Способ определения синдрома цилиарной дискинезии бронхов Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

112

Изобретение относитс я к медицине,, а именно к способам функциональной диагностики в пульмонологии,

Цель изобретения - дифференциация органических и функциональных нару- шений мерцательного эпителия у больного путем пермеаболизации мембран глицерином и реактивации образца АТФ с последующим наблюдением за мерцательной активностью ресничек эпителия бронхов.

Способ осуществляют следующим образом

У больных с помощью щеточной биопсии отбирают образец эпителия слизистой бронхов и помещают его в 45%-ный глицерин, содержащий 20 ммоль фосфата натрия (рН 7,0} ,, 120 ммоль КС1, инкубируют при 4°С в течение 24 ч„ В результате инкубации у мембран эпителиальных клето к появляется проницаемость для АТФ, который используется в качестве субстра

та динеиновой АТФ-азой, осуществляющей механохимическое сопряжение в ресничках,

Пермеаболизированный препарат помещают в реактивирующий буфер, содержащий, ммоль: фосфат натрия 120 (рН ), КС1 120; MgCl 5 и АТФ 5. В буфер добавляют тестикулярную гиалуронидазу (2 мкг/мл) для гидролиза вязких мукополисахаридов5 препятствующих регистрации биения ресничек.

Реактивированный препарат наблю- . дают методом фазово-контрастной микроскопии,, регистрируя частоту биения ресничек в 100 полях зрения, В качестве контроля исследуют подвиж ность ресничек в биоптате не позднее чем через 30 мин после отбора материала без пермеаболизации и реактивации, т.е. за счет эндогенного АТФ, Отсутствие движения ресничак в контрольном препарате и наличие его в ,реактивированном препарате свидетельствует о том, что в результате поражения не затронут двигательный аппарат ресничек, а отсутствие дни жения как при реактивации, так и в контроле свидетельствует о поражениях, затрагивающих динеин-тубулиновый комплекс, играющий ключевую роль в биении ресничек,

Пример 1. Больная М., 12 лет Клинический диагноз; кистозная гипоплазия верхней доли правого легко,-

5

5

0

5

5

5

0

372

го, хроническая пневмония, двусторонний гайморит. У ребенка постоянный кашель с отделением гнойной мокроты. Над правым легким укорочение перкуторного звука, влажные хрипы. На рентгенограмме грудной клетки отмечено уменьшение объема правого легкого, полостные образования в области верхней доли. При бронхоскопии вьшв- лен двусторонний гнойный эндобр он- хит.

При исследовании предлагаемым способом выявлены следующие нарушения функционального состояния мерцательного эпителия слизистой бронхов: клетки мерцательного эпителия контрольного препарата значительно маце- рированы, большая часть их лишена ресничек или имеет неподвижные реснички, незначительная часть имеет подвижные реснички. В пермеаболизиро- ванном и реактивированном АТФ препаратах обнаружено также небольшое количество клеток с подвижными ресничками.

.Ребенку назначают курс антибиоти- котерапии. Проводят шесть бронхоскопических санаций. Состояние больной ; улучшилось. Активность эндобронхи- альных изменений уменьшалась. При повторном обследовании после прове- денного лечения в контрольном и пер- меаболизированном препаратах слизистой бронхов у больной выявлено уменьшение степени мацерации клеток мерцательного эпителия и значительное увеличение процента клеток с подвижными ресничками. Это свидетельствует о функциональном характере нарушения подвижности ресничек и возможности восстановления нарушенных функций при адекватной терапии.

Пример 2. Больная К., 9 лет. Ютинический диагноз: синдром Карта- генера (обратное расположение органов, поражение легких, синусит). У ребенка кашель с отделением гнойной мокроты, одышка. Над легкими с обеих сторон обилие влажных хрипов. На рентгенограмме грудной клетки деформация легочного рисунка. Б области верхней доли - слева - кистозные образования. Радиоизотопное исследование регионарной вентиляции с выявило дефект заполнения в области ; нижних , смешанный тип вентиляционных расстройств с преимущественно рестриктивными изменениями в нижних

отделах. На бронхограмме правого - легкого - гипоплазия нижней доли с кистозными образованиями. При бронхоскопии обнаружен двусторонний гнойны эндобронхит.

При исследовании предлагаемым способом в контрольном и пермеаболи- зированном препаратах мерцательного эпителия бронхов обнаруживают клетки только с неподвижными ресничками, что свидетельствует о наличии нарушений в двигательном аппарате ресничек . Назначают антибиотикотерапию, осуществляют санацию бронхиального дерева. Состояние ребенка несколько улучшилось. Однако сохранились значительные физикальные изменения в легких, гнойный эндобронхит.

При повторном обследовании не обнаружено восстановления подвижности ресничек ни в контрольном, ни в пер- меаболизированном препаратах. Данные исследования предлагаем лм способом подтверждены электронно-микроскопическими исследованиями, выявившими отсутствие динеиновых ручек в структуре аксонем ресничек. Наличие такого структурного дефекта определяет неподвижность ресничек.

Составитель М. Позняк Редактор А. Шишкина Техред Л.Олейник

Заказ 7798/39

Тираж 799

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Произвбдственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная,

Таким образом, необратимый характер изменений ультраструктуры ресничек мерцательного эпителия обусловил стойкую цилиарную неподвижность органического характера. Это, очевидно определяет тяжесть течения процесса, отсутствие выраженного эффекта терапии и свидетельствует о неблагоприятном прогнозе.

Формула изобретения

Способ определения синдрома цили- арной дискинезии бронхов путем микроскопического исследования биоптата их слизистой, отличающий- с я тем, что, с целью дифференциации органических и функциональных нарушений мерцательного эпителия у больно -, го, биоптат пермеаболизируют глицерином в присутствии натрий-фосфатного буфера и хлористого калия, затем помещают его в буфер, содержащий хлористый калий, хлористый магний и тестикулярнуюI гиапуронидазу, и при наличии или отсутствии подвижности ресничек определяют соответственно функциональный или органический характер цилиарной дискинезии.

Корректор В. Бутяга

Подписное

Изобретение относится к функциональной диагностике в пульмонологии и позволяет осуществить дифференциацию органических и функциональных нарушений мерцательного эпителия у больных. Берут образец эпителия слизистой брон.хов и помещают его в 45%-ный глицерин в присутствии 20 ммоЛь фосфата натрия (рН 7,0) и 120 ММОЛЬ хлористого калия, инкубируют 24 ч при 4°С. Пермеаболизиро- ванный препарат помещают в реактивирующий буфер состава, 14моль: 120 фосфата натрия (рН 7,0), 120 хлористого калия, 5 хлористого магния, 5 АТФ, 2 мкг/мл тестикулярной гиалу- ронидазы. Частоту биения ресничек регистрируют методом фазово-конт растной микроскопии в 100 полях зрения . При наличии или отсутствии подвижности ресничек диагностируют функциональный или органический характер цилиарной дискинезии соответственно. с сл tvd 00 00 СП 00