Способ определения гомеостатичности форм ярового ячменя Советский патент 1991 года по МПК C12Q1/68 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции сельскохозяйственных растений.

Целью изобретения является повышение точности определения.

Предлагаемый способ прогнозирования гомеостатичности сортов, основан на оценке по показателю, который характери- зут изменчивость самого генома, а именно рибосомальной ДНК(рДНК) - участка, количественные характеристики которого тесно связаны с состоянием внешней и внутренней среды организма,

Пример. Семена (контрольного гоме- остатичного) и испытываемых сортов (форм) высевают по двум вариантам опыта в сосуды (10 сосудов на вариант): благоприятные условия -чернозем, NPK по 17%; неблагоприятные - песок, среда Прянишникова с 1 /8 содержания азота. Растения выращивают до получения зерен молочно-восковой спелости, выделяют из них тотальную ДНК, которую разрезают рестриктазой Bam HI. Фрагменты ДНК фракционируют с помощью электрофореза в агарозном геле, переносят на нитроцеллюлозные фильтры :. Эти фильтры с иммобилизованными на них

со

.N О

фрагментами ДНК гибридизируют с меченым фрагментом рДНК, который представляет собой последовательность размером 4,1 т.п.н., включающую часть 25S - 18S (блот-гибридизация по Саузерну) и экспони- руют с рентгенографической пленкой Для оценки различий по количеству фрагментов рестрикции рДНК между вариантами опыта определяют площадь полос рДНК с помощью радиоавтографа при сканировании на денситометре. Сравнение рДНК образцов, выращенных в разных почвенных условиях, делают в 5 повторных опытах по рестрикции ДНК, электрофорезу, блот-гиб- ридизации и сканированию радиоавтог- рамм.

Площадь полос фрагментов рДНК об- разцов выращеиных на черноземе (Хг) и на песке (Хп), представлена в таблице.

Из таблицы видно, что образцы сортов Южный и Донецкий-4, выращенные в контрастных условиях, практически не различаются по содержанию фрагментов рДНК, исключение составляет фрагмент размером 6,0 т.п.н. сорта Южный. Выявлены досто- верные различия между образцами сорта Магниф-105 по количеству фрагментов размером 8,8, 6,0, 4,0, 3,0 и 2,0-1,7 т.п.н.; и

между образцами сорта Карат, фрагменты 8,8, 7,8, 6,0 и 2,0-1,7 т.п,н. Таким образом рДНК гомеостатичных сортов (Южный, Донецкий-4) не претерпевает изменений под воздействием неблагоприятных почвенных условий, в то время как у негомеостатичных сортов (Карат, Магниф-105) зафиксированы изменения количества некоторых фрагментов рДНК.

Формула изобретения Способ определения гомеостатичности форм ярового ячменя, предусматривающий выращивание растений до молочно-вос- ковой спелости зерен, выделение и количественный анализ биохимического компонента, отличающий оя тем, что, с целью повышения точности определения, растения выращивают в контрастных почвенных условиях, а выделению и анализу подвергают тотальную ДНК из зерен, путем обработки ее рестриктазой, блот-гибриди- зации с зондом рДНК, сканирования радиоавтографов на денситометре и определения размеров фрагментов ДНК образцов, при этом форму считают гомеостатичной в случае отсутствия достоверных различий между размерами фрагментов у растений, выращенных в контрастных условиях.

Продолжение таблицы

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции растений. Целью изобретения является повышение точности определения. Способ прогнозирования гомеостатичности форм ярового ячменя включает выращивание растений до молочно-восковой спелости зерен в контрастных почвенных условиях, выделение ДНК, обработку BAMH 1 рестриктазой и блот-гибридизацию по Саузерну с меченым зондом рибосомальной ДНК (рДНК), который представляет собой последовательность размером 4,1 т.п.н, включающую часть 25 S и 18S рДНК. Сканирование радиоавтографа производят на денситометре. В качестве наиболее гомеостатичных генотипов отбирают те формы, у образцов которых, выращенных в сосудах с песком при недостатке почвенного азота, зафиксированы наименьшие изменения количественного содержания участков рестриктированной рДНК по сравнению с образцами, выращенными в сосудах с черноземом при подкормке азотно-фосфорно-калийными удобрениями. Способ может найти применение в селекционно-генетических исследованиях, при изучении молекулярных основ гомеостатичности растений, в селекции ярового ячменя для отбора гомеостатичных форм. 1 табл.

Различия достоверны (/ 0,95).