Способ электрофореза в потоке буфера Советский патент 1990 года по МПК G01N27/42 

Ияобретение относится к технике разделения и анализа заряженных частиц в постоянном электрическом поле и может быть использовано для препаративного разделения биологических смесей о

Целью изобретения является повышение разрешающей способности проточного электрофореза одновременно для всех частиц из разделяемой смеси.

На чертеже показана схема нанесения покрытия на стенки, ограничивающие слой буфера.

Угол наклона для различных дзета- потенциалов непрерывно изменяется

от d 0 для %. О до макслля ё MQKC-. Максимальный дзета-потенциал стенок должен соответствовать максимально возможному дзета-потенциалу разделяемых частиц, причем со стороны анода он должен иметь отрицательные значения (для разделения

1 отрицательно заряженных частиц), а со стороны катода положительные значения (для разделения положительно заряженных частиц).

Смесь частиц вводится в центр слоя для того, чтобы частицы в смеси, имеющие нулевой дзета-потенциал,

СП

00

ю

ОЭ

ел

сразу же попали в место в слое, где дзета-потенциал стенок также равен нулю. Зона частиц с нулевым дзета- потенциалом в электрическом поле не отклоняется и все время разделения находится в области с нулевым дзета- потенциалом стенок, и, следовательно, не искажается. Зона с частицами, имеющими максимальный дзета-потенци- ал, движется под углом ) потоку буфера и все время разделения находится в области с дзета-потенциалом стенок, совпадающим с дзета-потенциалом частиц, и в результате этого не искажается. При .этом очевидно, чт напряженность электрического поля в камере и время разделения выбирают таким образом, чтобы частицы, имеющие максимальный дзета-потенциал, двигались под углом о к потоку, который совпадает с углом „„„нанесеrt Я

ния покрытия. Все остальные частицы из смеси автоматически (вследствие линейности процесса) попадают в зоны где их дзета-потенциалы совпадают с дзета-потенциалами стенок слоя и разделяются без серповидных искажений.

F1 р и м е р. Стекляную пластину, являющуюся стенкой электрофоретичес- кой камеры, кипятят в 5%-ной азотной кислоте 5 мин, промывают дистиллированной водой и высушивают 2 ч при

115-125 С. Высушенную стеклянную пла

стину помещают в сосуд, содержащий

1 л 5-Ю%-ного раствора у- аминопропилтриэтоксисилана в бензоле или

толуоле и инкубируют при 20-25°С

2Ц ч, затем тщательно промывают бен- эолом (толуолом), затем ацетоном и

высушивают.

После этого стеклянную пластину помещают в раствор 3%-ного янтарного ангидрида в 50 мм Na-фосфате, рН 6,0 и инкубируют при 20-25°С в течение 12 ч, затем промывают дистиллированной водой.

Обработанную таким образом пласти- ну используют как стенку электрофоре- тической камеры проточного типа. После сборки камеры в нее подают с по

5

j

«

мощью -многоканального насоса CL ростью 0,05 мл/ч 0,%-ный водны,, раствор 1 -циклогексил-3 (2-морф лнно- этил)-карбодиимида мето-п-толуолсуль- фоната, рН раствора ,0.

Раствор циклически прокачивают через камеру 12 ч, затем промывают дистиллированной водой, подавая ее в камеру с той же скоростью. После промывки камеры в нее с той же скоростью подают, используя многоканальный насос, раствор предварительно фракционированных амфолинов и циклически прокачивают через камеру в течение 16 ч со скоростью 0,05 мл/ч, затем промывают камеру дистиллированной водой раствором 0,2 н. NaCl, затем нужным буфером. Подготовленную таким образом электрофоретическую камеру используют для разделения полипептидов.

Предлагаемый способ разделения в потоке буфера позволяет по сравнению с известным повысить разрешение одновременно для всех фракций заряженных частиц, входящих в состав смеси, и тем самым расширить область примене- ния проточного электрофореза.

Формула изобретения

Способ электрофореза в потоке буфера, включающий воздействие на слой непрерывно протекающего буфера с введенной в него полосой разделяемой смеси постоянного электрического поля перпендикулярно к направлению потока, а также подбор покрытия стенок, ограничивающих слой буфера, материалами с разными дзета-потенциалами, отличающийся тем, что, с целью повышения разрешающей способности, одновременно для всех разделяемых частиц на смеси разделение осуществляют в канале с распределенным на стенках покрытием, эффективный дзета-потенциал которого линейно изменяется от отрицательных значений у катода до положительных значений у анода, причем смесь разделяемых частиц вводят в слой в том месте, где эффективный дзета-потенциал покрытия равен нулю.

а

№т

W

m

Изобретение относится к технике разделения и анализа заряженных частиц и может быть использовано для препаративного разделения биологических смесей в исследованиях по молекулярной биологии и в биотехнологии. Цель изобретения - повышение разрешающей способности способа посредством устранения "серповидных" искажений одновременно для всех разделяемых частиц из смеси. Для этого стенки, ограничивающие слой буфера, покрывают материалами с различными дзета-потенциалами и направление покрытия осуществляют под углом к потоку буфера. Со стороны анода эффективный дзета-потенциал имеет отрицательные значения, а со стороны катода - положительные. Смесь разделяемых частиц вводят в слой в том месте, где эффективный дзета-потенциал стенок равен нулю. Напряженность электрического поля и время разделения выбирают такими, чтобы все частицы из смеси достигли тех мест в слое, где их дзета-потенциалы совпадают с эффективными дзета-потенциалами стенок. 1 ил.