Способ отбора перспективных рекомбинантов при скрещивании родов СIтRUS и PoNcIRUS Советский патент 1990 года по МПК A01H1/04 

(21)4323931/30-13

(22)14.08.87

(46) 07.02.90. Бюл. № 5

(71)Институт общей генетики

им. Н.И.Вавилова и Сухумский Филиал Всесоюзного научно-производственного объединения по чаю и субтропическим культурам

(72)Б.И.Капанадэе, В.А.Шевченко и И.С.Капанадэе

(53)631.521 (088.8)

(56)Субтропические культуры, 1976, I, с. 59-62.

(54)СПОСОБ ОТБОРА ПЕРСПЕКТИВНЫХ .РЕ- КОМБИНАНТОВ ПРИ СКРЕПИВАНИИ РОДОВ CITRUS И PONCIRUS

(57)Изобретение относится к селекции

цитрусовьгх и может быть использовано в сельском хозяйстве. 11елъ изобретения - снижение трудоемкости и повышение точности отбора. Для получения потомства FI у гибридов Р( измеряют процент нарушения мейоза и анализируют данные электрофореза белковых экстрактов. Отбирают гибриды F, с нарушением мейоза меньше 20% и наличием изоФерментных локусов Got-1, Got- 2, Pgi и Idh. Потомство F прлучают от самоопыления отобранных гибридов F,. В гибридах F2 на стадии семян определяют наличие крахмала в семядолях. Для посева используют бескрахмальные семена, я в качестве перспективных рекомбинантов отбирают морозоустойчивые сеянцы F.J .

а «

(Л

Изобретение относится к селекции цитрусовых и может быть использовано в сельском хозяйстве. Цель изобретения - снижение трудоемкости и повышение точности отбора. Для получения потомства F₂ у гибридов F₁ измеряют процент нарушения мейоза и анализируют данные электрофореза белковых экстрактов. Отбирают гибриды F₁ с нарушением мейоза меньше 20% и наличием изоферментных локусов GOT - 1, GOT - 2, PGI и JDH. Потомство F₂ получают от самоопыления отобранных гибридов F₁. В гибридах F₂ на стадии семян определяют наличие крахмала в семядолях. Для посева используют бескрахмальные семена, а в качестве перспективных рекомбинатов отбирают морозоустойчивые сеянцы F₂.

Изобретение относится к селекции цитрусовых и может быть использовано в сельском хозяйстве.

Целью изобретения является снижение трудоемкости и повышение точности отбора.

Пример. Для получения потомства F$ отбирают гибриды F, с сравнительно упорядоченным мейозом - меньше 20% нарушений и наличием изоФер- ментных локусов Got-1, Got-2, Pgi, Idh.

Мейоз изучают на давленных препаратах пыльников. Бутоны очишают от чагаелистников и лепестков, фиксируют в смеси спирта г ледяной уксусной, кислотой (3:1). Перед цитологическим анализом пыльники протравливают в 4%- ном растворе железоаммонийных кваспов в течение 3-4 ч, затем окрашивают железным гематоксилином по Гейдангай- ну 4-5 CVT.

Для электрофореза используют бел- 1ковые экстракты листьев. Листья заливают жидким азотом, растирают до го- - могенногд состояния в ступке и экстрагируют ферменты в течение 18 ч при 4°С равным объемом буферного раствора: 0,05 М трис, 0,04 М аскорбиновая кислота, 0,005 М1цистеин, 0,001 М ЭДТА, рН 7,2, включающего 20%-ную сахарозу. Гомогенаты центрифугируют при 15000 об/мин в течение 30 мин. Электрофорез проводят в. вертикальном блоке полиакриламвдного геля в трис-ЭДТА-боратной непрерывной буферной системе, рН 8,3.

Сл

Јь

О 1

Јъ

В случае использования Т7, гибридов с нормально протекающим мейозом и с указанными изоферментными локу- сами среди сеянцев F, подвергнутых двойному отбору (морозоустойчивость и бескрахмальные семядоли, частота образования съедобных Аорм 0,037 i tO,OJ5. В известном способе, где не проводился предварительный отбор F гибридов и семян F2, частота получе ния перспективных форм 0,000157 - ±0,000018.

Гигтохимичсское окрашивание Фер- ментных систем проводят следующим образом.

Глутамлтоксллолцетаттрянсаминаза, с локусы Got-1 и Got-2. 0,1 М трис-ЫС1, буфер рН 8,8 50 мл, L-лспарагиновая кислота 160 мг, кетоглутаровая кислота 40 мг, прочный синий т;к соль 66 мг, гелевый блок инкубируют при ю 37°С 0,5 ч.

Изоцитдегидрогеназа, локус Idh 0,1 М трис-HCl, буфер рН 8,0 50 мл, В,Ь-изоиитрат натрия 40 мг, НАДФ

20 мг, 0,2 М Mod 2,5 мл, МТТ 10мг, 15 Формула изобретени ФМС 3 мг, гелевый блок инкубируют при 37°С 1 ч.

Глюкозофосфатизомераэа, локус Pgi. 0,1 И трис-HCl, буфер рН 8,0 80 мл, фруктоэа-6-фосфат (натриевая соль) 100 мг, глюкозо-6-фосфатдёгидрогена- за 80 ед, 0,2 М ИоСЬ 2,5 мл, НАДФ 20 мг, МТТ 10 мг, ФМС 3 мг, гелевый блок инкубируют при 37°С 20 мин.

Потомство F i получают от самоопыления. Цветки изолируют 2-слойной марлей.

Для выявления крахмала вырезают маленькие фрагменты из халазальной части семени. Присутствие крахмала определяют йодным реактивом. Бескрахмальные семена проращивают в стерильном песке. По окончании вегетационного периода (10 мес ) сеянны переносят в рефрижератор. Температуру понижают в следующем режиме, ч: 0°С 72, -6°С 48; -12°С 24. Не поврежден- ные и малоповреждениые растения I- 2 балла переносят в грунт.

20

25

Способ отбора перспективных ре- комбинантов при скрещивании родов Citrus и Poncirus, включающий измер ние и анализ биологических показате лей у гибридов F, и F1, по результа там которого выделяют перспективные гибриды, отличающийся тем, что, с целью снижения чрудоемкости и повышения точности отбора, качестве биологических показателей у гибридов F. измеряют процент нару шения мейоза и анализируют данные электрофореза белковых экстрактов, 30 Для получения .гибридов F7 отбирают гибриды F, с нарушением мейоза мень ше 20% и наличием изоАерментных ло- кусов , , Pgi и Igh, в ги ридах 7г на стадии семян определяют наличие крахмала в семядолях, для п сева F2 используют бескрахмальные с мена, а в качестве перспективных ре комбинантов отбирают мороэоустойчи35

вые сеянцы F2

В случае использования Т7, гибридов с нормально протекающим мейозом и с указанными изоферментными локу- сами среди сеянцев F, подвергнутых двойному отбору (морозоустойчивость и бескрахмальные семядоли, частота образования съедобных Аорм 0,037 i tO,OJ5. В известном способе, где не проводился предварительный отбор F гибридов и семян F2, частота получения перспективных форм 0,000157 - ±0,000018.

Формула изобретени

0

5

Способ отбора перспективных ре- комбинантов при скрещивании родов Citrus и Poncirus, включающий измерение и анализ биологических показателей у гибридов F, и F1, по результатам которого выделяют перспективные гибриды, отличающийся тем, что, с целью снижения чрудоем - кости и повышения точности отбора, в качестве биологических показателей у гибридов F. измеряют процент нару- шения мейоза и анализируют данные электрофореза белковых экстрактов, 0 Для получения .гибридов F7 отбирают гибриды F, с нарушением мейоза меньше 20% и наличием изоАерментных ло- кусов , , Pgi и Igh, в гибридах 7г на стадии семян определяют наличие крахмала в семядолях, для посева F2 используют бескрахмальные семена, а в качестве перспективных ре- комбинантов отбирают мороэоустойчи5

вые сеянцы F2