Среда для разбавления спермы хряков Советский патент 1992 года по МПК A61D19/02 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, преимущественно к средам для разбавления спермы хряков.

Известен разбавитель для разбавления спермы хряков, имеющий следующий состав: на 1 л дистиллированной воды глюкозы - 46 г (или сахарозы - 92 г), сульфата натрия безводного - 2,8 г, спермосана-3 250 000 ед.

Однако семя, разбавленное этим разбавителем, следует использовать в течение 2 ч после взятия, так как при более длительном хранении в известном разбавителе происходят морфофункциональные и физико-химические изменения на клеточном, субклеточном и молекулярном уровнях, что приводит к снижению биологической полноценности спермиев и их оплодотворяющей способности, а также к уменьшению многоплодия в условиях свиноводческих комплексов.

Наиболее близким к предлагаемому является среда для разбавления спермы хряков (ГХЦС), содержащая глюкозу, ЭДТА (хелатон-3), лимоннокислый трехзамещениый пятиводный натрий, сернокислый аммоний, двууглекислый натрий, спермосан-3 и бидистиллированную воду при следующем соотношении ингредиентов, г на 1 л бидистиллированной воды:

Глюкоза40

ЭДТА (хелатон-3) -2.6

Натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный 3,8 Аммоний сернокислый1,8

Натрий двууглекислый0,5

Спермосан-3, тыс.ед.250

Бидистиллированная вода Остальное Однако известная среда ГХЦС для разбавления спермы хряков не обеспечивает повышение оплодотворяющей способности и подвижности сперматозоидов, по которым оценивают их биологическую полноценность.

Целью изобретения является повышение подвижности и оплодотворяющей способности сперматозоидов.

Указанная цель достигается тем, что в среду для разбавления спермы хряков, включающую глюкозу, ЭДТА(хелатон-З), лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий, сернокислый аммоний, двууглекислый натрий, спермосан-3 и бидистиллироаанную воду, дополнительно вводят молочнокислый литий при следующем соотношении компонентов, г/л:

Глюкоза40,0-50,0

ЭДТА (хелатон-3)2,6-3,3

Лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 3,8-4,5 Двууглекислый натрий0,5-1,0

Сернокислый аммоний1,8-2,4

Спермосан-3, тыс.ед.250-500

Молочнокислый литий0,12-0,32

Бидистиллированная вода Остальное При значении рН среды 7,0-7,3.

Предлагаемую среду для разбавления спермы хряков готовят следующим образом.

Берут 1 л бидистиллированной воды и нагревают ее до кипения. В горячей воде растворяют, г; ЭДТА(хелатон-З) 2,6-3,3; лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 3,8-4,5: сернокислый аммоний 1,82,4; затем раствор охлаждают до 40°С и добавляют: глюкоза 40,0-50,0; двууглекислый натрий 0,5-1,0; спермосан-3 250500 тыс.ед. и молочнокислый литий 0,120,32, при этом рН среды 7,0-7,3.

Приготовленной средой разбавляют концентрированную сперму в соотношении 1:1...3 при температуре среды 37°С.

Приготовленная таким образом среда может использоваться в течение 6 сут от момента приготовления и храниться в холодильнике при 4-:бС.

В предлагаемой среде для разбавления спермы хряков на этапе отработки оптимальных ее параметров было установлено, что наилучший эффект от использования предлагаемой среды регистрировался при добавлении к известной среде 0,12-0,32 г/л молочнокислого лития и при значении рН среды 7,0-7,3, при этом соотношение остальных компонентов в среде следующее, г/л:

Глюкоза40,0-50.0

ЭДТА (хелатон-3)2,6-3,3

Лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 3,8-4,5 Сернокислый аммоний1.8-2,4

Двууглекислый натрий0,5-1,0

Спермосан-3, тыс.ед.250-500

Бидистиллированная вода Остальное Увеличение количества вносимого в 0 среду молочнокислого лития 0.32 г/л. а также превышение верхних пределов количеств остальных компонентов среды (глюкоза. ЭДТА (хелатон-3), лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий, сернокис5 лый аммоний, двууглекислый натрий и спермосан-3) ведут к повышению осмотического давления среды по сравнению со спермой хряка, для которой предназначена среда, что приводит к значительному сниже0 нию подвижности сперматозоидов. Уменьшение количества вносимого в среду молочнокислого лития ниже 0,12 г/л, а также снижение нижних пределов количеств остальных компонентов среды, ведут к сни5 жению осмотического давления среды по сравнению со спермой хряка, т.е. среда не будет изотонической, что приводит к снижению биологической полноценности живчиков в семени из-за нарушения структурной 0 целостности акросомы. определяющей в значительной степени оплодотворяющую способность.

Увеличение водородного показателя рН среды свыше 7,3 ведет к потере подвижно5 сти сперматозоидов и снижению оплодотворяемости, а снижение этого показателя ниже 7,0, т.е. при сдвиге рН в сторону кислотности, среда вредно действует на сперматозоиды, при этом снижается их пережи0 ваемость, подвижность и биологическая полноценность.

Экспериментальные испытания предлагаемой среды на сперме хряков.

Пример 1. Берут 1 л бидистиллиро5 ванной воды, нагревают ее до кипения и в горячей воде растворяют 2,6 г ЭДТА (хелатон-3), 3,8 г лимоннокислого трехзамещенного пятиводного натрия, 1,8 г сернокислого аммония, охлаждают раствор до 40°С. после 0 чего добавляют 40,0 г глюкозы. 0,5 г двууглекислого натрия, 250 тыс. ед. спермосана-3 и 0,12 г молочнокислого лития при рН среды 7,0. Приготовление среды и разбавление спермы проводят в стерильных 5 условиях. Взятую при помощи искусственной вагины от хряка сперму фильтруют, определяют известным способом активность и концентрацию сперматозоидов для определения степени ее разбавления и разбавляют, постепенно приливая среду к

сперме небольшими порциями, тщательно перемешивая при температуре среды 37°С, учитывая, что температура среды в момент разбавления должна равняться температуре самой спермы. Разбавление приготовленной средой спермы производят в от.ношении (1:1)-(1;3). Инкубацию семени в среде ведут при комнатной температуре (20°С) в течение 3 сут. После 3-суточной инкубации определяют подвижность спермиев известным способом по 10-бальной системе с помощью микроскопа. Подвижность сперматозоидов составила 7 баллов. В качестве контроля использовали известную среду ГХЦС (прототип), которой разбавляли взятую у этого же хряка сперму и аналогичным образом, как в опыте, определяли подвижность сперматозоидов, которая составила 4 балла, что свидетельствует о превосходстве новой среды над известной (прототип) по количеству подвижных сперматозоидов через 3-е суток инкубации.

П р и м е р 2. Берут 1 л бидистиллированной воды, нагревают ее до кипения и в горячей воде растворяют 3,0 г ЭДТА (хелатон-3), 4,2 г лимоннокислого трехзамещенного пятиводного натрия, 2,1 г сернокислого аммония, охлаждают раствор до 40°С, после чего добавляют 45,0 г глюкозы, 0,8 г двууглекислого натрия, 350 тыс.ед. спермосана-3 и 0,24 г молочнокислого лития при рН среды 7,15. Приготовленной средой разбавляют взятую от хряка сперму в отношении (1:1)(1:3), предварительно определив известным способом активность и концентрацию сперматозоидов. Разбавление спермы средой ведут при температуре последней 37°С. После 3-суточной инкубации семени в среде при комнатной температуре (20°С) определяют подвижность спермиев известным способом по 10-бальной системе с помощью микроскопа. Подвижность сперматозоидов составила 8 баллов. В контрольной среде ГХЦС (прототип) подвижность сперматозоидов спермы этого же хряка через 3-е суток инкубации составила 3 балла.

П р и м е р 3. Берут 1 л бидистиллированной воды, нагревают ее до кипения и в горячей воде растворяют 3,3 г ЭДТА (хелатон-3), 4,5 г лимоннокислого трехзамещенного пятиводного натрия, 2,4 г сернокислого аммония, охлаждают раствор до 40°С после чего добавляют 50.,0 г глюкозы, 1,0 г двууглекислого натрия, 500 тыс.ед. спермосана-3 и 0,32 г молочнокислого лития при рН среды 7,3. Взятую от хряка сперму фильтруют, определяют известным способом активность и концентрацию сперматозоидов и производят разбавление, приливая среду к сперме. Температура среды в момент разбавления составляет 37°С. Разбавление приготовленной средой спермы производят в отношении 1:3. Инкубацию семени вереде ведут при комнатной температуре () в 5 течение 3-е суток, после чего определяют подвижность спермиев известным способом по 10-бальной системе с помощью микроскопа. Подвижность сперматозоидов составила 7 баллов. В качестве контроля

0 использовали известную среду ГХЦС (прототип), которой разбавляли взятую у этого же хряка сперму и аналогичным образом, как в опыте, определяли подвижность сперматозоидов, которая составила 3 балла.

5 Сравнительные испытания контрольной среды ГХЦС (прототип) и предлагаемой среды с граничным и оптимальным содержанием количества компонентов (I, II и III варианты) по оценке подвижности сперматозоидов, как описано в примерах 1-3, проводили на 36 животных по 9 хряков каждой группы (контроль и три варианта опыта). В контрольной группе подвижность сперматозоидов составила 3,0±0,б балла (30% rio

5 10-бальной системе); в опытной группе I варианта (содержание компонентов среды в нижних пределах) подвижность сперматозоидов составила 7,5±0,7 балла (75%): в опытной группе И варианта (оптимальное

0 содержание компонентов среды) подвижность сперматозоидов составила 8.0±0,91 балла (80%); в опытной группе III варианта (содержание компонентов среды в верхних пределах) подвижность сперматозоидов со5 ставила 7,7 + 0,4 балла (77%).

Использование предлагаемой среды для разбавления спермы хряков в условиях свиноводческих комплексов.

П р и м е р 4. Готовят среду для разбавления спермы хряка как описано в примере 1. В приготовленной среде на 1 л бидистиллированной воды содержится, г: глюкоза 40,0 ЭДТА (хелатон-3) 2,6; лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 3,8;

5 сернокислый аммоний 1,8; двууглекислый натрий 0,5; спермосан-3 250 тыс.ед.; молочнокислый литий 0,12, рН среды 7.0. Взятую при помощи искусственной вагины от хряка сперму фильтруют, определяют известным

0 способом активность и концентрацию сперматозоидов и разбавляют приготовленной средой, приливая среду к сперме, при температуре среды 37°С. Разбавление приготовленной средой спермы производят в

5 отношении 1:1. Приготовленную ,цля осеменения сперму фасуют в тонкостенные флаконы вместительностью 150-250 мл, в которых она может храниться до 6 сут. Флаконы с разбавленной спермой перед осеменением

подогревают в теплой воде до 35°С. Для осеменения готовят две группы животных (опытная и контрольная) по 50 голое в каждой, клинически здоровых с нормальной функцией половых органов, Содержание я кормление животных опытной и контрольной групп было одинаковым и соответствовало санитарно-гигиеническям ш технологическим нормам, Опытную группу х и8отных осеменяют приготоз,пеиной спермой, разбавленной предлагаемой средой, а контрольную - спермой, разбавленной известной средой ГХЦС (прототип). Оплодотворяющую способность оценивают по результатам опросов, Оплодотворяемость свиноматок опытной группы при использоазиии спермы, разбавленной пре,и1агаемой средой, составляет 75%, а контрольной

/о..,

П р и м а р 5, Готовят среду для разбав эния спермы хрлка как описано в примере , Вприготовлениой среде нэ 1 л бидистилл ..рованной воды содержится, г: глюкоза 5,0; ЭДТА (хелатон-3) 3,0; лимоннокислый оехзамеи1енный пятиводный натрий 4,2; .;рнок11слый аммоний 2,1; двууглекислый натрий 0,8; спермосан-3 350 тыс.ед,; молочнокислый литий 0,24 г, рН среды 7,15. Разбавление прчготовле :но /. средой спермы производят в отношении 1:1, Приготовленную для осеменения сперму фасуют во флаконы. Для осеменения готовят две группы животных (опытная и контрольная) по 60 голов в каждой. Опытную группу животных осеменяют предварительно подогретой до 35°С спермой, разбавленной предлагаемой средой, а контрольную спермой, разбавленной известной средой ГХЦС (прототип). Оплодотворяющую способность оценивают по результатам опоросоа. Оплодотворяемость свиноматок опытной группы при использовании спермы, разбавленной предлагаемой средой, составляет 80%, что на 17% выше, чем в контроле (63%).

П р и м е р б. Готовят среду для разбааления спермы хряка как описано в прИ(мере 1, В приготовленной среде на 1 л бидистиллироеанной воды содержится, г: глюкоза 50,0; ЭДТА (хелатон-3) 3,3; лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 4,5; сернокислый аммоний 2,4; двууглекислый натрий 1,0; спермосана-3 500 тыс.ед.; молочнокислый литий 0,32, рН среды 7,3. Разбавление приготовленной средой спермы производят в отношении 1:1. Для осеменения готовят две группы животных (опытная и контрольная) по 60 голоо в каж,дой. Опытную группу животных осеменяют предварительно подогретой до 35°С спермой.

разбавленной предлагаемой средой, а контрольную -- спермой, разбавленной и.звестной средой ГХЦС (прототип). Оплодотворяющую способность оценивают

по результатам опоросов, Огшо,цотворяемость свиноматок опытной группы при использо8 -нии спермы, разбааленной предлагаемой средой, составляет 77%, что на 13% зыше, чем в контроле (64%).

Кроме указанных а примерах -б испытг-ний предлагаемой среды для разбавления спермы хрякон проводили сравнительные испытания контрольной среды ГХЦС (прототип) и предлагаемой среды, содерх ащей

оптимальные количества компонентов, г на 1 л: глюкоза 45,0; ЭДТА (хелатон-3) 3,0; лимоннокислый трехзамещеиный пятиводный натрий 4,2; сернокислый аммоний 2.1; дзууглекислый натрий 0,8: спермосан-3

350 тыс.ед. молочнокис.пый литий 0,24, при рН 7,15. Всего в сравнительных испыта -1иях участвоозло 1200 свиноматок, по 600 голов в контрольной и опытной группах. Оплодотворяющую способность и многоплодие оценивали по результагам опоросов.

Результаты сравнительного испытания новой и известной сред представлены в таблице.

Как видно из данных таблицьк предлаrasMa.q среда превосходит известную (прототип) по проценгу оплодотворяемости свиноматок, так при использовании спермы, разбавленной предлагаемой средой оплодотворяемость свиноматок составляет

80%, ч,о на 17% выше, чем е контроле, а также по многоплодию (11,6 в опыте, 8,2 в контроле) с сохранением живой массы поросят при рождении.

Таким образом, предлагаемая среда для

рззбавления спермы хряков обеспечивает повышение подвижности сперматозоидов по сравнению с прототипом и по проценту подвижности сперматозоидов через 3-е суток хранения о ней превосходит известную

в 2,5 раз.а, а также гшвышение оплодотворяющей способности сперматозоидов, оцениваемой по результатам опоросов.

Формула изобретения Среда длл разбавленик спермы хряков,

включающая. . хелатон-3, лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий, сернокислый аммоний, двууглекислый натрий, спермосан-3 и бидистиллированную воду, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения подвижности и оплодот|Эоряюа ей способности сперматозоидов, она дополнительно содзр-жит молочнокислый литий при следующем соотношении компонентов, г/л;

Глюкоза40.0-50,0

Хелатон-32,6-3.3

Лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 3.8-4,5 Сернокислый аммоний1.8-2,4

Двууглекислый натрий0,5-1,0

Спермосан-3250-500

Литий молочнокислый0,12-0,32

Бидистиллированная вода Остальное при значении рН среды 7.0-7.3.

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, преимущественно к средам для разбавления спермы хряков. Цель изобретения -- повышение подвижности и оплодотворяющей способности сперматозоидов. Среда содержит, г/л: глюкоза 40,0-50,0; ЭДТА(хелатон- 3) 2,6-3,3: лимоннокислый трехзамещенный пятиводный натрий 3,8-4,5: аммоний сернокислый 1,8-2,4: двууглекислый натрий 0,5-1,0: спермосан-3 ,250--500 тыс.ед.: молочнокислый литий 0,12-0,32. бидистилли- рованная вода - остальное, при рН среды 7,0-7,3. При использовании среды подвижность сперматозоидов хряков возрастает в 2,5 раза, оплодотворяемость увеличивается на 17%, многоплодие- на 29,.4% по сравнению с прототипом. 1 табл.(Л