Способ стимуляции специфического иммунитета к вирусу гриппа у животных Советский патент 1990 года по МПК A61K39/00 A61K39/27 A61K39/12 

Изобретение относится к вирусологии, в частности к способу стимуляции образования специфического иммунитета к вирусу гриппа у животных.

Цель изобретения - повышение титра антител в крови у животных.

Способ осуществляют следующим образом.

Подопытному животному одномоментно с гриппозной вакциной внутрибрюшинно вводят полисахарид Bacillus mucila- ginosus в количестве 1,0-5,0 мкг/кг.

Используемый иммуностимулятор полисахарид B.mucilaginosus получают известным способом. Культуру слизистых бацилл B.mucilaginosus (штамм ВКМВ- 14461)) выращивают на мясо-пептонном агаре (МПА), содержащем 4-5% глюкозы, при температуре 37-39°С в течение

18-24 ч. Выделившуюся слизь смывают с поверхности агара изотоническим раствором хлорида натрия и центрифугируют при 600 об/мин в течение 30 мин. К над- осадочной жидкости прибавляют 3 объема 96%-ного этилового спирта. Через 24 ч выпавший осадок отделяют, депротеи- низируют и диализируют против дистиллированной воды.

Для осуществления предлагаемого способа иммунизации 1 мкг полисахарида B.mucilaginosus растворяют в 10 мл физиологического раствора (из расчета на 40 животных), смешивают с МО мл гриппозной вакцины и эту смесь вводят по 0,4 мл на мышь одним шприцом внутрибрюшинно, однократно. Вакцина инактнвированная, элюатно-хрома- тографическая, приготовленная из штам1

эо со

ма вируса гриппа H,N2 A/385/80-R, высокое количество гемагглютинина - 20 мкг/мл. Доза полисахарида B.mucila- ginosus составляет 1,0 мкг/кг. На , сутки животных обескровливают, сыворотки крови обрабатывают нейрами- нидазой нехолерного вибриона (уд. ак- тивность 5,6 ед/мг) и затем исследуют в реакции торможения гемагглютинации JQ (РТГА). Об иммуностимулирующей активности полисахарида B.mucilaginosus судят по содержанию антител в сыворотках крови животных.

Пример 1. Полисахарид B.mu 15 cilaginosus растворяют в физиологическом растворе из расчета 1,0 мкг/кг веса животного и вводят по 0,2 мл этого раствора мышам белым нелинейным весом 16-18 г внутрибрюшинно совмест-20 но одним шприцом с 0,2 мл вакцины инактивированной, элюатно-хроматогра- фической, приготовленной из штамма вируса гриппа A/385/80-R (20 мкг/мл по гемагглютинину). Контрольной группе 25 таких же мышей вводят по 0,2 мл той же вакцины, но вместо полисахарида 0Р2 мл физиологического раствора. Через 14 сут мышей кровопускают, сыворотки исследуют в РТГА. Б контроле 3 титр антител в 4,3 раза ниже, чем в опыте с использованием предлагаемого препарата.

Пример 2.Полисахарид B.muci- laginosus растворяют в физиологичес- , ком растворе из расчета 10,0 мкг/кг и вводят по 0,2 мл мышам весом 16-18 г внутрибрюшинно совместно с 0,2 мл гриппозной вакцины A/385/80-R. Контроль и кровопускание проводят по при- д меру 1. В контроле титр антител в 2,3 раза ниже, чем в опыте с использованием предлагаемого препарата.

Пример 3. Полисахарид В.тш cilaginosus растворяют в физиологи- 4 ческом растворе из расчета 0,1 мкг/кг и вводят по 0,2 мл мышам весом 16- 18 г внутрибрюшинно совместно с 0,2мл гриппозной вакцины A/385/80-R. Контроль и кровопускание проводят по при-с меру 1, В контроле титр антител в 2,1 раза ниже, чем в опыте с использованием предлагаемого препарата.

Результаты опытов обрабатывают методом вариационной статистики.

5

Иммуностимулирующее действие полисахарида B.mucilaginosus приведено в табл,1i

0

5 о

5 п

5

Из табл.1 следует, что эффективными дозами полисахарида являются 1,0 и 5,0 мкг/кг. С увеличением дозы препарата его иммуностимулирующая активность снижается и при дозах 500 мкг/кг различие в среднегеометрическом титре антител статистически недостоверно. Снижение оптимальной дозы препарата на 1-2 порядка не влияет на иммуногенез, и содержание антител в сыворотках крови животных, получивших 0,01 мкг/кг полисахарида, не превышает контрольного уровня.

Пример 4, Полисахарид B.mu- cilaginosus растворяют в физиологическом растворе из расчета 1,0,мкг/кг и вводят по 0,2 мл в смеси с 0,2 мл гриппозной вакцины A/385/80-R мытам весом 16-18 г: первой группе - внутрибрюшинно, второй - интраназально. рез 14 сут мышей кровопускают и ставят РТГА, В первой группе животных при внутрибрюшинном введении препарата и вакцины титр антител в 2,5 раза выше, чем при интраназальном способе введения.

Пример 5. Полисахарид B.mu- cilaginosus растворяют в физиологическом растворе из расчета 1,0 мкг/кг и вводят по 0,2 мл мышам весом 16- 18 г внутрибрюшинно первой группе од«- новременно с 0,2 мл гриппозной вакци-- ны штамма A/385-80-R, второй группе за 24 ч до введения той же вакцины Третью (контрольную) группу мышей иммунизируют той же вакциной, но вместо полисахарида смешивают с 0,2 мл физиологического раствора. Через 14 сут мышей обескровливают, сыворотки исследуют в РТГА, В первой группе животных прирост титров антител по., сравнению с контролем составляет 4,2 во второй 1,6, т„е. введение полисахарида B.mucilaginosus за 24 ч до введения гриппозной вакцины дает незначительный иммуностимулирующий эффект по сравнению с одновременным введением полисахарида и вакцины.

Пример 6. Полисахарид B.mucilaginosus растворяют в физиологическом растворе из расчета 1,0 мкг/кг и вводят по 0,2 мл мышам весом 16- 18 г внутрибрюшинно первой группе одновременно с 0,2 мл гриппозной вакцины A/385/80-R, второй группе через 24 ч после введения той же вакцины. Контроль и обескровливание осуществляют по примеру 5. Результаты РТГА показали, что в первой группе мышей содержание титров антител в крови в 4,2 раза больше, чем в контроле. Во второй группе содержание титров антител такое же, как в контроле, т.е. введение полисахарида B.mucilaginosus через 24 ч после введения вакцины не влияет на иммуногенез„

В приведена зависимость иммуностимулирующей активности полисахарида B.mucilaginosus от времени введения его животным.

Предлагаемый в качестве иммуностимулятора полисахарид при проверке на мышах оказался нетоксичным. Это подтверждается следующим опытом.

Полисахарид B.mucilaginosus растворяют в физиологическом растворе и вводят мышам весом 16-18 г внутрибрю- шинно однократно по 0,5 мл в дозах 25, 125 и 250 мг/кг. В течение 14 сут ведут учет гибели животных.

Определение токсичности полиса- .харида B.mucilaginosus и результаты опыта приведены в табл.3.

Из табл03 видно, что к 14-м суткам из 20 мышей в 1-й и 2-й группах погибли по 1 мыши, что составляет

0,5%, а в 3-й группе - 2 мыши, т.е. 1%„ Если принять во внимание, что в контрольной группе погибла 1 мышь, то их гибель в опытных группах можно считать не связанной с действием полисахарида. Учитывая, что гибель животных ни в одной из групп не достигла 50%, а также то, что испытуемые дозы превышают эффективную дозу препарата в несколько тысяч раз, можно сделать вывод, что предлагаемый препарат - нетоксичен,

Формула изобретения

Способ стимуляции специфического иммунитета к вирусу гриппа у животных, включающий введение иммунизирующего агента совместно с полисахаридом, отличающийся тем, что, с целью повышения титра антител в крови, в качестве иммунизирующего агента используют инактивировэнную

вакцину, приготовленную из штамма вируса гриппа A-385/80-R, из полисахаридов используют Bacillus mucila- ginosus BKMB-1446D в количестве 1,0- 5,0 мкг/кг, а введение осуществляют

внутрибрюшинно.

I .Таблица 1

Изобретение относится к вирусологии, в частности к способу стимуляции образования специфического иммунитета к вирусу гриппа у животных. Цель изобретения - повышение титра антител в крови животных. Для этого подопытному животному одновременно с итактивированной вакциной, приготовленной из штамма вируса гриппа А/385/80- R, внутрибрюшинно вводят полисахарид B. MUCILAGINOSIS в количестве 1,0 - 5,0 мкг/кг. Использование предлагаемого способа иммунизации животных обеспечивает повышение титра антител в 3,5 - 4,3 раза по сравнению с контролем. 3 табл.

Таблица 2

(контрольная) 1

10

10 10

(контроль- 10 ная)

Продолжение табл, 2

0,001