Способ определения неэстерифицированных жирных кислот в плазме крови Советский патент 1986 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к биохимическим исследованиям, а именно к клиническому анализу крови на неэсте рифицированные жирные кислоты (НЖК). Цель изобретения - упрощение способа, повьппение точности и обеспечение раздельного опредепения высших жирных кислот и суммарного содержания жирных кислот.

Пример I. Для приготовления жидкостной мембраны для ионселектив- ного электрода (ИСЭ) берут 5 мл нит- робензольного раствора смеси кислот, содержащей каприновую (225 мг/л), лауриновую (l50 мг/л), пальмитиновую (75 мг/л), стеариновую мг/л), олеиновую (450 мг/л), линолевую (600 мг/л), арахинов: о (150 мг/л), бегепоную (75 мг/л), что соответствует массовому соотношенгш кислот 3:2:1:18:6:8:2:1 (концентрация каждой кислоты взята с относительной точностью 5%). Затем к полученному раствору добавляют 3 мл (3-5) - 10 Иодиого раствора кристаллического фиолетового (КФ), 10 мл воды, 20 мл нитроСензола. Добавлением 0,1 М раствора натровой щелочи, рН смеси доводят до 10,5 - 11. После пе.ремешпвани на делительной воронке отделяют органическую фазу от неорганической. ,

Электрод готовят путем нанесения этой органической фазы на пористую перегородку.

В качестве вспомогательного вод- його раствора жидкостного электрода используют I Ю молярный раствор натровых солей тех же кислот при рН 10 - 10,5.

Пипеткой отбирают 0,5 мл плазмы крови первого больного и помещают в ячейку для титрования. Туда добавляют О,-6 мл хлороформа, 1,2 мл ацетона и 20 мл ВОД1.1 (объемное соотношение 3:6:100). рИ смеси доводят до 10,5. Титрование проводят 3 ,88 10 М водным раствором кристиллического фиолетового на иономере универсальном ЭВ-74 с использованием ИСЭ с жидкой мембраной, приготовление которой описано выше. Строят кривые и из кривой титрования видно, что точка перегиба достигается при добавлении 0,37 мл КФ.

Концентрацию НЖК в крови определяют по формуле --,

С .-Yji2 3 §§ii2 : 2i37

V,,

0,5

2, М,

0

5

5

0

5

0

5

где С - концентрация НЖК крови, М;. С - концентрация кристаллического фиолетового, М; Vnp - объем пробы нлазмы крови , мл;

VKOP объем кф, мл. Таким образом, концентрация НЖ в плазме 2,87i , время /определения 9 мин.

Контроль проводят хроматографи- ческим методом. Концентрация НЖК крови, полученная двумя способами, совпадает с точностью до 5%.

Из вида кривой титрования можно за1 :лючить, что в пробе присутствуют в основном высшие жирные кислоты.

Концентрация высших жирШ1х кислот С и выше составляет порядка 90% обш,ей концентрации жирных кислот.

Пример 2. Анализируют плазму крови второго больного. Объем пробы и условия определения такие же как в примере I.

По кривой титрования определяют точку перегиба и рассчитывают общую концепграцню жирных кислот. Концентрация жирных кислот (высших и низших) 17- М, высших жирных кислот М, что соответствует 50%. Хроматографический анализ подтверждает это количествJ и дает ту же качественную картину. Время анализа 11 мин.

Пример 3, Анализируют плазму крови третьего больного. Объем . пробы и условия определения такие же, как в примере 1 .

По кривой титрования определяют точку перегиба и рассчитывают общую концентрацию жирных кислот. Общая концентрация жирных кислот (высших и низших) 1, М, ВНСШ1ГХ жирных кислот 910 М.

Хроматографический анализ дает те же результаты.

Время анализа составило 11 мин.

Формула изобретения

Способ определения незстерифици- рованных жирных кислот в плазме крови путем титрования, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, повьш1ения точности и обеспечения раздельного определения высших жирных кислот и суммарного содержания жирных кнслот, для титрования используют ионселективный элект- i

3 12379734

род с жидкостной мембраной, содержа-1,05); (17 - 19):(5,7 - 6,3):(7,6 - щей раствор в нигробензоле солей8,4):(1,9 - 2,1):(0,95 : 1,05), кристаллического фиолетового и жир-титрование проводят в двухфазной ных к ислот каприновой, лауриновой,системе, содержащей смесб хлорофор- пальмитиновой, стеариновой, олеино-. ма, ацетона и воды в объемном совой, линолевой, арахиновой и беге-отношении 3:6:100, а в качестве новой при массовом соотношениититранта используют кристаллический (2,85 - 3,15):(1,9 - 2,1):(0,95 -фиолетовый в концентрации (3-5).

Изобретение относится к биохимическим исследованиям крови на неэ- стерифицированные жирные кислоты (НЖК). Цель изобретения - упрощение способа, повьшение точности и обеспечение раздельного определения высших жирных кислот и суммарного содержания жирных кислот. Цель дос.тигается благодаря использованию при титровании ионселективного электрода с жидкостной мембраной. Берут нитрабензольный раствор солей кристаллического фиолетового и жирных кислот каприновой, лауриновой, пальмитиновой, стеариновой, олеиновой, линолевой, арахиновой, бегено- вой при соотношении (2,85-3,15):(1,9 i2,l): (0,95-1,05):(17-19):(5,7-6,3)г