Способ оценки морозоустойчивости гибридных сеянцев винограда Советский патент 1992 года по МПК A01H1/04 

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции винограда на морозоустойчивость, для ранней диагностики потенциальной морозоустойчивости, в исследованиях по физиологии и биохимии винограда.

Известен способ оценки морозоустойчивости методом прямого промораживания изолированных частей растений при различных температурах в специальных холодильных установках с последующим определением степени повреждения.

Недостатком зтого способа является то, что он довольнотрудоемок, требует большого количества побегов в одном образце, что может привести к гибели гибридного растения, представленного, как правило, в единственном числе. Поэтому использование

указанного способа с гибридным материалом затруднительно.

Наиболее близким к изобретению является способ оценки морозоустойчивости виноградного растения, включающий отбор проб в виде побегов, получение из них ферментного препарата, определение активности полифенолоксидазы и пероксидазы фотометрическим методом.

Недостатком atoro способа является то, что он предусматривает использование в осенне-зимний период черенков винограда после их промораживания, заготовка которых на гибридных растениях, представленных, как правило, в единственном числе, приоодит к их ослаблению или дажб гибели, вследствие этого период оценки удлиняется. Кроме того, по способу-прототипу невозможно сохранить весь полученный се

лекционный материал, который может погибнуть вследствие срезки побегов для промораживания.

Целью изобретения является ускорение способа и сохранение селекционного материала.

Способ заключается в том, что в листьях определяют активность полифенолоксидазы, отбор проб для определения ее активности проводят в начале и в конце цветения винограда, и чем выше активность к концу цветения, тем больше потенциальная морозоустойчивость гибридного сеянца.

Способ осуществляют следующим образом.

Пробы растений винограда, преимущественно листьев (в цепях сохранения селекционного посадочного материала), отбирают о утренние часы на определенных узлах побегов, например девятом - двенадцатом, в начале и конце цветения. Отобранные пробы по возможности быстро доставляют с поля в лабораторию в полиэтиленовых пакетах. С поверхности листьев удаляют пыль мягкой кистью или ватой. Для определения используют части листовой пластинки, находящиеся между жилками. Тормозящее действие различных веществ листа на активность ферментов ликвидируют многократной обработкой охлажденным ацетомом до удаления пигментов, фенольных и других растворимых в ацетоне веществ, влияющих на точность результатов. Для этого ножницами измельчают 6-7 отобранных и очищенных листьев, помещают их в фарфоровую ступку и растирают (при использовании побегов берут ткань луба, снятую с трех-четырех побегов, мелко нарезанную среднюю пробу обрабатывают ацетоном, растирают и т.д.). Затем все заливают ацетоном, хорошо перемешивают, пестик снимают, ацетон осторожно сливают через бумажный фильтр. Обработку повторяют 5-6 раз до полного обесцвечивания осадка. Затем осадок высушивают при комнатной температуре до полного удаления следов ацетона. Полученный осадок служит в качестве ферментного препарата и сохраняет свою активность в течение недели при хранении в холодильнике. На аналитических весах отвешивают три навески по 40 мг сухого препарата и помещают в мерные пробирки объемом 10 мл. Приливают к ним 2,4 мл смеси, содержащей 5/6 частей пирогаллола и 1 /6 часть дистиллированной воды. Навеску и смесь в пробирке осторожно взбалтывают, оставляют в термостате при 25°С. Через 10 мин реакцию приостанавливают прибавлением 1 мл 20%-ной серной

кислоты. Затем Б пробирку до метки доливают охлажденный серный эфир, закрывают пробками и взбалтывают резкими движениями. Образовавшийся в результате реакции

пурпурогаллин переходит в эфир. Пробирки ставят в воду () и фотометрируют эфирный раствор 8 кюветах толщиной 10 мм длине волны 400-480 мм. Количество пурпурогаллина, образовавшегося в пробирке, является показателем активности полифенолоксидазы.

Многолетние определения активности полмфенолоксидазы листьев у десяти сортов за весь период аегетации показали, что

в период цветения ее активность низкая у всех изучаемых сортов. В конце цветения или сразу после окончания цветения постоянно отмечалось увеличение ее активности в различной мере в зависимости от степени

морозоустойчивости сорта (см. табл. 1). При этом повышение активности полифенолоксидазы связывают с распадом ауксинов, способствующих росту побеге Таким образом, степень повышения

активности полифенолоксидазы к концу цветения дает возможность оценить потенциальную морозоустойчивость гибридного материала уже на 2-3-й год развития без затрат времени на дальнейшее выращивание, промораживание и изучение большого количества гибридных растений по признаку морозоустойчивости.

Параллельными исследованиями у гибридных сеянцев двух семей (Восторг х Шамбурсен и Восторг х Сейв Виллар) выявлены достоверные различия между сеянцами внутри каждой семьи как по морозоустойчивости, так и по увеличению активности полифенолоксидазы в начале и в конце

цветения .

Результаты промораживания на 3-й год вегетации подтвердили выводы о более высокой морозоустойчивости сеянцев, выделенных поданным активности полифенолоксидазы (см. табл. 2). .

Формулаизобретенип Способ оценки морозоустойчивости гибридных сеянцев винограда, включающий определение активности полифенолоксидазы, по значению которой ведут оценку, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа и сохранения селекционного материала, активность полифенолоксидазы определяют в листьях дважды, в

начале и в конце цветения, рассчитывают степень увеличения активности в конце цветения, и чем выше зто значение, тем больше потенциальная морозоустойчивость гибридного сеянца.

Активность полифенолоксидаэы листьев {в миллиграммах пурпурогаллина на 1 г ацетонового препарата за 10 мин) в зависимости ot различной

морозоустойчивости сортов

Таблица 1

Наименьшая существенная разность для 95 %-ного уровня вероятности. Относительная ошибка (точность опыта).

Изменение, активности попифенолоксидазы листьев в период вегетации и сохранность глазков после действия температуры -25° у гибридных сеянцев семьи СВ 12-375хВосторг с различной морозоустойчивостью

Таблица 2

1984-1986гг

Продолжение табл. 2