Способ определения активности фагоцитоза лейкоцитов в сосудистом русле Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине и физиологии, в частности к иммунологии, и может быть использовано в клинической и экспериментальной работе для определения преимущественного воздействия лечеб- ными факторами на один из отделов сосудистого русла.

Цель изобретения - повышение точности определения активности фагоцитоза лейкоцитов в различных отделах сосудистого русла.

Способ осуществляется следующим образом.

У обследуемого забирают субстрат из двух различных отделов сосудистого русла, один из которых условно называют первым , а другой - вторым. Например, при заборе крови из артерии и вены первым называют артериальный отдел, а вторым - венозный.

При заборе венозной крови и содержимого грудного лимфатического протока первым будет венозный отдел, а вторым - грудной лимфатический проток.

При изучении капиллярного отдела кровь забирают из мякоти пальца (капиллярная кровь КК), при исследовании венозного отдела, например, из локтевой вены (венозная кровь В К). При изучении артериального отдела берут кровь или из артерии, или по методике акад. Казначеева В.П. Палец разогревают 30 с в водяной бане при 40°С и прокалывают кожу копьем.

Во взятых образцах крови определяют количество лейкоцитов и их отдельных форм в автоматизированных системах или пробирочным методом с подсчетом лейкоцитарной формулы. Фагоцитоз ставят по Кост и Станко. К одному капилляру Панченко свеО 00

ГО

ел VI

неприготовленного 4%-ного раствора цитрата натрия добавляют 2 капилляра крови и 1 капилляр живой суточной культуры золотистого стафилококка, штамм 20 д, содержащих миллиард микробных тел в 1 мл. Смешивают, выдерживают в термостате 1 ч при 37°С, готовят мазки, фиксируют и красят ядерными красителями. Микроскопиру- ют и под иммерсией подсчитывают 100 нейтрофилов. При этом считают количество лейкоцитов, фагоцитировавших кокки, и определяют фагоцитарный индекс ФИ - процент фагоцитирующих лейкоцитов. Подсчитывают количество кокков, поглощенных фагоцитирующими клетками. Путем, деления количества поглощенных кокков на все подсчитанные клетки определяют фагоцитарное число ФЧ - количество поглощенных кокков одним нейтрофилом. Путем деления количества поглощенных кокков на количество фагоцитирующих клеток определяют число микробов фагоцита ЧМФ. Количество активных фагоцитов литра КАФ определяют по формуле

КАФ КЛ

ПФ ФИ 100 100

где КЛ - количество лейкоцитов в 1 л в виде ах 109/л;

ПФ - процент фагоцитов из лейкоцитарной формулы;

ФИ - фагоцитарный индекс. Результаты записывают в виде числа, умноженного на 109/л. Например: КАФ 3,5 109/л. Этот показатель определяет абсолютное количество лейкоцитов в 1 л, участвующих в фагоцитозе.

Процент активных лейкоцитов ПАЛ 1 л определяют по формуле

ПАЛ

КАФ КЛ

100.

Показатель определяет ту часть лейкоцитов 1 л, которая реально участвует в фагоцитозе.

По формуле МЧ КАФ- ЧМФ определяют то количество кокков, которые поглощаются лейкоцитами 1 л. Показатель называют микробным числом и выражают в виде числа, умноженного на 10 /л, например, 35-109/л.

При анализе полученных данных нецелесообразно использование показателя ФИ, так как он весьма относителен и используется в определении КАФ. Если его учитывать, то им пользуются 2 раза. Поэтому при анализе ФИ самостоятельно не учитывают.

Полученные показатели фагоцитоза в обоих исследуемых образцах исследуемого сравнивают с контролем и определяют снижение или повышение каждого показателя

по сравнению с контролем. Затем сравнивают показатели обследуемого в обоих отделах. С этой целью из абсолютной величины показателя первого отдела вычитают абсолютную величину показателя второго отдела и определяют величину и алгебраический знак (+, -) разницы. Эта разница называется по сравниваемым отделам. При этом первый отдел указывается первым, а второй - после него, например,

капиллярно-венозная разнииа (КВР), арте- риовенозная разница (АВР), артериокапил- лярная разница (АКР).Разница каждого показателя имеет величину или равна нулю (отсутствует). Значение разницы по алгебраическому знаку называют плюсовым (+) или минусовым (-). Затем значение разниц суммируют и получают алгебраическую сумму, например: три плюсовых значения, одно минусовое и одно нулевое в сумме дают плюс

2. По сумме значений разниц определяют снижение или повышение активности фагоцитоза в первом или втором отделе сосудистого русла. В тех же случаях,, когда имеются затруднения, следует учитывать величину

разниц, в первую очередь такого наиболее обобщающего показателя как МЧ.

При повышении показателей фагоцитоза у обследуемого по сравнению с контролем и плюсовой сумме знаков определяют

повышение активности фагоцитоза лейкоцитов в первом отделе, а при минусовой сумме знаков - повышение активности во втором отделе.

При снижении показателей фагоцитоза

у обследуемого по сравнению с контролем и плюсовой сумме знаков определяют снижение активности во втором отделе, а при минусовой сумме знаков - снижение активности фагоцитоза лейкоцитов в первом от5 деле.

Способ поясняется следующими примерами.

П р и м е р 1. Больная Х.Е.М., 48 лет. Клинический диагноз: первичный деформи0 рующий полиостеоартроз с преимущественным поражением лучезапястных суставов; хронический спастический колит; миокардиодистрофия ХНКо. Дата исследования 17.02.1983.

5 Артериальный отдел (контрольная группа в скобках) ФЧ 9,03: (3,64 ± 0,51); ЧМФ 18,43 (5,15 ± 0,33); КАФ 1,9404-10% (3,64 ± 0,49-109/л); МЧ 35,762-109/л

(18,3672 ± 3,1824-10%); ПАЛ 32,3(48,1 ± 2,25).

Капиллярный отдел: ФЧ 13,49 (3,71 ± ± 0,51); ЧМФ 22,1 (5,06 ± 0,33); КАФ 2.52 10% (3,65 ± 0,49-10%); МЧ 55,919-10% 5 (19,1922 ± 3,563-109/л); ПАЛ 37,2 (53,3 ± ± 3,45).

Анализ результатов артериального и капиллярного отделов. В артериальном и капиллярном отделах три показателя фагоцитоза: МЧ, ФЧ, ЧМФ - достоверно выше, чем в контроле, а КАФ и ПАЛ - ниже. Это дает основание заключить, что активность фагоцитоза лейкоцитов в обоих отделах у обследованной больной выше, чем в контроле.

Из показателя 1-го отдела вычитаем соответствующий показатель 2-го отдела и получаем следующие величины артериока- пиллярной разницы (АКР): ФЧ - 4,43, ЧМФ

10

15

3,67, КАФ - 0,5796

10%,

20

МЧ - 30,147

«10 /л, ПАЛ - 4,9. Все показатели разницы имеют минусовое значение (знак -), сумма их равна минус 5 (-5). Следовательно, активность фагоцитоза лейкоцитов выше во втором отделе сосудистого русла.

Заключение. У больной Х.Е.М.,48 лет, страдающей первичным деформирующим полиостеоартрозом с преимущественным поражением лучезапястных суставов, хроническим спастическим колитом, миокарди- одистрофией, при исследовании артериального и капиллярного отделов сосудистого русла определено повышение активности фагоцитоза лейкоцитов в капиллярном (втором) отделе сосудистого русла.

П р и м е р 2. Больная Х.Е.М., 48 лет. Клинический диагноз: первичный деформирующий полиостеоартроз с преимущественным поражением лучезапястных суставов; хронический спастический колит; миокардиодистрофия ХНКо. Дата исследования 17.02.1983.

Капиллярный отдел: ФЧ 13,49 (3,71 ± ± 0,51); ЧМФ 22,1 (5,06 ± 0,33); КАФ 2,52 109/л;(3,б5 ± 0,49- 109/л); МЧ 55,919-109 (19,1922 ± 3,568-10%); ПАЛ 37,2 (53,3 ± 3,45).

Венозный отдел: ФЧ 6,59 (3,97 ± 0,49); ЧМФ 17,63 (5,59 ± 0,48); КАФ 3,142-109/л (3,92 ± 0,49 10%); МЧ 55,574-10% (22,454 ± 3,392-109/л); ПАЛ 53,4 (55,3 ± 3,83).

Анализ результатов капиллярного и венозного отделов.

Три показателя (ФЧ, ЧМФ, МЧ) капиллярного и венозного отделов больной выше, а два (КАФ и ПАЛ) ниже, чем в контроле. Это дает основание заключить о повышении активности фагоцитоза в обоих отделах сосу5

10

15

0

5

дистого русла. Показатели разницы капиллярного и венозного отделов (КАР) равны: ФЧ 6,9, ЧМФ 4,47, КАФ - 0,622-10%, МЧ 0,345-10%, ПАЛ - 16,2, Сумма разниц ВКР равна +1 (плюс 1), что свидетельствует о высокой активности фагоцитоза лейкоцитов в первом (капиллярном) отделе сосудистого русла.

Заключение. У больной Х.Е.М.,48 лет, страдающей первичным деформирующим полиостеоартрозом с преимущественным поражением лучезапястных суставов, хроническим спастическим колитом, миокарди- одистрофией, при исследовании капиллярного и венозного отделов сосудистого русла определено повышение активности фагоцитоза лейкоцитов в капиллярном отделе.

П р и м е р 3. Больная К.А.А., 28 лет. Клинический диагноз: ревматизм, н/ф; сложный митральный порок ХНКпа. Дата обследования 5.11.1981.

Артериальный отдел; ФЧ 1,94 (3,64 ± ±0,51); ЧМФ 3,96(5,15 ±0,33); КАФ 1,691-10% (3,64 ± 0,49-10%), МЧ 6,694-10% (18,3672± ± 3,1824-10%); ПАЛ 33,8(48,1 ±2,25).

Венозный отдел: ФЧ 1,6 (3,97 ± 0,49); ЧМФ 3,33 (5,59 ± 0,49); КАФ 1 579-10% (3,92 ± 0,49-10%); МЧ 2,258-10% (22,258± 0 ± 3,393-10%); ПАЛ 33,6(55,3 ± 3,83).

Анализ результатов артериального и венозного отделов.

Абсолютные величины всех показателей фагоцитоза в артериальном и венозном отделах сосудистого русла ниже, чем в контроле. Артериовенозная разница (АВР) равна: ФЧ 0,34; ЧМФ 0,63: КАФ 0,112-10%; МЧ 1,433 10у/л; ПАЛ 0,2. Все результаты разницы показателей плюсовые, сумма знаков разниц равна 0 плюс 5 (+5). Следовательно, у обследованной больной активность фагоцитоза лейкоцитов снижена во втором (венозном) отделе.

Заключение: у больной К.А.А,,28 лет, страдающей ревматизмом со сложным мит- 5 ральным пороком с выраженной декомпенсацией сердца, при исследовании артериального и венозного отделов сосудистого русла определено снижение активности фагоцитоза лейкоцитов во втором 0 (венозном) отделе.

П р и м е р 4. Больной П.В.А,, 41 год. Клинический диагноз: остеохондроз позвоночника с выраженным болевым синдромом; язвенная болезнь 12-перстной кишки, 5 стадия рубцовой деформации, фаза ремиссии. Дата обследования 09.09.1987

Артериальный отдел: ФЧ 0,88 (3,64 ± ±0,51); ЧМФ 3,03 (5,15 ± 0,33); КАФ 0,8584« х10% (3,64 ± 0,49-10%); МЧ 2,6009-10%

5

(18,3672 ± 3,1824-10%); ПАЛ 21,5(48,1 ± 2,25).

Капиллярный отдел: ФЧ 1,82 (3,71 ± ± 0,51); ЧМФ 4,55 (5,06 ± 0,39); КАФ 1,0912 10% (3,65 ± 0,49-10%); МЧ 4,9649-10% 5 (19,1922 ± 3,568-109/л), ПАЛ 17,6 (52,3 + 43,45).

Анализ результатов артериального и капиллярного отделов.

Абсолютные величины показателей фа- Ю гоцитоза в артериальном и капиллярном отделах сосудистого русла ниже, чем в контроле. Артериокапиллярная разница АКР равна - 0.34, ЧМФ - 1,52, КАФ - 0,2328 10%, МЧ - 2,364-10%, ПАЛ 3,9. Получен- 15 иые результаты разницы имеют четыре минусовых и одно плюсовое значение, сумма равна минус 3 (-3), что свидетельствует о более низких показателях фагоцитоза в первом (артериальном)отделе.20

Заключение: у больного П.В.А., страдающего остеохондрозом позвоночника с выраженным болевым синдромом, язвенной болезнью 12-перстной кишки в стадии руб- цовой деформации (фаза ремиссии), при ис- 25 следовании артериального и капиллярного отделов сосудистого русла определено снижение активности фагоцитоза лейкоцитов в первом (артериальном) отделе.

Для оценки эффективности и полезно- 30 сти предлагаемого изобретения в клинической практике на протяжении 1978-1988 годов в условиях стационара клинической больницы и санаториях ревматологического профиля (санатории Синяк и Горная Тис- 35 са) обследовано 14 практически здоровых лиц, 31 больной ревматизмом и 20 больных первичным деформирующим остеохондрозом. При сравнении результатов исследования по способу-прототипу показатели были 40 изменены преимущественно у больных ревматизмом и только в сторону снижения. У больных первичным деформирующим осте- оартрозом изученные показатели оказались изменёнными только у двух больных. Одна- 45 ко показатели прототипа не давали возможности точно оценивать степень нарушения фагоцитоза в отдельном лейкоците и лейкоцитах литра и выявлять тот отдел сосудистого русла, где активность фагоцитоза была 50 изменена.

Таким образом, в прототипе показатели оказались измененными только у 65% больных и только в сторону снижения. Используя предлагаемый способ, удалось выявить изменение активности фагоцитоза лейкоцитов у всех 100% обследованных и их снижение или повышение. Таким образом, формально чувствительность предлагаемого способа выше на 1/3, а с учетом количественной характеристики отдельного лейкоцита и лейкоцитов литра на 100%, так как в прототипе такие характеристики отсутствуют.

Формула изобретения Способ определения активности фагоцитоза лейкоцитов в сосудистом русле, включающий забор исследуемого материала, добавление к нему микробных клеток, определение фагоцитарного индекса, количества микробов в 1 фагоците, количества активных фагоцитов в 1 л исследуемого материала, микробного числа в1 л, отличающий с я тем, что, с целью повышения точности способа путем определения фагоцитоза в различных отделах сосудистого русла, дополнительно определяют фагоцитарный индекс, количество микробов в 1 фагоците, количество активных фагоцитов в 1 л, микробные число в 1 л второго отдела, далее в обоих отделах определяют фагоцитарное число и процент активных лейкоцитов в 1 л, сравнивают величины показателей обоих отделов с соответствующими величинами показателей контрольной группы, определяют величину и знак разницы каждого показателя между сравниваемыми отделами, суммируют знаки разниц и при повышении показателей фагоцитоза обследуемого по сравнению с контролем и плюсовой сумме знаков разниц определяют повышение активности фагоцитоза лейкоцитов в первом отделе, а при минусовой сумме знаков разниц определяют повышение активности фагоцитоза лейкоцитов во втором отделе, при снижении показателей фагоцитоза обследуемого по сравнению с контролем и плюсовой сумме знаков разниц определяют снижение активности фагоцитоза лейкоцитов во втором отделе, а при минусовой сумме знаков разниц - снижение активности фагоцитоза лейкоцитов в первом отделе.

Изобретение относится к медицине и физиологии и может быть использовано в клинической и экспериментальной работе для определения активности фагоцитоза лейкоцитов в различных отделах сосудистого русла и преимущественного воздействия лечебных факторов на один из отделов этого русла. Цель изобретения - повышение точности определения фагоцитоза лейкоцитов в различных отделах сосудистого русла. Новым в предлагаемом решении является исследование комплекса показателей фагоцитоза в мазке и литре крови, определение их абсолютных величин и величины знака (+, -),разницы каждого показателя в сравниваемых отделах и суммы знаков разниц. По совокупности предложенных показателей обследуемого и контрольной группы определяют изменение активности фагоцитоза лейкоцитов в том или другом отделе сосудистого русла. s Ё