Способ определения аутоиммунного процесса Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине и может найти применение в клинике нервных болезней, паталогоанатомической и судебно-медицинской практике.

Цель изобретения - прижизненное определение аутоиммунной демиелинизации.

Поставленная цель достигается тем, что у больного берут биоптат кожи, готовят из него два гистологических среза, один из которых окрашивают Суданом черным, второй импрегнируют серебром, докрашивают общегистологическими красителями и по распаду миелиновых волокон, сопровождающемуся лимфо-моноплазмацитарными и/или лимфо-моноцитарными инфильтратами, устанавливают демиелинизирующий процесс аутоиммунной природы.

Пример 1. Больная Р., 31 год, история болезни N° 226. Клинический диагноз; рассеянный склероз, цереброспинальная форма. У больной берут биоптат кожи плеча размером мм, расправляют и наклеивают на полоску чистой плотной бумаги, фиксируют в течение 1-3 сут в 10%-ном растворе нейтрального формалина при рН 7,3 и на замораживающем микротоме готовят 2 среза толщиной 20-60 мкм, которые переносят на предметные стекла, смазанные смесью яичного белка с глицерином. Один из срезов помещают в спиртовой раствор Судана черного (300 мг красителя в 100 мл 70° спирта) на 15 мин, дифференцируют в 70° спирте и заключают в лицерин-желатину. Второй срез импрегнируют азотно-кислым серебром по методике Бильшовского-Грос и докрашивают гематоксилин-эозином.

На первом срезе (судан черный) в толстых пучках и приводящих рецепторных волокнах кожи наблюдается распад миелиновых оболочек в виде глыбок, шаров и зерен. На втором срезе (импрегнация серебром) обнаруживаются также деструктивные изменения аксонов - их фрагментация, зернистый распад, резкое истончение с образованием варикозных расширений. После докраски этих срезов гематоксилин-эозином (Г-Э) среди распадающихся нервных волокон по ходу нервных пучков, а также вокруг кровеносных сосудов выявляются воспалительные инфильтраты, состоящие из лиг лфоцитов, моноцитов, м плазматических клеток. Все обнаруженные изменения подтверждают наличие деммелинйзирующего аутоиммунного процесса, а именно распад миелиновых оболочек, выявляемый путем окраски Суданом черным, свидетельствует о демиелинизации, а деструктивные изменения аксонов и характерные воспалительные инфильтраты на препаратах, импрегнированных серебром, говорят о тяжелой степени поврехчдения нервных аппаратов и подтверждают клинический диагноз аутоиммунного демиеликизирующего заболевания.

П р и м е р 2. Больной У., 39 лет, история болезни Мг221. Клинический диагноз; подозрение на рассеянный склероз.

Взят биоптат кожи голени, из которого готовили два среза и окрашивали как в примере 1. На препаратах, ммпрегнированных серебром, выявляются лишь редкие с неровными контурами пучки аксонов, лишенные миелина и сопровождающиеся яимфомоноцитарными инфильтратами. По ходу крупных и мелких сосудов в дерме встречаются также очаги лимфо-моноцитарных периваскулярных инфильтратов. При окраске Суданом черным во всех частях дермы в нервных пучках миелиновые оболочки не выявляются. Найденные морфологические изменения позволяют диагносцировать ау гоиммунный демиелинизирующий процесс и подтвердить предполагаемый диагноз.

Пример 3. Больная С., 22 года, история болезни N 1004, Клинический диагноз: подозрение на рассеянный склероз.

Берут биоптат кожи плеча, мз scoToporo готовили срезы и окрашивали как в примере 1. На препаратах, импрегнированных серебром с докраской Г-Э, выявляются тонкие пучки нервных волокон с признаками фрагментации аксонов. Некоторая часть аксонов сильно истончена с варикозными расширениями по своему ходу. При окраске срезов Суданом черным миелиновые оболочки 8 этих пучках не выявляются, в части пучков видна многочисленная суданофильная зернистость (остатки продуктов распада миелина). На импрегнированных и

докрашенных Г-Э препаратах по ходу нервных пучков и сосудов дермы обнаруживаются лимфо-плазмоцитарные инфильтраты. Полученные данные однозначно свидетельствуют об аутоиммунном демиелинизирующем процессе и подтверждают диагноз.

Пример А. Больной Г., возраст 43 года, история болезни Nfe 626. Клинический диагноз полиневрит. Взят биоптат кожи голени, из которого готовили срезы и окрашивали как в примере 1. На импрегнированных серебром и докрашенных Г-Э препаратах кож встречаются лишь немногочисленные пучки с редкими тонкими аксонами. В остальных пучках акосоны не выявляются и среди шванновских клеток видны продукты зернистого распада. Рецепторные аппараты волосяных фолликулов находятся в состоянии деструктивных изменений. Только

0 в некоторых нервных пучках на препаратах, окрашенных Суданом черным, выявляются измененные с зазубренными краями короткие сегменты сохранившихся миелиновых оболочек, рядом с ними находится большое

5 число суданофильных гранул, что свидетельствует о продолжающемся распаде миелина. На гистологических препаратах, ммпрегнированных серебром и докрашенных Г-Э, по ходу нервных пучков среди продуктов распада рецепторных окончаний, а также вокруг сосудов обнаруживаются лимфо-моно- и плазмоцитарные инфильтраты. Полученные данные однозначно свидетельствуют о тяжелом, хроническом аутоиммун5 ном демиелинизирующем процессе.

Пример 5. Больная П., 52 лет, история болезни № 229. Клинический диагноз: подозрение на рассеяннь1й склероз. Брали биоптат кожи спины, из которого готовили

0 срезы и окрашивали как в примере 1. На препарате, окрашенном Суданом черным, непосредственно под эпидермисом и в глубоких слоях дермы встречаются многочисленные пучки интактных миелиновых

5 волокон. На препаратах, импрегнированных серебром и докрашенных Г-Э, хорошо выявляются мякотные и безмякотные аксоны и рецепторные аппараты волосяных фоликулов. Важной особенностью является

0 отсутствие каких-либо воспалительных инфильтратов. Полученные данные позволяют исключить у больного диагноз демиелинизирующего заболеван.ия, что подтвердилось в дальнейшем уточненным диагнозом - ди5 скогенный радикулит.

П р и м 6 р 6. Больная К., 34 лет, история болезни (Sb 228. Клинический диагноз: боковой амиотрофический склероз. Брали биоптат кожи спины, из которого готовили ср.езы V, окрашивали как в примере

1. На препарате, окрашенном Суданом черным, выявлялись лишь отдельные фрагменты миелиновых оболочек, в некоторых пучках они вообще отсутствовали. На препаратах, импрегнированных серебром и докрашенных Г-Э, встречались пучки истонченных, штопорообразно закрученных аксонов. Внутри пучков по ходу аксонов нередко были видны аргентофильные зерна и глыбки дегенерирующих волокон. Однако воспалительные инфильтраты во всех слоях биоптата кожи отсутствовали. Поскольку как известно в период ремиссии имеются в разной степени выраженности остатки воспалительных инфильтратов , то обнаруженные изменения в нервном аппарате ксжи позволяют исключить аутоиммунную природу заболевания. Эти изменения свидетельствуют о хроническом дистрофическом процессе, который может быть связан с повреждением самих нейронов, локализующихся в спинномозговых ганглиях, иннервирующих соответствующие участки кожи, либо сильным ущемлением спинномозговых корешков.

Таким образом, предлагаемый морфологический способ позволяет проводить

прижизненную диагностику аутоиммунного демиелинизирующего процесса. Кроме того, в отличие от известных методов, он обеспечивает возможность определения не

только периаксональной демиелинизации. но и более тяжелую форму деструктивных изменений нервного аппарата кожи, а именно уоллеровскую дегенерацию нервных волокон. Все зто в совокупности с оценкой

характера воспалительных инфильтратов позволяет идентифицировать не только стадию, степень, но и высоту заболевания.

Формула изобретения

Способ определения аутоиммунного процесса в организме человека путем выявления демиелинизации нервной ткани, о тличающийся тем, что, с целью прижизненного определения аутоиммунной демиелинизации, исследуют биоптат кожи пациента, и в случае обнаружения демиелинизации нервных волокон, сопровождающейся лимфомоноплазмацитарными и/или

лимфо-моноцитарными инфильтратами, устанавливают демиелинизирующий процесс аутоиммунной природы.

Изобретение относится медицине и может найти применение в клинике нервныхболезней, паталогоанатомической и судебно-медицинской практике. Цель изобретения - прижизненное определение аутоиммунной демиелинизации. Поставлен-- ная цель достигается тем, что у больного берут бмоптат кожи, готовят из него два гистологических среза, один из которых докрашивают Суданом черным, второй им- прегнируют серебром, докрашивают общегистологическими красителями, а по распаду : гиелиновых волокон, сопровождающемуся лимфо-моноплазмацитарными и/или лимфо-моноцитарнымй инфильтратами, .устанавливают демиелинизирующий процесс аутоиммунной природы.