Способ определения гиперфибриногенолитической активности крови Советский патент 1989 года по МПК G01N33/86 

1

Изобретение относится к медицине и может бьггь использовано для экспресс-диагностики состояний острого фибриногенолиза при неотложных состояниях терапевтического и хирургического профиля, особенно во время операциий и в реанимационной практике .

Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа.

Цель- достигается тем, что в исследуемой цитратной плазме количество фибриногена определяют через 10 мин от момента взятия крови одновременно в двух пробах: в присутствии ингиби-. тора фибринолиза в 1,3%-ном растворе эпсилон-аминокапроновой кислоты и без этого ингибитора, и при снижении содержания фибриногена в пробе без ,

ингибитора относиттельного такового в пробе с ингибитором определяют гиперфибриногеполитическую активность крови.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь у больного забирают из вены, не сдавливая мягких тканей, силико- нированной иглой в силиконированную пробирку в 3,8%-ньй раствор цитрата натрия в соотношении 9:1, во вторую пробирку кровь забирают в 1,3%-ньй раствор эпсилон-аминокапроновой кислоты, приготовленной на 3,8%-ном растворе цитрата натрия. Точно фик- сируют время взятия крови в обе пробирки. Обе пробы крови сразу ставят центрифугировать при 1500 об/мин в течение 7 мин для получения плазмы.

Из обеих проб отсасьгеают плазму в разные пробирки. В обеих пробах строго через 10 мин, от момента взятия 1 крови из сосудистого русла проводят определение количества фибриногена. Фибриноген определяют так: в одну пробирку к 0,5 мл цитратной плазмы добавляют 0,1 мл 0,227%-ного хлористого кальция для нейтрализации цит- рата натрия и 0,1 мл раствора тромбина активностью 20 ± 3 с. Во вторую пробирку к 0,5 мл плазмы крови,взя- той в 1,3% раствор эпсилон-аминокап- ;роковой кислоты, приготовленной на :3, растворе цитрата натрия, добавляют 0,1 мл 0,227%-ного раствора хлористого кальция для нейтрализации цитрата натрия и О,1 мл раствора тромбона активностью 20 t 3 с. Обе пробирки ставят на водяную баню 37°С на 5 мин для свертывания фибриногена. Получаемые сгустки фибрина пропорциональны исходному количеству фибриногена. Следовательно, для по- лучения количества фибриногена и выражения его в г/д получаемые сгустки фибрина быстро высушивают на фильтровальной бумаге, взвешивают на торсионных весах. Вес сгустка умно- жают на 2, на коэффициент 22,2 согласно способу Рутбегр и делят на 100. Проводят сравнение концентраций фибриногена, .определенного в. присутствии стабилизатора фрбриноли- за в 1,3%-ном растворе эпсилон-аминокапроновой кислоты и без этого стабилизатора, только в 3,8%-ном растворе цитрата натрия, вычисляют разницу количеств фибриногена, которая, в свою оче- редь, соответствует количеству лизиро- анного за 10 мин фибриногена. При снижении количества фибриногена в 3,8%- ном растворе цитрата натрия относительно количества фибриногена, определенного в 1,3%-ном растворе эпси лон-аминокапроновой кислоты, диагностируют как гиперфибриногенолитическу активность крови.

Раствор 1,3% эпсилон-аминокапроно вой кислоты готовят предварительно, до взятия крови, 1,3 г сухой эпсклон аминокапроновой кислоты растворяют в 3,8%-ном растворе цитрата натрия.

:

Осуществление предлагаемого способа занимает 20 мин. По преддагае- мому способу проведено 27 исследот ваний и результаты их представлены в табл.1. По способу-прототипу провеQ5 0 5 О

0

5

5

дено 48 исследований. Результаты параллельных исследований способа- прототипа и предлагаемого приведены в табл.2.

Количество лизированного фибриногена различно, колеблется от 0,45 до 6,67 г/л и не зависит от исходного общего количества фибриногена. № проб для табл.2 взяты из табл.1. По способу-прототипу увеличение активности лизиса выявлется не всегда в сравнении с заявляемым способом. В примере 3 наблюдается по способу- прототипу завышение активности лизиса до 67%. Диагностическая информативность гиперфибриногенолитичес- кой активности крови предлагаемого способа точнее способа-прототипа. Пример 1. Больной М., 49 лет. Диагноз: Сотрясение мозга. Травматический шок. Перелом поясничного отдела позвоночника. Состояние больного тяжелое, требующее интенсивной терапии.

Для выявления наличия гиперфибри- ногенолитической активности крови у больного, не сдавливая мягких тканей, забирают кровь путем пункции вень силиконированной иглой, В первую силикомироваиную пробирку приливают 4,5 мл крови к -0,5 мл 3,8%- ного раствора цитрата натрия, что соотносится как 9:1. Во вторую си- ликонированную пробирку приливают 4,5 мл крови ужё к другому раствору к 0,5 мл 1,3%-ного раствора эпсилон- аминокапроновой кислоты, приготов- ленной на 3,8%-ном рас т воре цитрата нат- , рия также в соотношении 9:1. Раствор 1,3% эпсилон-аминокапроновой кислоты готовят предварительно до взятия крови: 1,3 г сухой эпсилон-аминокапроновой кислоты растворяют в 3,8%- ном растворе цитрата натрия.

Данные гиперфибриногенолитической

активности крови, полученные по пред- пагаемому способу, представлены в

табл.1.

Количество лизированного фибриногена различно, колеблется от 0,45 до 6,67 г/л и не зависит от его общего количества.

Диагностическая информативность предлагаемого способа вьш1е и точнее способа-прототипа.

Точно фиксируют время взятия крови в обе пробирки, в нашем опыте равным 10ч. Обе пробы крови сразу

ставят центрифугировать, а именно в to часов 02 мин при 1500 об/мик в течение 7 мин. После центрифугирования в 10ч 09 мик и.-з первой пробирки отбирают 0,5 МП цнтратной плазмы автоматической пипеткой и добавляют к О,1 МП 0,227%-кого раствора хлористого кальция. Б эту же пробирку добавляют О,1 мл раствора тромбина, активностью 20 с, В то же самое врем из второй пробирки с раствором 1,3% эпсилон-аминокапроновой кислоты на 3,8%-ном цитрате натрия отбирают авг томатической пипеткой 0,5 мл плазмы и приливают к 0,1 мл 0,227%-ному раствору хлористого кальция и О,1 мл раствора тромбина активностью 20 с. В 10ч 10 мин обе пробы ставят на водяную баню при 37°С на 5 мин. В 10 ч 15 мин обе пробы достают из бани, полученные сгустки высушивают на фильтровальной бумаге под контролем зрения так, чтобы бумага бьша сухой после промокания в ней сгустка. Сгусток сразу же взвешивают на торсионных весах: вес сгустка в присутствии ингибитора равен 8 мгх2 22,2:100 3,55 г/л, при отсутствии ингибитора вес равен 6 ,2: 100 2,67 г/л. Количество лизиро- ванного фибриногена равно 3,55 г/л - - 2,67 г/л 0,88 г/л.

Заключение: диагностирована гипер фибриногеполитическая активность крови. Даны рекомендации к проведению коррегиру)ощей терапии.

Пример 2. Больной А., 58 лет. Диагноз: Острое нарушение мозгового кровообращения. Состояние больного тяжелое, требующее реанимационных мероприятий и интенсивной терапии.

Кровь для исследования у больного забирают, не сдавливая мягких тканей путем пункции вены силиконированной иглой в две силиконированные пробирки по 4,5 мл крови к 0,5 мп 3,8% цитрата натрия и к 0,5 мл 1,3%-ного раствора эпсилон-аминокапроновой кис лоты на 3,8%-ном растворе цитрата натрия, в первую и вторую пробирки соответственно, что соотносится как 9:1. Точно фиксируют время взятия крови в обе пробирки, которые тот

10

15

4694686

час ставят центрифугировать при 1500 об/мин в течение 7 мин. Затем к 0,1 мл 0,227%-ного раствора хлористо , го кальция приливают О, 5 кп цитратной плазмы в первую пробирку и 0,1 t-m раствора тромбина активностью 20 с. Во вторую пробирку к 0,1 мл О,227%-ного раствора хлористого кальция приливают 0,5 мл плазмы крови, взятой с раствором 1,3% эпсилон-аминокапроновой кислоты на 3,8%-ном растворе цитрата натрия, и О,1 мл раствора тромбина активностью 20 с. Обе пробирки тот час ставят на водяную баню при 37 С на 5 мин. Затем сгустки извлекают и высушивают на фильтровальной бумаге так, чтобы бумага бьша сухой. Сгуток сразу же взвешивают на торсионных весах: вес сгустка в присутствии ингибитора равен 9 мгх2 22,2:100 4,0 г/л, при отсутствии ингибитора вее равен 7,5 мгх2 22,2: :100 3,33 г/л. Количество лизиро- ванного фибриногена равно: количество фибриногена в 1,3%-ном растворе эпсилон-аминокапроновой кислоты - - количество фибриногена без этого ингибитора фибринолиза, а именно: 4,0 - 3,33 0,67 г/л.

Заключение: диагностирована гипер- фибриногенолитическая активность крови. Дань соответствукядие рекомендации к проведению коррегирующей терапии.

Время, затрачиваемое на осуществление способа, равно 20 мин, что в 9 раз быстрее способа-прототипа. Формула изобретения

20

25

30

35

Способ определения гиперфибрино- генолитической активности крови путем регистрации фибриногена в исследует мой пробе, отличающийся тем, что, с целью повьгоения точности и ускорения способа, определяют содержание фибриногена через 10 мин от момента взятия крови одновременно в двух пробах в присутствии 1,3%- ного раствора эпсилоь-аминокапроно- вой кислоты и без нее и при снижении содержания фибриногена во второй пробе относительно первой определяют гиперфибриногенолитическую активность крови.

Таблица 1

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии. Целью изобретения является повьшение точности и ускорение способа. Для этого в исследуемой цитратнор плаз-- не определяют количество фибриногена одновременно, в даух пробах: в присутствии ингибитора фибринолиза и без ингибитора„ В качестве ингибитора фибринолиза используют 1,3%- ньй раствор эпсилон-аминокапроновой кислоты. Учет количества фибриногена ведут по полученным на водяной бане при 3 С в течение 5 кии сгусткам фибрина, количество которых пропорционально исходному количеству фибриногена. При снижении содержания фибриногена во второй пробе от-гаси- тельно первой определяют гиперфибри- ногеНОЛитическую активность крови. с S

5,33

6,22

вм«чаш«в: про ваяты из табл..

По способу-прототипу увеличевм вктив- яоети лизиса выявляется ив всегда в сраваеими с заявляемии cnocotkM. В примере 3 ваблюдается завьаетм ак- ТЯВ80СТЯ лизиса до 67% по свособу- прототипу по сравнению с прсдпагаемм слосовом 0,89 г/л. В то эремя как в . примере to ахтнвиость лканса по сво- собу-орототилу равиа ОХ, а по ааяв- ляемому спосову активиость также высокая я рвава 5,3 Г/л.

ГиперфяО- ряяогмо- лятяческая акттвость кропя