Способ диагностики гипертонической болезни Советский патент 1990 года по МПК G01N33/53 

f

Изобретение относится к медицине - кардиологии, в частности к способам диагностики гипертонической болезни.

Целью изобретения является повышение точности и сокращение сроков диагноза.

Способ осуществляют следующим образом.

Этап 1. Подготовка проб. Лизиро- ванные эритроциты получают центрифугированием и обрабатьгеают ультразвуком 10 с при амплитуде колебания источника 20 (генератор Kerry, Branson или аналогичный).Просвет- ленную суспензию фрагментированных

мембран эритроцитов отмывают 2 раза раствором, содержащим 140 мМ NaCl, 10 КС1, 10 мМ HEPES-трис рН 7,4 (буфер .А).Полученные пробы можно хранить до 1 месяца при температуре не выше -20 С.

Этап 2. Радиоиммунологический тест .(РИТ). 1 мкг фрагментированных эрит- роцитарных мембран (этап 1) вЮОмкл буфера А наносят на поливннилхло- ридную ячейку (Flow Великобритания) и инкубируют 1,5ч при комнатной температуре, после чего проводят трехкратную отмывку ячейки фосфатным буфером, содержащим 0,05% твин-80 или 0,5% бычиЛ сывороточный альбу:п ш

3150

мин. Ячейку заполняют фосфатным буфером и инкубируют 1 ч. Затем в ячейку вносят 100 мкл (1 мкг) моно- кяональных антител, полученных пос- ле иммунизации мышей суспензией внутриклеточных капьций-аккумулирую щих мембран сердца собаки и клонирования клеток (клон ВСКК(П) 96Д) после гибридизации спленоцитов мьппи с миеломными клетками P3-Ag 8.653. После 1,5-часовой инкубации ячейку отмывают фосфатным буфером с 0,05Z твин-80 и заполняют 100 мкл буфера А, содержащего меченые по 1

антитела кролика к легким цепям иммуноглобулинов мыши (250000 имп./ми на одну ячейку). После 1,5-часовой инкубации и отмьшки фосфатным буфером ячейку просчитьгаают в у -спек-; трометре. Результат представляют в виде цифр, соответствующих числу импульсов за одну минуту, приходящихся на одну пробу. Превышение связывания антител более чем на 35% по сравнению со стандартными пробами (фрагментированные эритроциты практически здоровых людей) свидетельствует в пользу гипертонической болезни. Подготовка проб для РИТ занимает 2ч, радиоиммунологический тест продолжается в среднем 6ч, таким образом весь анализ заканчивается через 8 ч после забора крови у больного.

С помощью РИТ быпи обследованы следующие группы людей.

Бальные гипертонической, болезнью У 18 мужчин и 4 женщин на основании клинического обследования по двух- этапной схеме исследования больных с артериальной гипёртензией диагно- сгарована гипертоническая болезнь П ст. по классификации ВОЗ (1980г. Средн1 е артериальное давление (АД): систолическое 160 мм рт.ст., диас- толическое 101 мм рт.ст.

Больные артериальной гипертен- эией почечного генеза составили

группу из 16 мужчин и А женщин. Причиной артериальной гипертензии у 10 больных был хронический пиелонефрит у 10 - хронический гломеру- лояефрит. Среднее АД у больных хро- ническим пиелонефритом: систолическое 167 мм рт.ст., диастолическое 98 им рт.ст. Среднее АД у бальных . хроническим гломерулонефритом: систолическое 9 мм рт.ст., диастолическое 11.7 мм рт.ст.

Практически здоровые лица составили группу из 10 мужчин и 4 женщин без указаний на артериальную гипер- тензию в прошлом. Среднее АД: систолическое 120 мм рт.ст., диастолическое 85 мм рт.ст.

После подготовки проб и проведения РИТ с фрагментированньп мембранами зритроцитов практически здоровых лиц были выбраны пробы, показатель РИТ для которых соответствовал среднестатистическому значению связывания моноклональных антител для всей группы здоровых лиц. Эти пробы были выбраны в качестве стандартов при обследовании больньос (примеры).

Обследование группы больных гипертонической болезнью И ст. показало, что количестве Йоноклональных антител, связанных с фрагментами мембран эритроцитов больных гипертонической болезнью, превышает в среднем на 35% количество антител,связанных с препаратами мембран из крови здоровых .людей.

Сравнительный корреляционный анализ показателей натрий-литиевого обмена и РИТ у больных гипертонической болезнью показал, что наибольшие коэффициенты корреляции определяются при сопоставлении натрий-литиевого обмена со средним АД после функциональной пробы ВЭМ (велоэргометри- ческая нагрузка) и РИТ со средним АД при поступлении в клинику. Обнаруженная линейная зависимость feждy количеством связанных моноклональных антител .и средним АД позволяет использовать данный метод для диагностики гипертонической болезни и в отсутствие функциональных нагрузок.

В результате РИТ показано, что достоверных различий в связывании моноклональных антител фрагментами эритроцитов здоровых людей и больных вторичным гипертензиями не наблюдается. Таким образом, радиоиммунологический способ позволяет не только идентифицировать гипертоническую болезнь, но может применяться для дифференциальной диагностики арте- риальньгх гипертемзий.

Пример 1. Больной А., А1 го Среднее АД 123 мм рт.ст. (систолическое давление 150 мм рт.ст., диастолнческое - 110 мм рт.ст.).На ЭКГ - признаки гипертрофии миокарда левого желудочка сердца. Радиоиммунологическое тестирование - связывание мо-;оклональных антител увеличено на 35% относительно нормы. Параметры натрий-литиевого обмена до 295 мкмоль/л клеток/ч. Предварительный диагноз - гипертоническая болезнь II ст. подтвердился при дальнейшем клиническом обсл |едовании.

Пример 2. Больной В., 49 ле Среднее АД при поступлении в клиник 138 мм рт.ст. (систолическое давление 175 мм рт.ст., дийстопическое - 120 мм рт.ст.). На ЭКГ признаки гиА..

пертрофии миокарда левого желудочка Натрий-литиевый обмен - 267мкмоль/л клеток/ч. Радиоиммунологический тест 53%. После клинического обследования поставлен диагноз - гипертоническая болезнь II ст.

В ряде случаев результаты, полученные после измерения скорости натрий-литиевого обмена, не дают указаний на гипертоническую болезнь-, но после радиоиммунологического обследования клинический диагноз - гипертоническая болезнь подтверждается (пример 3).

Пример 3. Больной В., 58лет Среднее АД при поступлении в клинику 137 мм рт.ст. (систолическое давление 170 мм рт.ст., диастолическое- 120 мм рт.ст.). Скорость натрий-литиевого обмена - 148 мкмоль/л клеток/ч (норм. - 220 мкмоль/л клеток/ч Радиоиммунологический тест: превышение на 53% связывания моноклональ- ных антител, характерного для стандартных проб. После проведения клинического обследования поставлен диагноз - гипертоническая болезнь. II ст.

Пример 4. Больной Т., 40 лет Среднее АД при поступлении 153 мм рт.ст. (систолическое давление 200 мм рт.ст., диастолическое 130 мм рт.ст.). Натрий-литиевый обмен - 145 мкмоль/л клеток/ч, радиоиммунологическое тестирование 13%. В данном случае ни по показателям натрий-литиевого обмена,ни по радиоиммунологическому тесту аргу- ментов в пользу гипертонической болезни нет. Окончательный диагноз в стационаре - хронический пиелонефрит, артериальная гипертензия.

10

20

25

в

Пример 5. Больной Е.,47 лет. Среднее артериальное давление 110 мм рт.ст. (систолическое давление 150 мм рт.ст., диастолическое - 90 мм рт.ст.). Натрий-литиевый обмен - 114 мкмоль/л клеток/ч, радиоиммунологическое тестирование 3%. Окончательный диагноз в стационаре - гипертоническая форма хронического диффузного гломерулонефрита. Данные радиоиммунологического теста и результаты натрий-литиевого обмена подтверждают отсутствие у больного 15 мембранных нарушений, свойственных гипертонической болезни.

Увеличение связывания монокло- нальных антител у больных гипертонической болезнью, отсутствие дос- толерной разности по радиоиммунологическому тесту у;практически здоровых лиц и лиц, страда1д1цих вторичными артериальными гипертензийми, корреляция между цифрами артериального давления и радиоиммунологическим тестом, совпадение результатов радиоиммунологического теста и показателей натрий-литиевого обмена позволяют применять радиоиммунологический способ диагностики в ка- чест1зе теста по выявлению гипертонической бялезни.

Предлагаемый способ оценки мембранных нарушений в эритроцитах упрощает процедуру анализа, так как не требует работы с атомно-эмиссионным спектрометром и контроля функ- ционального состоя1гия эритроцитов в процессе подготовки проб,, повышает точность анализа, так как в ряде случаев диагноз гипертоническая болезнь подтверждается только радиоиммунологическим тестированием, (пример 3), ускоряет проведение исследования, поскольку от момента забора крови до получения конечного ре- зультата проходит не более 8ч, сокращает число измерений с 20 до 1, позволяет провести дифференциальную g диагностику симптоматических (вторичных) гипертоний. Предлагаемый способ может быть применен в эпидемиологических исследованиях, так как делает возможным накопление материала

а затем проведе- анализа.

обретения Способ диагностики гипертонической болезни, включаю1Ш1й исследование

0

5

0

5

течение месяца, мне одномоментного Формула из

15051938

мембран эритроцитов пациеита, о т-мембранам сердечной мьшщы кролнка

личйющийся тем что, сантитела к легким цепям нммуноглобуцепью повышения точности и сокраще-линов мыши, меченые , н при увения сроков диагноза, к исспедуемьм. личении связывания антнтел с эритфрйгментированным мембранам эритро-роцитами более чем на 35Z по сравцитов добавляют моноклональные ан-нениго с пробой, солержащей эритротитела гибридом ВСКК(п)-9бЛ к внут-щгты здоровых лкщей, диагностируют

риклеточным кальций-аккумулируючимгипертоническую болезнь.

Изобретение относится к медицине - кардиологии, в частности к способам диагностики и профилактики гипертонической болезни. Целью изобретения является повышение точности способа и сокращение сроков диагноза. Поставленная задача достигается тем, что фрагментированные мембраны эритроцитов адсорбируют на поливинил- хлоридных пластинках и оценивают степень связывания с ними монокло- нальных антител, полученных к внутриклеточным кальций-аккумулирутощим мембранам сердечной ткани. После сравнения количества связ анных мо- нокловальных антител с мембранами обследуемых и практически здоровых лиц делают вывод о предрасположенности к гипертонической болезни. Для больных гипертонической бо- лезнью характерно увеличение на ; 35% и более количества связанных мо- ноклональных антител. § СО