Способ определения физиологического состояния сеголетков и годовиков карповых рыб Советский патент 1989 года по МПК A01K61/00 

I

Изобретение относится к рыбной промьшшенности, а именно к способам, позволяющим определить физиологическое состояние карповых рыб.

Целью изобретения является более ранняя диагностика заболеваний и токсикозов.

Способ осуществляют следующим образом.

Дпя установления физиологического состояния сеголетков и годовиков карповых рыб у исследуемьк рыб извлекают почку и часть почки массой 1 г берут на микологический анализ. Для этого часть почки помещают в стерильные бюксы, взвешивают и переносят пробу в фарфоровые ступки, в которые приливают 10-кратное количество изотонического раствора хлористого натрия, и тщательно растирают. После

lb-20-минутного отстаивания О, 1 мл надосадочной жидкости высевают на агар Сабуро и тщательно растирают шпателем. После этого пробу помещают в термостат и на 2,3,5-е инкубации при +27°С подсчитывают количество проросших грибов (тыс.клеток в 1 г почки). Наличие дрожжеподобных грибов в 1 г почки у сеголетков рыб в количестве от 1,0 до 15,0 тыс. клеток, а у годовиков от 3,0 до 30,0 тыс. клеток свидетельствует о наличии ухудшения физиологического состояния рыб данной возрастной группы.

Способ дает возможность определять аномальное состояние рыб на самой ранней стадии заболевания любого вида, когда визуальные или клинические признаки его еще не проявились, а

4

сд

00

314

процесс ухудшения физиологического состояния уже начался.

Способ может быть использован как самостоятельно, так и в дополнение к другим способам диагностики болезней рыб или оценки их физиологического состояния.

Кроме того, способ расширяет круг показателей возможности определения аномального состояния рыб.

Дрожжеподобные грибы, в том числе и рода Candida, относятся .к сапрофитной микрофлоре, которая в незначительном количестве присзтствует в любом клинически здоровом организме, включая рыб, и при этом не наносит организму вреда, так как иммунитет не дает возможности сапрофитной микрофлоре развиться до такого коли- чрства, которое приводит к заболеванию.

При воздействии на организм неблагоприятных биологических факторов, например интоксикации, инфекции или инвазии, происходит общее ослабление организма и, в первую очередь, его иммунньгх сил, в результате чего создаются благоприятные условия для развития сапрофитной микрофлоры в та- кик количествах, которые превышают безвредную для организма норму.

Увеличение в организме количества дрожжеподобных грибов выше предельно допустимой нормы является достовер- ным показателем общего ослабления организма под воздействием биологических факторов и может служить объективным показателем физиологического состояния организма, в частности, рыб.

Установлено, что рост и размножение дрожжеподобных грибов происходит преимущественно в почке карповых рыб

-

Пример 1. Исследовали почки сеголетков карпа массой 40 г, которых содержали в двух прудах по 30 га каж дьш, с плотностью посадки 4 тыс.шт. на 1 га, при идентичных гидрохимичес ких условиях. Кормление рыб в прудах осуществляли заводскими кормами двз разных партий. При этом в пруде № 1 процесс вьфащивания рыб протекал без отклонений .от нормы, а в пруде № 2 были отмечены единичные случаи гибели рыб, хотя по поведенческим реакциям состояние живых рыб в обоих прудах не отличалось.

1

Микологический анализ почек провели у живых рыб из прудов № 1 и 2 и у погибших рыб из пруда № 2.

Содержание дрожжеподобных грибов в 1 г почки составило соответственно 0,1+0,03; 1,0+0,1; 90,6+3,4 тыс.кл.

В связи с условно-патогенной природой дрожжеподобных грибов были проведены исследования причин гибели рыб в пруде № 2.

Патолого-анатомические исследования погибших рыб показали наличие многочисленных кровоизлияний по всей длине кишечника, характерных для интоксикации, а также рыхлость консистенции почки и печени рыб, кровоизлияния в их ткани.

Аналогичные исследования были про ведены в отношении живых и визуально здоровых рыб из пруда № 2. Отмечена анемия почек. Видимых изменений других внутренних органов не обнаружено

В связи с полученными данными дпя окончательного выяснения причин ухудшения физиологического состояния и гибели рыб в пруде № 2, а также интенсивного развития вследствие этого дрожжеподобных грибов (90,6+3,4 тыс. кл. на 1 г почки) были взяты на сравнительной токсикологический анализ в соответствии с известной методикой -корма обеих партий.

В результате анализа было установлено, что корм, использованный для рыб в пруде № 2, остротоксичен, так как содержит токсины грибов рода Aspergillus, что и явилось причиной токсикоза и гибели рыб в результате поражения токсинами кишечного тракта

Полученные данные позволили сделать следующие обоснованные выводы и предположения: причиной гибели рыб в пруде № 2 явилась их интоксикация токсинами плесневых грибов рода Aspergillus; ослабление иммунных сил организма рыбы под воздействием токсинов обусловило интенсификацию развития в нем дрожжеподобных грибов до количества, при котором проявилос их патогенное действие на почку и печень рыбы (погибшие рыбы из пруда № 2); незначительно увеличено количество дрожжеподобных грибов в почке живых и визуально здоровых рыб пруда № 2 по сравнению с рыбами из пруда № 1 при отсутствии видимых изменений внутренних органов, поведенческих реакций. Анемия почек сви-

етельствует о том, что интоксикация тих рыб и ухудшение их физиологиеского состояния .находятся на наальной стадии.

Пример 2. Определяли содерание дрожжеподобных грибов в почках ыб из пруда № 2 (согласно примеру 1) партию которых в количестве 140 шт.

отделили от основной массы рыб и разделили на две равные группы.

Одну из групп перевели на кормление тем же кормом, что и рыб в пруде № 1, а другую группу продолжали кормить тем же токсичным кормом для подтверждения коррекции дальнейшего ухудшения физиологического состояния рыб и интенсификации развития дрожеподобных грибов, а также для,определения предельно допустимого количества дрожжеподобных грибов, соот- ветствукщего начальному периоду ухудшения физиологического состояния.

По истечении 10 суток кормпение

у сеголетков, употреблявших полноценный корм, количество дрожжеподобных грибов в 1 г составило 0,1 тыс. клеток. Патологических от-; клонеьшй внутренних органов от нормы также не наблюдалось. Поведенческие реакции в норме.

Аналогичная ситуация наблюдалась и у рыб в пруде № 2, где корм также был заменен на полноценный.

У рыб, продолжавших употреблять корм с токсинами плесневых грибов в течение 10 суток, содержание дрожжеподобных грибов составило 15,0 (15,0+0,6) тыс. клеток.

При патолого-анатомическом исследовании обнаружена только анемия почки. Видимых изменений других внутренних органов не обнаружено, что указывает на начальный этап ухудшения физиологического, состояния рыб.

Пример 3, Аналогично предшествующим примерам проводили микологические исследования почек рБ1б по истечении 30 суток кормления.

У рыб из бассейна, в котором использован токсичный корм, содержание дрожжеподобных грибов в ,1 г почки составило 36,3 (36,3+9,7) тыс. клеток. Рыбы были вялыми, почти не реагировали на раздражение. Патоло- го-анатомические исследования показали наличие воспалительных процессов в ткани стенок кишечника, появ

5

0

5

I

ление на них бугристых образований характерной окраски. На жабрах появился белый налет в виде слизи, в почках и печени - кровоизлияния.

Данные приведенных примеров свидетельствуют о том, что началу ухудшения физиологического состояния рыб, выразившемуся в анемии почек при отсутствии видимых изменений других внутренних органов и поведенческих реакций, соответствует содержание дрожжеподобных грибов рода Candida от 1,0 до 15,0 тыс. клеток на 1 г почки.

Дальнейшему ухудшению физиологи- ческого состояния рыб под длительным воздействием токсинов (30 суток), которое вьфазилось в патологических нарушениях внутренних органов и отклонениях от нормы поведенческих реакций рыб, соответствует увеличение количества дрожжеподобных грибов в 1 г почки до 36,3 тыс. клеток.

Пример 4. Аналогично предшествующим примерам были исследованы годовики карпа весом 100 г, не имевшие клинических признаков заболевания, и визуально не отличавшиеся от

30

50

них годовики, которых содержали в пруде, где были зафиксированы единичные сл учаи аэромоноза. Кроме того, у рыб определяли биохимические показатели их физиологического со35 стояния.

В результате исследований установлено, что у контрольных здоровых рыб на протяжении всего периода биохимические показатели не откло-

40 нялись от принятой нормы. Так, содержание гемоглобина Hj в крови рыб составляло 18,0 г %, общего белка сыворотки крови - 3,02 г %, активность холинэстеразы (ХЭ) на уровне

45 1,18 мкм АХХ/1 мин/1 л. Содержание дрожжеподобных грибов в 1 г почки составило 0,6 (0,6+0,04) тыс. клеток, патолого-анатомические показатели были в норме.

У визуально здоровых рыб из пруда, где были отмечены случаи аэромоноза, уровни Нз и общего белка находились в пределах нормы, а активность ХЭ бьта несколько снижена, и составила 0,10 мкм АХХ/1 мин/л. Исследование микрофлоры внутренних органов этих рыб показало.присутствие патогенных аэромонад/ДНК-тест/, При этом содержание дрожжеподобных

55

грибов в 1 г почки составило 3,0 , (3,0+0,6) тыс. клеток.

Пример 5. По истечении 10 суток дальнейшего содержания рыб в прудах без проведения лечебно- профилактических мероприятий в опытно пруде анализ бып повторен. У рыб контрольного пруда все показатели остались без изменений. У визуально здоровых рыб опытного пруда отмечалось снижение общего белка относительно нормы в 2 раза, наблюдалось кратковременное повьшение активности ХЭ до 0,22 мкм АХХ/1 мин/1 л, что свидетельствует о сопротивлении организма заболеванию, т.е. о его начальной стадии.

Патолого-анатомические показатели остались на уровне предшествующего примера. Из внутренних органов рыб выделялись единичные колонии аэромонад, в то время как количество дрож- жеподобных грибов в 1 г почки воз,. возросло до 90,6 (90,6i3,4) тыс. клеток. При этом жабры рыб были покрыты слизью, почка и печень рыб были дряблыми, с кровоизлияниями, имелись изъязвления кожного покрова, т.е. проявились патогенные свойства дрож- жеподобных грибов.

Данные приведенных примеров 3, 5, 6 подтверждают правомерность вьшо- да о том, что ослабление организма рыб и ухудшение состояния, вызванное каким-либо заболеванием, в частности азромонозом, способствует увеличению количества дрожжеподобных грибов ро10

15

20

да Candida во внутренних органах и проявлению их патогенных свойств.

Формула изобретения

Способ определения физиологического состояния сеголетков и годовиков карповых рыб путем исследования тканей рыбы и оценки начала ухудшения

росло до 30,0 (30,0+3,0) тыс. клеток. 25 физиологического состояния по резульПример 6. При дальнейшем содержании рыб в прудах в течение 30 суток у контрольных рыб исследуемые показатели остались без изменений. У опытных рыб уровень Hg крови снизился незначительно и составил 15 г %. Отмечено резкое падение содержания общего белка сыворотки кротатам последнего, отличающийся тем, что, с целью более ранне диагностики заболеваний и токсикозов, для исследования исполь- 30 зуют ткань почки, в процессе исследования определяют наличие в ней дрожжеподобных грибов рода Candida, оценку проводят по количеству последних в 1 г ткани почки, а о начале

ви до 0,75 г % и активности ХЭ, кото- д ухудшения физиологического состояния рая соответствовала 0,5 мкм : рыб судят по содержанию от 1,0 до

АХХ/1 мин/1 л. Из внутренних органов15 тыс. клеток грибов у сеголетков

аэромонады не вьщелялись, а количество дрожжеподобных грибов в 1 г почки

40

и от 3,0 до 30,0 тыс. клеток у годовиков.

78718

возросло до 90,6 (90,6i3,4) тыс. клеток. При этом жабры рыб были покрыты слизью, почка и печень рыб были дряблыми, с кровоизлияниями, имелись изъязвления кожного покрова, т.е. проявились патогенные свойства дрож- жеподобных грибов.

Данные приведенных примеров 3, 5, 6 подтверждают правомерность вьшо- да о том, что ослабление организма рыб и ухудшение состояния, вызванное каким-либо заболеванием, в частности азромонозом, способствует увеличению количества дрожжеподобных грибов ро10

15

20

да Candida во внутренних органах и проявлению их патогенных свойств.

Формула изобретения

Способ определения физиологического состояния сеголетков и годовиков карповых рыб путем исследования тканей рыбы и оценки начала ухудшения

татам последнего, отличающийся тем, что, с целью более ранне диагностики заболеваний и токсикозов, для исследования исполь- 30 зуют ткань почки, в процессе исследования определяют наличие в ней дрожжеподобных грибов рода Candida, оценку проводят по количеству последних в 1 г ткани почки, а о начале

и от 3,0 до 30,0 тыс. клеток у годовиков.

Изобретение относится к рыбной промьшшенности, а именно к способам определения физиологического состояния сеголетков и годовиков карповьк рыб. Целью изобретения является наиболее раннее диагностирование заболе- ваний и токсикозов. Способ определения физиологического состояния включает определение в 1 г почки у рыб / содержания дрожжеподобных грибов рода Candida. Содержание 1,0-15,0 тыс. клеток грибов у сеголетков 3,0- 30,0 тыс. клеток грибов у годовиков в 1 г ткани почки свидетельствует о начапе ухудшения их состояния. Сйо- соб расширяет круг показателей аномального состояния рыб, может диагностировать начало любого заболевания или токсикоза, вызванного, например, недоброкачественным кормом. с (Л с

Составитель Т.Красюкова Редактор А.Маковская Техред М.Ходанич Корректор А.Обручар

Заказ 281/3

Тираж 469

ВНИНПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное