Способ определения протеолитической активности и кислотности в верхних отделах пищеварительного тракта IN VIVo Советский патент 1988 года по МПК G01N33/68 G01N33/84 

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии.

Цель изобретения - повьшение информативности за счет суммарной оценки параметров за весь период исследования и повышение точности измерения рН.

На фиг.1 изображена калибровочная кривая для нахождения рН по величине смещения зоны обратимой коагуляции белка ( ); на фиг.2 - зависимость Ijoii от рН буферных растворов при инкубации 6 и 24 ч субстратных трубок при 38 С (субстрат, разведенный в 1,5 раза 0,9%-ным раствором хлорида натрия, - яичный белок, обработанный мочевиной)5 на фиг.З - зависимость 1Jw от времени пребывания субстратных трубок в буферных растворах с рН- от 1,0 до 2,2 (субстрат и температурные условия те же); на фиг.4 характер изменения lyi во времени при инкубации субстратных трубок в буферных растворах с -рН 1 и 2, равнообъемной смеси этих растворов и при поперемен- {ой часовой инкубации в буферных растворах с рН 1 и 2 (субстрат и температурные условия те же).

Способ осущест вляют следующим образом.

Используемый в качестве субстрата белок готовят в виде прозрачного геля путем предварительной обработки его солюбилизатором, например мочевиной, при фиксированных выше изозлект- рической точки белка-субстрата значениях рН, в результате чего при последующей термической обработке белок приобретает консистенцию прозрачного геля, способного к обратимой коагуляции в изоэлектрической точке. Определение кислотности проводят путем измерения величины смещ,ения зоны обра

д 5 0 5

о

5

0

тимой коагуляции белка вглубь субстрата с последующим нахождением по калибровочной кривой соответствующего этому смещению значения рН.

Пример 1. Больной Ф., 40 лет. История болезни № 30209 за 1984 г. Диагноз: язвенная болезнь, язва луковицы двенадцатиперстной кищки.

При исследовании кислотообразующей функции желудка тонким зондом в содержимом желудка натощак и в ба- зальном секрете свободной НС1 не обнаружено, В ответ на гистамин (0,01 мг/кг) концентрация НС1 возросла до 52-90 ммоль/л. Базальная (БКП) и гистаминовая (ГКП) кислотная продукция равны соответственно 2,9 и 36,6 ммоль/ч.

На основании исследования желудочной секреции трудно решить какая кислотность существует на самом деле в желудке данного больного в обычных условиях его жизни, Судя по отсутствию свободной НС1 в желудке натощак кислотность может быть невысокой. Выраженная гиперсекреторная реакция на гистамин не исключает возможности высоких ее показателей. Для уточнения данного вопроса больному проведено исследование кислотно-пептической активности по предлагаемому способу. Белковая цепочка 13.12.84 г. введена на сутки в желудок. Субстрат (как и в последующих примерах), разведенный в 1,5 раза 0,9%-ным раствором хлорида натрия, - яичный белок, обработанный мочевиной. Длина сегментов 45 мм. В продолжение исследования больной вел обычный образ жизни, лекарств не получал.

Результаты записаны от проксимального к дистальному концу цепочки:

Изобретение предназначено для гастроэнтерологии. Цель изобретения - повьшение информативности и точности измерения рН. Субстрат обрабатывают 3-6 М раствором мочевины при значениях рН выше изоэлектрической точки белка-субстрата. Исследуют смещение зоны обратимой коагуляции белка и определяют протеолитическую активность и кислотность. Точность определения кислотности повышается с единицы до 0,2 единиц водородного показателя. Способ позволяет получать обобщенное представление о кислотности среды за весь исследуемый период времени. 4 ил. Г. S СО

1

J.JPK , мм 1-,рки5 мм рИ

Низкая протеолитическая (0,9 мм) активность и кислотность (рН 3,5) в первом сегменте указывают на его расположение в кардинальном отделе желудка или П1пдевода. В последующих сегментах протеолитическая активност сначала нарастает, а затем снижается, рН на протяжении желудка колеблется от 2,2 до 1,8. Таким образоМ;,

в приведенных цифрах мы имеем отражение реально существующей в желудке данного больного кислотности и про- теолитической активности.

П р и м е р 2. Больной С., 55 лет. История болезни № 1447 за 1985 г. Диагноз: хронический гастрит с секторной недостаточностью желудка. Функциональная кишечная диспепсия.

При исследовании кислотообразующей функции желудка выявлено отсутствие свободной соляной кислоты во всех порциях желудочного сока БКП 0,6, ГКП 0,3 ммоль/ч.

В течение суток (с 24.01 по 25.01.85) проведено исследование кислотно-пептической активности.

Результаты:

1пр 0,0 0,0 0,0 0,4 1,4 2,0 2,5 1}о 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 рН во всех сегментах вьше 4.

f

В этом примере данные исследования кислотно-пептической активности in vivo согласуются с данными исследования кислотообразующей функции желудка тонким зондом. Видно, что, несмотря на ахлоргидрию в желудке, определяется небольшая протеолити- ческая активность, нарастающая в дистальном направлении. Последнее характерно для больных атрофическкм гастритом и объясняется забросом в желудок протеза дуоденального содержимого, которые в отсутствии кисТЖ

Полученные результаты свидетельствуют о том, что в области луковицы двенадцатиперстной кишки у данного больного показатели кислотно-пептической активности не отличаются от таковых в теле желудка, что указывает на высокую степень кислотно- пептической агрессии в зоне ульцера- ции .

П Р и м е р 4 (контрольный).Больной М., 33 лет. История болезни № 4315 за 1985 г. Диагноз: язвенная

При 1пр 5,7 содержимое и субстраттом весьма существенные расхождения

в сегменте прокрашен) желчью.в значениях рН получены в сегментах

Сопоставление полученных результа- цепочки, соответствующих проксимальтов показывает, что наибольшие и при-ному и дистальному отделам желудка.

10

425551

лоты проявляют свое протеолитическое действие.

П р и м е р 3. Больной Д., 32 лет. История болезни 372 за 1986 г. Диагноз: язвенная болезнь, язва луковицы двенадцатиперстной кишки.

При исследовании кислотообразующей функции желудка выявлена выраженная гиперхлоргидрия: БКП 16,8, ГКП 32,6 ммоль/ч. Дпя выяснения уровня кислотно-пептической агрессии в проксимальных отделах дуоденум 9.01.86г, проведено исследование кислотно- пептической активности с использованием -рентгеноконтрастной цепочки. Длина сегментов 35 мм, время исследования 6 ч.

Через 1,5 ч после введения цепочки и через 1 ч после завтрака произведена рентгенография области желуд- ка. По данным рентгенограммы выявлены сегменты, расположенные в пищеводе (И) , теле желудка (Т} 0 , антропилори- ческом отделе (АП), в луковице (Л) и нисходящей части дуоденум (НЧД).

Результаты:

15

20

25

АП

НЧД

0

5

болезнь, язва луковицы двенадцатиперстной кишки.

С 28.02. по 1.03.85 г. в течение суток производилось исследование кислотно-пептической активности. По извлечении белковой цепочки рН интрагастральной среды определяли по величине смещения зоны обратимой коагуляции индикаторным способом (инд.) с помощью универсальной индикаторной бумаги согласно известному способу.

Результаты:

Это объясняется тем, что в предутренние часы, когда секреция кислоты в желудке у большинства людей снижается, рН субстрата подвержен значительному влиянию заглатываемой слюны (в проксимальных отделах) и щелочном дуоденальному рефлюксу (в дисталь- ных). Последнее находит подтверждени и в приводимом наблюдении, так как содержимое последнего сегмента (гид- ролизат и субстрат) интенсивно прокрашено желчью. Зона обратимой коа- гулядии белка, значительно удаленная от края субстрата, остается недопустимой влиянию непродолжительных ; изменений рН интрагастральной среды. Сдвиги рН в ту или иную сторону лишь меняют скорость ее смещения к центру сегмента. В теле желудка по данным также получены более низкие значения рН, чем при использовании индикаторного метода. В этой связи напомним, что с помощью индикаторной бумаги растворы, имеющие рН от 1,8 до 2,0, неразличимы.

П р и м е р 5 (контрольный).Больной П., 36 лет. История болезни № 28263 за 1984 г. Диагноз; язвенная болезнь, язва луковицы двенадцатиперстной кишки.

Исследование кислотно-пептической активности произведено дважды: до и на фоне приема 50 мг гастроцепина. Время исследования 6 ч. Определение рН остатка субстрата индикаторным способом в обоих случаях показало одинаковые значения рН в желудке, равные 2. При исследовании рН интра- гастральной среды по величине ок получены следующие данные.

До приема гастроцепина: 1г,р 0,4 2,8 3,0 2,9 2,7 2,4 Ьоки 0,08,4 10,1 9,7 9,2 7,5 рН 4 1,7 1,5 Г,6 1,6 1,8

На фоне приема гастроцепина: Inf, 0,0 1,3 2,3 2,2 2,2 2,1 IgCKH 0,0 4,5 7,1 7,3 .6,8 6,8 рН 4 2,2 1,8 1,8 1 ,9 1 ,9

Из сопоставления приведенных данных видно, что на фоне действия гаст

5

0

5

о

0

0

5

0

5

роцепина рН интрагастральной среды возрос от 1,5-1,6 до 1,8-1,9. Этому соответствует хотя и не сл ш1ком выраженное, но убедительное снижение протеолиза. Зарегистрировать обнаруженные сдвиги в величине рН с помощью индикаторной бумаги невозможно ввиду недостаточной точности этого способа.

Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о том, что определение кислотности - в верхних отделах пищеварительного тракта предлагаемым способом обладает несомненными преимуществами перед известным способом, которые состоят в повьш1ении точности определения рН от 1,0 до 0,2 единиц водородного показателя; в возможности получать обобщенное представление о кислотности среды за весь исследуемый период времени. При этом предварительная обработка субстрата мочевиной не снижает его гидролизуемости про- теазами желудочного и дуоденального содержимого.

Формула изобретения

Способ определения протеолитичес- кой активности и кислотности в верхних отделах пищеварительного тракта in vivo, включающий введение в пищеварительный тракт эластичного зонда с термическим денатурированным белковым субстратом с последующим определением активности и кислотности по расщеплению субстрата, отличающийся тем, что, с целью повьш1ения информативности за счет суммарной оценки параметров за весь период исследования и повьш1ения точности измерения рН, субстрат предварительно обрабатывают 3-6 М раствором мочевины при значения рН выше изо- электрической точки белка-субстрата, в полученном прозрачном субстрате исследуют смещение зоны обратимой коагуляции белка и по значению смещения определяют протеолитическую активность и кислотность.

25

22 О fo

18

If Ю

W ;, 1,8 22 2,6 3.0 ЗЯ 3.8 рН Фиг.1

24

20

i: /б

о

л

VJ

)2

1,0 1

Фи8.2

,0 5Л

Составитель М,Пустынников Редактор Н.Рогулич Техред А. КравчукКорректор В.Романенко

Заказ 4762/41

Тираж 847

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

pHto

PHU

24

Pffiff, V Фие

Подписное