Способ определения степени повреждения эритроцитов Советский патент 1986 года по МПК A61B5/15 G01N33/48 

Изобретение относится к Mez HUHHC, в частности к кардиологии и гематологии, и может быть использовано в ревматологии, трансфузиологии, сердечно-сосудистой хирургии и радиационной медицине.

Цель изобретения - повышение точности способа путем обработки эритроцитов изотоническим раствором мочевины и дифференциации умеренной и выраженной степеней повреждения эритроцитов.

Способ осуществляется следующим образом..

Производят забор венозной крови, которую стабилизируют 3,8%-ным раствором цитрата .чатрия. Пробу крови центрифугируют 15 мин со скоростью 1500 об/мин. Осторожно удаляют слои плазмы и лейкоцитов, оставшийся осадок эритроцитов разводят изотоническим раствором .хлорида натрия в соотношении 1:9.

Время полного гемолиза эритроцитов изучают по изменению оптической плотности раствора мочевины после добавления взвеси эритроцитов. С этой целью используется фотоэлектроколориметр ФЭК- 56М. Графическую регистрацию динамики процесса гемолиза осуществляют оксигемо- графом 036-М, подключенным к фотоэлек- троколориметру через мостовых сопротивлений РЗЗ. Определение производится при красном светофильтре фотоэлектроколори- метра.

В опытную кювету с рабочей гранью о мм вносят 2 мл 0,3 М раствора мочевины. Для обеспечения быстрого и равномерного распределе1 ия эритроцитов в кювете используется штопорообразная мешалка с рабочим тагом 2 мм и частотой вращения 600 об/мип (может быть использована любая мешалка). Вращением правого барабана фотоэлектроколориметра устанавливают писчик оксигемографа в крайнем правом пололсении и включают лентопротяжный механизм оксигемографа со скоростью 1 см/мин. В опытную кювету быстро добавляют 0,05 мл суспензии эритроцитов в изотоническом растворе хлорида натрия. При добавлении эритроцитов, которые являются оптически плотными частицами, оптическая плотность раствора увеличивается, и писчик оксигемографа быстро отклоняется влево, однако вследствие разру- 1нения эритроцитов в процессе гемолиза происходит постепенное падение оптической плотности раствора, которое регулируется в виде кривой. Переход кривой линии в прямую свидетельствует о полном гемо- лизировапик эритроцитов.

Время полного гемолиза определяют на регистрирующей бумаге оксигемографа ио длине отрезка АВ, где точка А отражает момент добавления эритроцитов в опытную кювету, а точка В является проекцией точки перехода кривой линии в прямую на нулевую линию.

При скорости движения лентопротяжного механизма оксигемографа 1 см/мин время нолного гемолиза равно длине отрезка АВхбО с.

Поскольку время полного гемолиза эритроцитов зависит от времени года, время 11ОЛНО1Ч) |-е 1о;1иза у больных выражают в процентах по отношению к средне.му времени гемолиза 3-5 здоровых доноров, полагая, что эритроцитарная мембрана у этих лиц не изменена. Доноры обследуются параллельно с больными ежемесячно.

Степень повреждения эритр01литов определяют по формуле

Время полного ге- мол из а в опыте,

с 100%

Степень Время среднего

вреждения эрит-полного гемолиза

роцктовздоровых доноров, с

Время полного гемолиза в опыте, с

И. XI Время среднего

полного гемолиза здоровых доно- ров, с.

Пример 1. Больной Н., 54 года, находился на стационарном лечении с диагнозом: острый инфаркт миокарда. Диагноз трансмурального инфаркта миокарда

установлен на основании клинических данных, изменений ЭКГ, повышения активности ферментов сыворотки крови. Вре.чя гемолиза в первые сутки составило 150 с (в контроле - 177 с), степень повреждения эритроцитов составляла 15% и в динакике болезни существенно не у.меньши- лась. Агрегация эритроцитов и вязкость крови не увеличились. Течение заболевания было благоприятным, признаки цирку- ляторных расстройств не отмечались.

Пример 2. Больная Б., 61 год, находилась на стационарном лечении по поводу острого инфаркта миокарда. Диагноз инфаркта установлен на основании критериев, использованных в первом случае. Время

гемолиза в 1-е сут заболевания - 90 с (в контроле - 145 с) степень повреждения эритроцитов соответственно - 38%, выраженных клинических признаков сердечной недостаточности не выявлено. Длительное время несмотря на введение наркотических анальгетиков сохранялся выраженный болевой синдром. На 2-е сут течение заболевания осложнилось истинным кардиогенным шоком. Время гемолиза уменьшилось до 1 мин, степень повреждения эритроцитов - 59%, агрегация эритроцитов увеличилась на 20%, относите; Ы ая вязкость крови возрасла в 1,5 раза. При явлениях прогрессирующей сердечной недостаточности

не поддающейся медикаментозному лечению, больная умерла.

Пример 3. Больной Г., 77 лет, находился на стационарном лечении по поводу острого инфаркта миокарда. Течение заболевания осложнилось первичной фибрилляцией желудочков, в постреани.маци- ониом периоде возникли явления отека мозга, появились признаки почечно-печеноч- ной недостаточности. С лечебной целью больному произведен сеанс гемосорбции на активированных углях (СНК-ЗМ) со средней производительностью 120 мл/мин при общем объеме перфузии 32 л. До гемосорбции время гемолиза составило 90 с (в контроле - 135 с), степень повреждения эритроцитов - 33%, гемоглобин - 105 г/л, свободный гемоглобин не определялся. После перфузии время гемолиза уменьщилось вдвое, степень повреждения эритроцитов - 67%, гемоглобин составил 95 г/л, свободный гемоглобин не определялся. На 2-е сут заболевание после гемосорбции у больного появились признаки гемолитической анемии: возрос непрямой билирубин, количество гемоглобина снизилось до 80 г/г, появился свободный гемоглобин. Несмотря на проведение активной терапии при нарастающих явлениях отека мозга больной умер.

Пример 4. Донор Б., 29 лет, практически здоров, степень «повреждения эритроцитов 5,0%

Пример 5. Больная П., 20 лет, с диагнозом: ревматизм, неактивная фаза, недостаточность митрального клапана. Миокар- диосклероз. ХНК 0. Степень повреждения эритроцитов - 10,1%.

Пример 6. Больной М., 46 лет, страдающий ишимической болезнью сердца, редкими приступами стенокардии напряжения {1-й функциональный класс) на фоне атеросклероза венечных артерий сердца и атеросклеротического кардиосклероза. ХНК О-1. Степень повреждения эритроцитар- ных мембран - 12,0%.

Пример 7. Больная С., 52 года, в течение двух последних лет страдала редкими приступами стенокардии, которые участились и стали носить более длительный характер последние два месяца. Степень повреждения эритроцитов при поступлении - 12,5%. В результате проведения адекватной терапии ее удалось снизить до 6,2%.

Пример 8. Больной Н., 42 лет, с диагнозом ИБС, гипертоническая болезнь II степени с частыми гипертоническими кризами. Атеросклеротический кардиосклероз. ХНК 2А. Степень повреждения эритроцитов при поступлении - 25,0%, после проведения курса лечения - 10,4%.

Пример 9. Больной Ш., 35 лет, болеет системной красной волчанкой, хроническое

течение, 11 степень активности с поражением кожи, почек, суставов, сердца. ХНК 1, ХПН 1. Исходная степень повреждения эритроцитов - 37,0%. под влия- нием интенсивного лечения, включая корти- костероиды, ее удалось снизить до 19,8%. Пример 10. Больная Я., 24 лет, с выраженной застойной недостаточностью кровообращения на фоне дилатационной кардиопатии с синдромом диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови и декомпенсированным метаболическим ацидозом. В результате проведенного в клинике лечения несколько снизилась выраженность нарушения кровообращения, однако степень повреждения эритроцитов осталась неизменной - 37,5%.

Пример п. Больная К., 36 лет, страдающая узелковым периартериитом высокой степени активности с поражением легких, почек, кожи, суставов. ХПН 1, ХЛН 1.

С целью дезинтоксикации и уменьшения активности аутоиммунного процесса проведена операция гемсорбции. При этом степень повреждения эритроцитарных мембран увеличилась с 38,0% до 45,1%, значительно возросла концентрация свободного гемоглобина, что потребовало продолжения антикоагулянтной и назначения мембран- стабилизирующей терапии.

0

Пример 12. Больной С., 50 лет, поступил в состоянии истинного кардиогенного шока с признаками острого трансмурального инфаркта миокарда. Несмотря на применение интенсивной терапии и контра- пульсации артериальное давление стабилизировать не удалось, отмечалось повреждение эритроцитарных мембран - 66,4%. Вследствии неэффективности проводимой терапии больной умер.

Из приведенных примеров видно, что при исследовании проницаемости эритроцитарных мембран группы здоровых лиц макси- мальное повреждение эритроцитов - 12,4%. Изменения в указанных границах (от О до 12,4%) отмечаются также при благоприятном течении различных заболеваний. При более тяжелом течении заболеваний, сопровождающихся болевым синдромом, ак- 5 тивацией симпатико-адреналовой, калликре- инкининовой систем, системном поражении сосудистого русла, отмечается умеренное повреждение эритроцитарных мембран, что сопровождается появлением в крови свободного гемоглобина, некоторым увеличением свертывающей активности эритроцитов и сдвигами кислотно-щелочного равновесия в сторону компенсированного ацидоза или алколоза. Вместе с тем, при проведении патогенической терапии удается уменьшить 5 степень повреждения эритроцитов до величин, наблюдаемых у больных с благоприятным течением патологических процессов и у здоровых доноров.

0

1220636

56

Выраженная степень повреждения эрн-метаболического ацидоза, большая концентроцитов наблюдается при тяжелом и частотрация недоокисленных продуктов метаболизнеблагоприятном течении ряда заболеваний,ма, в несколько раз возрастает уровень

а также при проведении травмирующихсвободного гемоглобина, значительно повыэритроциты лечебных процедур (операция, шается свертывающая активность эритрогемосорбции, контрпульсации). При этомцитов. отмечаются признаки декомпенсированного