СПОСОБ ОЧИСТКИ ПРОТИВОСТОЛБНЯЧНОГО ПРЕПАРАТА ИММУНОГЛОБУЛИНА ЧЕЛОВЕКА Советский патент 1994 года по МПК A61K39/08 A61K37/04 

Описание патента на изобретение SU1628293A1

Изобретение относится к медицине и касается специфических иммунных препаратов, получаемых из плазмы донорской крови человека.

Цель изобретения - расширение спектра действия противостолбнячного препарата иммуноглобулина человека за счет внутривенного введения.

В качестве исходного материала используют плазму иммунных доноров, полученную методом плазма фереза. Усредненный титр противостолбнячных антител в котловой смеси был 16 МЕ/мл в реакции пассивной гемагглютинации и 8 МЕ/мл в реакции нейтрализации токсина на белых мышах. Объем плазмы составляет 100 л. Фракционирование ведут по схеме, изложенной в Типовом комплексном регламенте производства белковых препаратов плазмы донорской крови.

На первой стадии фракционирования к плазме при постоянном перемешивании добавляют 53% -ный раствор этанола с температурой -20oC в количестве 18 л. Температуру плазмы снижают от 0 до -3oC к концу осаждения. Раствор центрифугируют и получают осадок фибриногена в количестве 1 кг и центрифугат в объеме 88 л. К центрифугату с температурой -2oC добавляют 53,7 л этанола, охлажденного до -20oC. Полученный раствор перемешивают и центрифугируют. Центрифугат поступает на дальнейшую обработку с целью получения альбумина, а осадок II+III (5,5 кг), содержащий иммуноглобулин, суспендируют в 40,25 л 0,15 М раствора хлорида натрия. Температуру суспензии понижают до -8oC с одновременным добавлением 41,2 л охлажденного до -20oC этанола. После тщательного перемешивания раствор центрифугируют и получают 5,4 кг отмытого осадка фракции II+III. Далее осадок суспендируют в 5,4 л 0,15 М раствора хлорида натрия и 36,45 л дистиллированной воды. К полученной суспензии добавляют ацетатный буфер и устанавливают рН раствора 5,1, после чего добавляют 48 л 26% -ного этилового спирта, охлажденного до -15oC, снижая температуру смеси до -4oC. После центрифугирования получают осадок (2,5 кг) бета-глобулина и липидов, который не используют, а центрифугат подвергают осветляющей фильтрации через асбестовые пластины. В фильтрате (90 л) устанавливают рН 6,95 с помощью 300 мл 1 М раствора углекислого натрия, затем добавляют охлажденный до -20oC 96% -ный этиловый спирт в количестве 14,4 л. Температуру раствора понижают до -9oС, перемешивают и центрифугируют. Полученный осадок противостолбнячного иммуноглобулина составляет 2 кг.

Осадок суспендируют в 3,0 л 0,15 М раствора хлорида натрия с 2% гликокола, фильтруют через бумажную мезгу и разливают по 200 мл во флаконы емкостью 500 мл. Получают 25 флаконов. Раствор иммуноглобулина замораживают при температуре не выше -45oC и закаливают при этой же температуре 20 ч. Сублимационную сушку проводят на аппарате КС-30 по графику сушки иммуноглобулинов. Лиофилизированный порошок извлекают из флаконов (500 г) и растворяют в 2 л апирогенной дистиллированной воды, устанавливая концентрацию белка в растворе 14,84% . Коррекцию рН осуществляют 0,1 н и раствором соляной кислоты, доводя до 5,05, на что потребовалось 1,5 л кислоты.

П р и м е р. К иммуноглобулину противостолбнячному, полученному по методу Кона, с рН исходного продукта 3,2-4,0, прибавляют на 100 г белка лиофилизированный пепсин ТE-09-10-229-7,4 с целью снижения антикомплементарной активности. Проводят стерилизующую фильтрацию через пластины Миллипор и выдерживают бутыль с фильтратом при 37oC в течение 18 ч. После протеолиза остаточный пепсин адсорбируют гелем гидроокиси алюминия. Образовавшийся нерастворимый комплекс "фермент - гидроокись алюминия" отфильтровывают на бумажной мезге. В фильтрате устанавливают рН 6,9 0,1 н. раствором гидрооксида натрия (1000 мл). Раствор иммуноглобулина стерилизуют и оставляют для формирования осадка балластных белков при 5oC в течение 30 сут. Осадок отделяют центрифугированием при 6000 об/мин в течение 1 ч. Полученный центрифугат фильтруют через стерилизующие пластины Миллипор и разливают во флаконы по 25 мл. Получено 120 флаконов.

Характеристика готового препарата: прозрачная бесцветная жидкость; рН 7,1; содержание белка 4,5 г/л; препарат электрофоретически однороден; антикомплементарная активность; 25 мг белка не связывают 2СН50; титр противостолбнячных антител 35 МЕ/мл; стерилен; апирогенен, не токсичен, в препарате отсутствует антиген гепатита В и антитела к ВИЧ.

В таблице приведена сравнительная характеристика препарата "Иммуноглобулин человека противостолбнячный, пригодный для внутривенного введения" и прототипа - "Иммуноглобулин человека противостолбнячного" для внутримышечного введения.

Как видно из приведенных в таблице аналитических данных, предлагаемый препарат отличает от прототипа сниженная в 500-4000 раз антикомплементарная активность, что дает возможность вводить его внутривенно в больших объемах, достигая быстрого лечебного эффекта. (56) Технические условия 42.14.168-80 "Иммуноглобулин противостолбнячный".

Похожие патенты SU1628293A1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНА ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ 1992
  • Сапожникова В.С.
  • Шарыгин С.Л.
RU2068695C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНА ЧЕЛОВЕКА АНТИСТАФИЛОКОККОВОГО ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ 1996
  • Шарыгин С.Л.
  • Сапожникова В.С.
  • Мальцева О.В.
  • Старостина Е.Е.
  • Анастасиев В.В.
RU2141341C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНА ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ, ОБОГАЩЕННОГО ИММУНОГЛОБУЛИНОМ М, И ПРЕПАРАТ, ПОЛУЧЕННЫЙ ЭТИМ СПОСОБОМ 2010
  • Лютов Андрей Германович
  • Решетник Вячеслав Викторович
RU2470664C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА ИММУНОГЛОБУЛИНОВ IgG, IgM И IgA ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ 2012
  • Гальговская Светлана Альфредовна
  • Анастасиев Валентин Васильевич
  • Короткова Татьяна Владимировна
RU2492176C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНА ЧЕЛОВЕКА ПРОТИВ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ 1996
  • Шарыгин С.Л.
  • Лазыкина А.В.
  • Мальцева О.В.
  • Матвеев Г.А.
  • Целовальникова О.П.
  • Николаева С.П.
  • Воронкова Г.М.
  • Владимирова Т.П.
  • Михеева Е.И.
  • Емельянова Л.М.
RU2141342C1
ПРЕПАРАТ ВНУТРИВЕННОГО ПРОТИВОАЛЛЕРГИЧЕСКОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ 2002
  • Алсынбаев М.М.
  • Исрафилов А.Г.
  • Еникеева С.А.
  • Бакиева И.Г.
  • Трофимов В.А.
  • Воронин С.С.
  • Хафизова Р.Н.
  • Гайтанова Е.И.
RU2238106C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНА ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ И ЕГО ВАРИАНТЫ 1999
  • Алсынбаев М.М.
  • Лютов А.Г.
  • Корнилова И.А.
  • Исрафилов А.Г.
  • Кудашева Г.Б.
  • Евченко Т.А.
RU2155069C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ IGM-СОДЕРЖАЩЕГО КОНЦЕНТРАТА ИММУНОГЛОБУЛИНА 1999
  • Лазыкина А.В.
  • Мигунов В.Н.
  • Лысова А.В.
  • Шарыгин С.Л.
  • Мальцева О.В.
  • Матвеев Г.А.
  • Авдеев В.Г.
RU2158136C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВОГО ПРЕПАРАТА 2000
  • Анастасиев В.В.
  • Короткова Т.В.
  • Змачинская Т.Б.
  • Крайнова Т.А.
  • Зубкова Н.В.
  • Пискарева Ю.К.
RU2192279C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИТИМОЦИТАРНОГО ГЛОБУЛИНА ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ 2012
  • Титова Елена Владимировна
  • Голубева Вера Леонидовна
  • Брускова Ольга Борисовна
RU2519765C1

Иллюстрации к изобретению SU 1 628 293 A1

Реферат патента 1994 года СПОСОБ ОЧИСТКИ ПРОТИВОСТОЛБНЯЧНОГО ПРЕПАРАТА ИММУНОГЛОБУЛИНА ЧЕЛОВЕКА

Изобретение относится к медицине специфических иммунных препаратов, получаемых из плазмы донорской крови человека. Цель изобретения - расширение спектра действия противостолбнячного препарата иммуноглобулина человека за счет внуривенного введения. Иммуноглобулин противостолбнячный для внутримышечного введения обрабатывают лиофилизированным пепсином для снижения антикомплементарной активности с последующей адсорбцией остаточного пепсина гидроокисью аммония и коррекции pH целевого продукта до назначений 6 и 9. 1 табл.

Формула изобретения SU 1 628 293 A1

СПОСОБ ОЧИСТКИ ПРОТИВОСТОЛБНЯЧНОГО ПРЕПАРАТА ИММУНОГЛОБУЛИНА ЧЕЛОВЕКА, отличающийся тем, что, с целью расширения спектра действия за счет внутривенного введения, препарат противостолбнячного иммуноглобулина обрабатывают лиофилизированным пепсином в концентрации 30 - 40 мг на 100 г белка в течение 18 ч при 37oС при pH исходного продукта 3,2 - 4,0 с последующей адсорбцией остаточного пепсина гидроокисью алюминия и корреляции pH целевого подукта до 6,9.

SU 1 628 293 A1

Авторы

Сапожникова В.С.

Думкин И.М.

Даты

1994-02-28Публикация

1988-11-23Подача