Способ окраски нервной ткани на гистологическом препарате Советский патент 1986 года по МПК G01N1/30 A61B10/00 

« Изобретение относится а именно к гистохимии, и

применение при гистологическом исследовании срезов биологических тканей, содержащих миелиновые волокна.

Целью изобретения является прокрашивание клеточных элементов в демиелинизированной нервной ткани путем экспонирования биологического материала в растворе бихромата калия, в растворе осмиевой кислоты на бихромате калия в разработанных вре.манных интервалах.

Способ осуществляют следующим образом.

КусоЧки нервной ткани размером 2,5-3,5 мм фиксируют в 10%-ном растворе формалина в течение 12-48 ч и затем экспонируют в течение 45-50 ч

в 3%-ном растворе бихромата калия. Кусочки споласкивают в нескольких

порциях бихромата калия и помещают на 24-48 ч в 1%-ный раствор осмиевой кислоты на 3%-ном растворе бихромата калия.

Затем .образцы промывают в течение i 2-24 ч в проточной водопроводной воде.

Далее материал в зависимости от задач исследования либо подвергают резке на замораживающем микротоме, либо уплотняют в парафине или целлоидине. Полученные срезы докрашивают толуидиновым синим и исследуют светооптически.

Пример 1. Образцы нервной ткани от животных с демиелинизирующим заболеванием нервной системы разрезают на кусочки толщиной 3,5 мм, помещают на плотную бумагу с отверстиями (наподобие перфокарты) и опускаю-т в 10%-ный формалин на 24 ч-,

Экспонируют в течение 45 ч в 3%.ном растворе бихромата калия с ежедневной сменой раствора.

Снимают кусочки с бумаги и помещают в 1%-ный раствор осмиевой кислоты на 3%-ном растворе бихромата калия на 24 ч в плотно закрытые банки, обернутые темной бумагой. Раствор осмиевой кислоты сливают, образцы помещают в марлю, завязывают и промьгоают в проточной водопроводной воде в течение 12 ч. Затем материал помещают на 15 мин в дистиллированную воду и подвергают резке на замораживающем микротоме. Толщина получаемых срезов 10-15 мкм, а при резке на криокате - 3,5-5 мкм.

ним, дифференцируют в 96 -ном спирте, просветляют в эвкалиптовом масле, промывают в ксилоле и заключают в бальзам.

Полученные препараты исследуют под микроскопом при максимальных увеличениях с использованием иммерсии.

На препаратах видны ярко-синие ядра гематогенных макрофагов с бледно-голубой цитоплазмой, нейтрофильные гранулоциты, лимфоциты, глиальные клетки среди фрагментов дезинтегри5 рованного миелина в виде отчетливопрослеживаемого черного цвета осмиофильной зернистости. В отдельных клетках хорошо виден фагоцитоз продуктов распада миелина.

0 Пример 2. Кусочки нервной ткани размером 2,5 мм обрабатывают аналогично примеру 1, но время экспозиции в растворе бихромата калия 47 ч, а в растворе осмиевой кисло5 ты - 35 .4. После этого материал обезвоживают этиловым спиртом восходящей крепости (70, ВО, 90, 96, ЮО). Время экспозиции в каждом спирте

1сут. Затем материал помещают (не 0 менее 2 сут) в смесь, состоящую из

40 мг сухого целлоидина, растворенного в 100 мл абсолютного спирта, 100 мл -эфира и 200 г касторового масла,

Экспонирование по 45 мин в трех порциях хлороформа. Далее образцы вьздерживают в течение не более 12 ч в смеси равных частей парафина и хлороформа и экспонируют при 56° С в термостате по 1,5 ч в двух порциях парафина с последующей заливкой в парафин.

Парафиновые срезы депарафинируют и докращивают толуидиновым синим. - На препаратах видны клеточные элементы (гематогенные и глиальные), среди которых локализуются продукты распада миелина.

Пример 3. Кусочки нервной 0 ткани размером 3,5 мм после фиксации и экспонирования в бихромате калия в течение 50 ч, в осмиевой кислоте в течение 48 ч и промывки в проточной водопроводной воде подвергают 5 обезвоживанию в спиртах восходящей крепости: в 1 ч, в

2ч, в абсолютном спирте 2,5 ч, в спирт-эфире 1,5 ч. После этого матек медицине, может найти 1273769 Полученные срезы докрашивают на предметном стекле толуидиновым сириал экспонируют в целлоидинах возрастающей густоты (целлоидины 1, 2, 3) по 3-5 сут, периодически встряхивая.

Образцы нервной ткани в загустевтем целлоидине заливают в чашки Петри и после его затвердевания наклеивают на деревянные блоки, которые хранят в 7и-ном спирте.

Через сутки материал подвергают резкЁ на санном микротоме (толщина среза 4,5-5 мкм) и докрашивают дел.1 лоидиновые срезы толуидиновым синим.

При заливке -материала в целлоидин достигается наилучшее качество докрашенных гистологических препаратов: видны ярко окрашенные ядра гематогенных макрофагов и глиальньпс клеток с блеДно-голубой цитоплазмой и осмиефильная,черного цвета, зернистость.

Способ позволяет выявить одновременно с продуктами распада миелина клеточные элементы (лимфоциты, гематогенные макрофаги, нейтрофилоциты, эозинофилы, олигодендроциты, астроциты и микроглию), что является необходимым для излучения патогенеза демиелинизирующих заболеваний нервной системы.

Способ значительно сокращает сро ки диагностики демиелинизации (при целлоидиновой проводке в 2 раза, при парафиновой в 5 раз, при полуIчении замороженных срезов более чем в 10 раз).

Способ может -быть использован для изучения патоморфологии различных форм рассеяного склероза, а также при исследовании патологических изменений в нервной системе на экспериментальных моделях профессиональных заболеваний (отравления солями свинца, бария и др.).

Формула изобретения

Способ окраски нервной ткани на гистологическом препарате путем ее обработки бихроматом калия и осмиевой кислотой с последующей докраской в красителе, отличающийся тем, что, с целью прокрашивания kfie точных элементов в демиелинизированной нервной ткани, обработку бихроматом калия проводят в течение 45-50 ч, ав осмиевой кислоте 24-48 ч, при этом докраску проводят толуидиновым синим.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гистохимии, может быть прймеТнено при гистологическом исследовании срезов биологических тканей, содержащих миелиновые волокна. Цель изобретения - прокрашивание клеточных элементов в демиелинизированной ткани -за счет экспонирования биологического материала в растворе бихромата калия в разра- ботанных временных интервалах. Кусочки нервной ткани размером 2,53,5 мм фиксируют в 10%-ном растворе формалина 12-48 ч, затем экспо1шруют 45-50 ч в 3%-ном растворе бихромата калия. Кусочки споласкивают в нескольких порциях бихромата калия и помещают на 24-48 ч в 1%-ный раствор осмиевой кислоты на 3%-ном растворе бикромата калия. Затем образцы промывают в течение 12-24 ч в водопро& водной воде. Далее материал в зависимости от задач исследования подвергают резке на замораживающем микротоме либо уплотняют в парафине или целлоидине. Срезы докрашивают толуидиновым синим и исследуют светооптически.