Способ определения степени дестабилизации мембран эритроцитов Советский патент 1991 года по МПК G01N21/00 

Изобретение относится.к медицине, а именно к клинико-лабораторной диагностике функционального состояния мембран эритроцитов.

Цель изобретения - повышение чувствительности способа путем приготовления образца суспензии мембран исследуемых эритроцитов в изотоническом растворе, с последующим спектрофлю- ориметрическим измерением при длине волны возбуждения Л 493 нм степени поляризации (Р Д) неполяризованного света, проходящего через образец, и степени фоновой деполяризации образ - ца (dPTi) при пропускании через него поляризованного света, причем о степени дестабилизации мембран исследуемых эритроцитов судят по увеличению (в % по отношению к норме) отношения Pft/dP A, которое в условиях физиологической нормы равно 3,623±0,070 относительных единиц.

Пример 1. У больной с разлитым перитонитом была втята кровь

до и после лечения с применением гипербарической оксигенации (ГБО). Суспензию мембран эритроцитов (теней эритроцитов) в изотоническом растворе готовили стандартным методом. Каждый образец суспензии помещали в кювету спектрофлюориметра и облучали сначала неполяризованным светом.Измеряли интенсивность поляризованного излучения выбранной волны, прошедшего через образец (поляризационная призма помещается после образца)„ Выбор длины волны возбуждения в видимой области (380- 760 нм), Максимум интенсивности поляризованного излучения наблюдается при длине волны возбуждения fl 493 нм.

Степень поляризации света образцом рассчитывали по формуле

(Л

оэ

СЈ СЬ 4

03

Pfl

I p :; Io/90 790

1о +

I0/90

где P ft - степень поляризации на длине волны ft ( fl 493 нм)} I - интенсивность излучения на

длине волны fl 493 нм, когда оба поляризатора установлены на нулевом делении; - интенсивность излучения на длине волны 493 нм, когда поляризатор возбуждаю щего монохроматора установлен на нулевом делении, а эмиссионный монохроматор на 90-ом делении.

Затем, помещая поляризационную призму перед образцом и пропуская через образец поляризованный свет, в том же образце измеряли степень фоновой деполяризации.

Степень деполяризации света образ- цом рассчитывали по формуле

,

-L л

- степень деполяризации

излучения на длине волны 493 нм;

- интенсивность излучения на длине волны ft 493 нм, когда поляризатор возбуждающего монохро- матора установлен на 90-ом

делении, а

эмиссионный мо на нулевом деле

нохроматор

нии.

После этого рассчитывали показатель анизотропии мембран - отношение Pft/dP fl, характеризующее степень дестабилизации мембран в исследуемом образце.

Величина показателя Pft/dP в условиях физиологической нормы, которая была предварительно определена у группы доноров (п 10), варьировала в пределах 3,623+0,070 относительных единиц (пример 2).

Степень дестабилизации мембран притроцитов рассчитывали как прирост Отношения Pft/dPft в исследуемом образце, выраженный в % по отношению к этому показателю в норме.

Полученные результаты представлены в табл.1.

Таким образом, на основании использования предлагаемого способа установлено: течение разлитого перитонита характеризуется сильным возрастанием величины анизотропии

-

5

0

5

0

5

5

0

0

5

(Pfl/dP/A) эритроцитарной мембраны, ч т.е. ее дестабилизацией. Позитивное влияние лечения с применением ГБО приводит к относительному снижению показателя анизотропии мембран эритроцитов в сторону нормальных значений и к соответствующему снижению степени дестабилизации этих мембран.

П р и м е р 2. Показатели анизотропии эритроцитарных мембран были измерены предложенным способом, как описано в примере 1, у большой группы больных с перитонитом разной степени распространенности и тяжести и у группы здоровых доноров.

Полученные результаты приведены в табл.2 и 3 и демонстрируют высокую чувствительность способа.

Сравниение предлагаемого поляризационного метода определения степени дестабилизации мембран эритроцитов с известным методом было проведено у семи больных в возрасте 29 - 64 лет с различной нозологией, стадией процесса и тяжестью состояния.

Контрольная группа состояла из трех доноров для известного способа и десять доноров для поляризационного способа.

Использование поляризационного метода позволило выявить степень повреждения эритроцитов у обследованных больных в несколько иной последовательности по сравнению с из вестным методом. В частности известный метод дает одинаковые величины повреждения эритроцитов у трех больных (степень дестабилизации 5,48%), сильно отличающихся по клиническим проявлениям.

Применение поляризационного метода позволило выявить принципиальные отличия степени повреждения эритроцитов у этих больных, которые хорошо коррелировали с общей выраженностью патологического процесса (степень дестабилизации 44,18%, 11,83% и

1,92%).

i

Таким образом, предлагаемый поляризационный способ определения степени дестабилизации мембран эритроцитов обладает более высокой чувствитель- . ностью по сравнению с известным способом.

516367316

Формула изобретения же образец пропускают поляризованный

Способ определения степени деста- свет и определяют степень фоновой де- билизации мембран эритроцитов путем поляризации образца при длине волны исследования их биофизических свойств возбуждения 493 им, далее рассчиты- отличающийся тем, что, вают отношение первого показателя с целью повышения чувствительности ко второму и при увеличении этого способа, исследуют образец суспен- отношения по сравнению с фиэиологичес- зии мембран эритроцитов в изотоничес- кой нормой, составляющей 3,623it ком растворе, пропускают через него д 40,070 относительных единиц, определя- неполяризованный свет и определяют ют степень дестабилизации мембран степень поляризации, затем через тот эритроцитов.

Таблица 1 -j..

Образец суспен- Измеряемые интенсивности излучб- Степень деста- зии мембран ния ( 493 нм), относи-билизации мембран

эритроцитовтельные единицы

I0 I90/0 JI./90 Р«Д TdPfl П

До лечения4,35 0,60 0.50 0,794 QJ37 5,8060,2

После лечения

ГБО4,60 0,80 0.40 0,840 0,174 4,8333,4

Пока- Труп- Контроль- По распространенности перитонита

затель па нал групМ±тпа () местный ()|разлитой () общий ()

3,62±0,07 3,91±0,25 4,52+0,13 4,3310,23

Уровень значимости, ,05«СО,.05

ТаблицаЗ

Фаза забо- MimУровень зна- Степень дестабилизации

леваниячимости,р

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения степени дестабилизации мембран эритроцитов. Цель изобретения - повышение чувствительности способа. Это достигается путем спектро- флюориметрического измерения степени поляризации неполяризованного света при прохождении его через образец суспензии мембран исследуемых эритроцитов и степени фоновой деполяризации поляризованного света тем же образом. О степени дестабилизации мембран эритроцитов судят по увеличению относительно нормы величины отношения первого показателя к второму, 3 табл.