Среда для разбавления и замораживания спермы хряков Советский патент 1985 года по МПК A61D7/02 

Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйстве ных животных, в частности к синтетическим средам для разбавления и замораживания семени преимущественн хряков. Известны среды для разбавления и замораживания семени животных, включающие дисахара, глюкозу, окись магния, окись кальция, этилендиамин тетраацетат двунатриевьй двуводньй, лимоннокислый аммоний, гЛицерин, же ток кiфинoгo яйца и воду lj . Недостатком таких сред является отсутствие антиоксидантов, предотвр щающих развитие в сперматозоидах перекиснрго окисления липидов. Известна также среда для разбавления и замораживания семени сельск зозяйственных животных, например хряков, содержащая дисахарид, моносахарид, этилендиаминтетраацетат двунатриевьй двуводньй, окись кальция, окись магния, аммоний лимоннокисльй, глицерин, желток, воду и аи тиоксиданты (2,6-дибутил-п-крезол либо 2-(и 3)-бутил-4-гидрооксианизол) а . Недостатком указанной среды явля ется то, что входящие в ее состав антиоксиданты недостаточно эффектив ны для применения в составе криозащитных сред из-за нерастворимости в воде и дефицитности. Известна среда для разбавления и замораживания спермы хряков, вклю чающая источник углерода - глюкозу, цитрат, натрия 5,5-водньй, этилендиа минтетраацетат двунатриевьй двуводньй, трис(оксиметил)аминометану сул фат аммония, глицерин и липидньй компонент . . . Недостатком известной среды явля ется то, что она не обеспечивает устойчивость мембран сперматозоидов при замораживании и длительном хранении семени вследствие отрицательного влияния желтка, а также отсутствия природных антиоксидантов, пре дотвращающих вредные последствия перекисного окисления липидов. Желток к тому же является потенциальны носителем пагалогии и отличается непостоянным химическим составом, что в свою очередь сказьгоается на стабильности получаемый: результатов Морфофизиологические показатели замороженно-оттаянного семени в зна чительной степени связаны со сроком хранения яиц. Кроме того, желток куриного яйца повьппает кислотность среды, что вызывает необходимость применения в составе сред дополнительных буферных систем и соответственно дополнительных затрат. Введение в состав среды дефицитных дорогостоящих компонентов - желтка куриного яйца и фруктозы делает среду дорогой и труднодоступной. Целью изобретения является улучшение сохранения вьшиваемости и оплодотворяющей способности сперматозоидов при замораживании. . Поставленная цель достигается тем, что среда для разбавления и замораживания спермы хряков, включающая источник углерода - глюкозу. Цитрат натрия 5,5-водньй, этилендиаминтетраацетат двунатриевьй двуводньй, трис(оксиметил) аминометан, сульфат аммония, глицерин и липидньй компонент, содержит в качестве липидного компонента водньй экстракт подсолнечного масла, а в качестве источника углерода дополнительно содержит сорбит при следующем соотношении компонентов, мае.%: Сорбит2,5-3,5 Глюкоза0,6-0,8 Цитрат натрия 5,5-водньй0,2-0,3 Сульфат аммония 0,2-0,,3 Этилендиаминтетраацетат двунатрие0,3-0 ,,4 вьй двуводньй Трис(оксиметил) 0,04-0 .,06 аминометан 3,0-4,,О Глицерин Водньй экстракт подсолнечного До 100 . Причем водньй экстракт подсолнечного масла содержит подсолнечное масло и воду в соотношении 0,4-0,6:1. Введение в среду водного экстракта подсолнечного масла вместо желтка куриного яйца обуславливает присутствие в растворе ненасыщенньк жирных кислот (подсолнечное масло содержит 52-64% линолевой и 2-5% линоленовой кислот), которые способствуют увели :. чению выживаемости сперматозоидов и в конечном счете повышают оплодотворяющую способность семени. Кроме того, экстракт подсолнечного масла богат природными антиоксиданта;31ми (51 мг% альфа-токоферола) и следовательно, предотвращает вредные последствия перекисного окисления липит дов, что в свою очередь ведет к стабилизации мембран и сохранению целостности акросомь сперматозоидов при замораживании-оттаивании семени. Снижение утечки ферментов в плазму также ведет к повьшению оплодотворяю щей способности сперматозоидов. Эффективность от использования предлагаемой среды достигается за счет высоких криозащитных свойств ненасыщенных жирных кислот и присутствия природных антиоксидантов. Сорбит значительно снижает себестоимость предлагаемой среды по срав нению с известной, что наряду со сни жением себестоимости среды за счет применения водного экстракта подсолнечного масла помогает достичь высоСостав среды, мае, 13 кой экономической эффективности. Пример. Среду для разбавления и замораживания семени сельскохозяйственных животных готовят следующим образом. В 1 л водного экстракта подсолнечного масла при комнатной температуре растворяют соответствующее количество компоиентов среды (табл.1) для экспериментов взято 5 составов (сред). Затем среду доводят до температуры семени, предварительно выдержанного в течение одного часа при комнатной температуре, разбавляют семя средой в соотношении 1:1, выдерживают при +15°С в течение 4 ч, затем охлаждают до +4с в течение часа и замораживают при -100 С в парах жидкого азота на фторопластовой пластине, причем оттаивание ведут при +60 С. .Таблица 1

1. СРЕДА ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ И ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ ХРЯКОВ, включающая источник углерода - глюкозу, цитрат натрия 5,5-водный, этилендиаминтетраацетат двунатриевый двуводный, трис(оксиметил)аминометан, сульфат аммония, глицерин и липидньй компонент , отличающаяся тем, что, с целью лучшего сохранения выживаемости и оплодотворяющей способности сперматозоидов при замораживании, в качестве липидного компонента среда содержит водный экстракт подсолнечного масла, а в качестве источника углерода дополнительно содержит сорбит при следукяцем соотношении компонентов, мас.%: Сорбит2,5-3,5 Глюкоза0,6-0,8 Цитрат натрия 5,5-водный 0,2-0,3 Сульфат аммония 0,2-0,3 Этилендиаминтетра- ацетат двунатриевый двуводный 0,3-0,4 Трис(оксиметил) аминометан 0,04-0,06 (Л Глицерин 3,0-4,0 Водный экстракт подсолнечного маслаДо 100 2. Среда по п. 1, отличающаяся тем, что водный экстракт подсолнечного масла содержит подсол с нечное масло и воду в соотношении 0,4-0,6:1. iu

Для получения экстракта подсолнеч ного масла последнее (ГОСТ 1129-73) встряхивают в течение 1 ч с дистилли рованной водой в соотношениях, представленных в табл. 2, затем центрифугируют при 1,5-2,0 тыс. об/мин в течение 15-20 мин, либо оставляют в сосуде экстрагирования на 1 ч для разделения слоев, верхний слой .отсасьгоают водоструйным насосом, а нижний используют для приготовления синтетической среды. Таблица2 Количество, ч. Подсолнечного масла | воды Продолжение табл. 2 Количество, ч. Подсолнечного масла 075 Эффективность применения разработанной среды оценивают по подвижности, выживаемости при , проценту интактных акросом и оплодотворяющей способности сперматозоидов после замораживания-оттаивания семени. Результаты испытания пяти вариантов сред представлены в табл. 3 и 4.

vt M

И

s ц ю « н

н

«о

VO

-щ

4f

(41

гм

я

А

я

О

Н

tnCS

1Г

$

о н

о t «г «л

00

«

1Л

я

о

о

о

о

«л

о

«

А

А

л U1 xf

fn

IV о

ш о

W)

о

tA

m

Ik«

А

ООО

О

tn

Sс

см

оо

tn eg

- сч

m

00

t.

fl

«I

о о

rv

л

3t

A

rt 9 11434 ОплодоХВоряемость свиноматок при использовании семени, замороженного в предлагаемом составе среды по сравнению с известным, повьшается на 31,6%, Ожидаемый экономический5 эффект от ислользойания предлагаемой среды составляет-i|.58 тыс. руб на 1000 свиноматок ; Применяемые в предлагаемой среде компоненты являются дешевыми и недефицитными. Это позволяет получить дополнительный экономический эффект 1310 в сумме 245 руб. на 1000 свинбматок за счет Сахаров и экстракта, , Применение водного экстракта подсолнечного масла в составе синтетических сред для разбавления и замораживания семени сельскохозяйственных животных позволяет заранее проверять пригодность больших партий масла к применению, что исключает нежелательные случайности в работе, имеющие место при использовании желтка куриного яйца.