Способ идентификации гаплоидов кукурузы Советский патент 1989 года по МПК A01H1/04 

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции дпя выявления гаплоидов кукурузы.

Известен способ выявления гаплоидов, основанный на использований доминантных маркерных генов и на морфологических особенностях гаплоидов, кукурузы.

Цель изобретения - повышение точности идентификации гаплоидов и ускорение селекционного процесса.

Способ осуществляют следующим образом.

Зерновки с гаплоидным зародьшем получают в полевых условиях в результате скрещивания нескольких гибридных комбинаций с маркерно гаплоинду

цирующей линией КМС (коричневый маркер Саратовский). Гибридные комбинации используют в качестве материнского компонента. На початки материнских растений до появления рылец надевают пергаментные изоляторы. Пыльцу с КМС наносят вручную. Изоляторы на початках сохраняют до созревания семян. После созревания полученные семена высаживают в чашки Петри и трое суток проращивают в термостате при . Предварительный отбор предполагаемых гаплоидов проводят по отсутствию антоцианового окрашивания корешков, а также по морфологическим признакам корешков и первого листа проростков.

сл

о о

00

315

Для анализа берут часть листовой пластинки 7-8-денвньгх: проростков кукурузы. Образцы гомогенизируют в течение 1-2 мин в тpиcглиlp нoвoм буфе- ре рН 8,3. Гомогенат после 1 ч настаивания центрифуги руют (5 тыс.об/мин в течение 10 мин). Для анализа берут надосадочную жидкость, смешанную с 40%-ным раствором сахаре- зы. Электрофорез проводят в вертикалных двуслойных пластинах полиакрил- амидного геля. Пероксилазу выявляют по реакции окисления бензидина до образования продукта окисления. Элек рофореграммы обрабатывают на лазерном денситометре.

На электрофореграммах и денсито- граммах различия между гапловдами и диплоидами выявлены в верхней части спектра; у гаплоидов присутствует / компонент с Rf 0,17, тогда как у диплоидов - с Rf 0,17 и Rf 0,20.

Метод отличается точностью и исключает ошибки в идентификации гаплоидов. Так, например, электрофорез пероксидазы листьев проростков гаплоидов из нескольких гибридных комбинаций, отобранных с помощью известных морфологических маркеров ЗМС (зародьшевый маркер Саратовский) и КМС (коричневый маркер Саратовский) по известному способу, и предполагаемых гаплоидов, у которых данный маркер проявляется не четко, показав

О 5

5

0

5

30

34

возможность ошибок в отборе гаплоидов по морфологическим признакам. Среди гаплоидов и предполагаемых гаплоидов, выделенных по морфологическим маркерам, методом электрофореза обнаружены диплоиды.

Применение предлагаемого способа увеличивает надежность отбора истинных гаплоидов, что очень важно для ускорения селекционного процесса.

Формула изобретен и я

1.Способ идентификации гаплоидов кукурузы, включающий скрещивание маркерной формы, содержащей гаплоин- дуцирующий фактор с исходной гибридной комбинацией, и последующий отбор ,гаплоидных проростков по морфологическим признакам, отличающийся тем, что, с целью повышения точности идентификации гапло- вдов и ускорения селекционного процесса, у отобранных по морфологическим признакам проростков дополнительно получают 1электрофоретические спектры пероксидазы и к гаплоидам относят проростки, в спектре которых присутствует одна верхняя зона с Rf 0,17.

2.Способ по п. 1, о т л и ч а ю- щ и и с я тем, что получают электро- форетические спектры 7-8 дневных проростков.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции для выявления гаплоидов кукурузы. Цель изобретения -повышение точности идентификации гаплоидов и ускорение селекционного процесса. Зерновки с гаплоидным зародышем получают в результате скрещивания гибридной комбинации с маркерной гаплоиндуцирующей линией. Полученные семена высаживают в чашки Петри и проращивают в термостате. Предварительно отбирают предполагаемые гаплоиды по морфологическим признакам корешков и первого листа проростков. У 7-8-дневных проростков получают электрофоретические спектры пероксидат, а к гаплоидам относят проростки, в спектре которых присутствует одна верхняя зона с R_F 0,17. 1 з.п. ф-лы.