Способ определения повреждения нервной системы Советский патент 1988 года по МПК G01N33/53 

(Л

с

Для раннего выявления повреждений олигодендроглиальных и миелиновых структур нервной ткани в сьшоротке крови и/или в спинномозговой жидкости определяют аутоантитела к галакто- цереброзидам мозга. При повышении их титра относительно нормы для данной возрастной группы диагностируют повреждение упомянутых структур нервной ткани.

со ел

со

Изобретение относится к медицине и экспериментальной биологии, в частности к иммунологическим методам диагностики, и может быть использовано в клинической практике и в экспериментальных исследованиях эаболеваНИИ, связанных с деструкцией глиаль- ных и миелинизированных структур . нервной системы.

Цель изобретения - раннее выявление повреждений олигодендроглиальных и миелиновых структур нервной ткани.

Для достижения поставленной цели определяют в сыворотке крови и/или в спинномозговой жидкости аутоантите ла к галактоцереброзидам мозга (ГалЦ и в случае превьшения их титра относительно нормы для данной возрастной группы, диагностируют повреждение олигодендроглиальных и миелиновых структур нервной ткани.

Способ осуществляют следующим образом.

Для определения аутоантител к ГалЦ мозга в РСК готовят серию двукратных разведений сыворотки крови больного, вносят по 0,02 мл каждого разведения сыворотки в лунки полистироловых панелей, добавляют во все лунки по 0,02 мл липидной суспензии антигена (содержащей ГалЦ, фосфолипиды и холестерин в примерном соотношении 11 :40:35 мкг на мл суспензии) и по 0,02 мл комплемента (в подобранной дозе) и инкубируют панель 45 мин при 37 С для того, чтобы произощло образование комплекса антиген - антитело и фиксация комплемента на этом комплексе. Затем во все пробы добавляют по 0,04 мл гемолитической системы (смесь суспензии бараньих эритроцитов с антисывороткой против них) и инкубируют при 3-5 мин для того-, чтобы комплемент, оставшийся не- связанным с комплексом ГалЦ - антитела, фиксировался на втором комплексе эритроциты - антиэритроцитарные антитела и вызвал гемолиз эритроцитов. Результатом реакции или титром аутоантител к ГалЦ считают то разведение исследуемой сьшоротки, при котором гемолиз достигает 80-100%.

В случае положительной реакции и выявления антител в титрах, четырехкратно превышающих верхнюю границу нормы (верхняя граница нормы для детей - титр 1:4, для взрослых - титр 1:2), диагностируют наличие повреж-

0

5

0

5 g

0

5

0

50

5

дения олигодендроглиальных и миелиновых структр нервной ткани. При постановке иммунологических реакций с сывороткой крови - РСК, реакции пассивной гемагглютинации и др. диагностически значимым принято считать 4- кратноё возрастание титра.

Пример 1, Больной Х-ин О., 9 л,и 9 мес., диагноз: острый энцефалит, установленный на основании результатов обследования общепринятым способом ( клинико-анамнестическое обследование, цитологическое и биохимическое исследование ликвора, . электрофизиологические методы), обследован согласно предлагаемому способу диагностики в конце первой недели заболевания. В сьторотке крови обнаружены антитела к ГалЦ в титре 1:256, что не только подтверждает наличие деструктивных изменений в . мозге, но и указывает на вовлечение в патологический процесс клеточных структур олигодендроглиального происхождения .

П р и м е р 2, Больная Ф-ва Н., 12 л,и 10 мес., диагноз: острый энцефалит, установленный общепринятым способом, обследована согласно предлагаемому способу диагностики на 5-й день заболевания. В сьторотке крови обнаружены аутоантитела к ГалЦ в низком титре 1:4, не превышающем верхнюю границу нормы. Этот результат указьтает на то, что на данном этапе заболевание протекает без повреждения олигодендроглиальных и миелинизированных сФруктур мозга.

П р и м е р 3. Больной С-ин,. 60 л., диагноз: тяжелая черепно-мозговая травма, установленный на основании результатов клинико-анамнести- ческого исследования, обследован согласно предлагаемому способу диагностики на третий день заболевания. В сьюоротке крови обнаружены аутоантитела к ГалЦ в титре 1:32, что указывает на развитие деструктивных изменений клеточных структур олигодендроглиального происхождения в ткани мозга у этого больного.Пример 4. Больной Ш-ев, 76 л., диагноз: черепно-мозговая травма средней тяжести, установленный общепринятым способом, обследован согласно предлагаемому способу диагностики,на третий день болезни. Аутоантитела к ГалЦ обнаружены в низком

титре 1:2, не превышающем норму. Это позволяет заключить, что повреждения олигодендроглиальных и миелиновых структур в данном случае черепно-мозговой травмы места не имеют.

Приме р 5. Согласно предлагаемому способу обследован кролик из группы животных, отобранных для иммунизации с целью получения моноспецифических антисывороток к определенным очшценным антигенам мозга. В сыворотке кролика обнаружены аутоанти- тела к ГалЦ в титре 1:16, что свидетельствовало о деструктивном процессе в мозге и послужило основанием для его выбраковки. Гистологический анализ ткани мозга (окраска азур- эозином) подтвердил наличие патологического процесса в мозге.: в оболочках мозга, а также в сером и белом веществе были обнаружены явные воспалительные изменения. Это позволяет заключить, что предлагаемый способ диагностики может быть использован в экспериментальной биологии и экспериментальной невропатологии как для выбраковки животных, так и для ния экспериментальных моделей различных поражений мозга. .

Испытание способа проведено при обследовании 34 здоровых лиц, 7 больных с инфекционным заболеванием, не затрагивающим нервнута систему, и 68 больных с инфекционньми, воспали- тельными и травматическими поражениями ЦНС и пне. Результаты теоретической и экспериментальной проверки предлагаемого способа, а также анализ примеров его конкретного выполнения свидетельствуют о том, что предлагаемый способ обладает высокой специфичностью по отношению к нервной ткани, так как основан на выявлении аутоан- тител к ГалЦ, локализованным исключительно ив нервной ткани и являющимся специфическими антигенньми маркерами клеточных структур олигодендро- глиального происхождения. Специфичность способа подтверждается отсутствием антител к ГалЦ у больных без поражения нервной системы, а также обязательным выявлением высоких титров против ГалЦ антител в случаях заведомо острых деструктивных поражений нервной ткани.

Применение предлагаемого способа дает возможность диагностировать как в ЦНС, так и в пне наличие ранних

0 5 0

с

0

5

0

5

тонких деструктивных изменений в нервной ткани, не выявляемых другими методами, а также диагностировать деструктивные изменения в определенных клеточных структурах нервной ткани, а именно в олигодендроцитах и миелиновых оболочках, за счет высокой специфичности способа.

Предлагаемый способ дает объективный лабораторньй тест для повыщения точности диагноза у ряда неврологических больных (дифференциальная диагностика менингитов и минингознцефа- литов; определение степени тяжести черепно-мозговых травм, наличие или отсутствие периаксональной демиелини- зации при поражениях ПНС и пр.), а также для уточнения патогенеза заболевания у данного больного, а своевременная постановка правильного диагноза позволяет обеспечить выбор патогенетически обоснованной терапии.

Кроме того, предлагаемый способ дает возможность на основании специфического лабораторного теста выбра- ковьшать экспериментальных животных с бессимптомнь1ми поражениями мозга при отборе здоровых животных для получения моноспецифических антисьшоро- ток, а также для диагностики повреждения клеточных структур нервной ткани при изучении различных экспериментальных моделей различных поражений ЦНС.

Способ характеризуется простотой исполнения и может быть использован в любом стационаре, имеющем лабораторию, располагающую техникой постановки иммунологических реакций. Осуществление способа не требует специального оборудования, за исключением обычно применяющегося для серологической диагностики, и он-может быть проведен средним медицинским персоналом, имеющим квалификацию лаборанта. Способ не травматичен, так как требует для анализа лищь небольщие количества Сдо 0,3 мл) сыворотки крови или ликвора. Применение способа рекомендуется для дифференциальной диагностики функциональных нарушений и органических поражений нервной системы при инфекционно-воспалительных,. дегенеративных демиелинизирующих про- цессах, токсических и травматических поражениях мозга, нарушениях кровоснабжения мозга и других неврологических заболеваниях для раннего вы5U1353I6

явления деструктивных изменений в что, с целью раннего выявления пов- клеточных структурах нервной ткани. реждений олигодендроглиальных и миелиновых структур нервной ткани, в исследуемой крови и ликворе определяют антитела к галактоцереброзидам и при повышении их титра по сравнению с нормой определяют повреждение нервФормула изобретения

Способ определения повреждения нервной системы путем исследования крови, отличающийс я тем.

ной системы.

ной системы.