при концентрациях ФМС 10 мг и 14 мг на итр в течение одних суток. В этих условиях отход икры,определенный путем окрашивания, составил 16%, а в контроле - 17%. Окрашивание икринок в течение 1,5 сут при всех концентрациях растворов приводило к их большему отходу 29-34%.

1а 40,0 10,0 О и 200 100 29 14,5 171 85,5 58 29,0 142 71,0 1S 40,0 14,0 О О 200 100 31 15,5 169 84,5 58 29,0 142 71,0

Всего в опыте

2а 25

Всего в опыте

За

3

Всего в опыте

50,010,0О

50,014,0О

30,010,0О

30,014,0О

400100 6015,034085,0 116 29,028471,0

О 2001003115,516984,5 58 29,014271,0

О 200100 3316,516783,5 60 30,014070,0

400100 6416,033684,0 118 29,528270,5

О 200100 2814,017286,0 57 28,514371,5

0. 200100 2914,517185,5 56 28,014472,0

400100 5714,234385,8 113 28,228771,8

223866

Таким образом, доля икринок, неокрашенных и получивших точечную окраску бластодиска через сутки экспозиции в смеси растворов красителей от 5 общего количества икринок в каждой партии, служила основанием для прогнозирования процента выхода жизне- способного потомства в исходной партии икры,

О Контроль инкубации икры проводили (В кристаллизаторах, в которых воду меняли два раза в сутки. Температура воды, в которой развивалась контроль- ,ная п-артия икры, была 6-7 С; содержание кислорода, растворенного в воде - не менее 9,0 мг/л; рН 7,3. Контрольную партию икры продолжали инкубировать при указанных условиях в течение 62 дней, вплоть до вьшупления

личинок (15.05.84) и вели на -людения за личинками в течение 10 дней (до 26.05.84). Отход икры и личинок в контроле составил 17%.

Сопоставление данных в таблице с

результатами контроля показывает, что осуществление способа согласно предлагаемому режиму дает результаты, хорошо согласуемые с контролем.

Да 60,0 10,0 О 4 60,0 14,0 О

Всего в опыте

О 200 10040 20,0 160 80,070 35,0 130 65,0 О 200 100 42 21,0 158 79,0 68 34,0 132 66,0

400 100 82 20,5 318 79,5.138 34,5 262 65,5

Примечание, I- икринки со значительной и расплывчатой окраской - доля отхода;

II - икринки неокрашенные и с точечной окраской, доля жизнеспособных.,

Редактор С.Лисина

Составитель О.Якименко

Техред В.Кадар Корректор Е.Сирохман

Заказ 1851/1Тираж 679 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г.Ужгород, ул.Проектная, 4

Продолжение таблицы