Способ измерения скорости диффузии биологических клеток поликомпонентного раствора в моносистеме Советский патент 1992 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии.

Цель изобретения - повышение точности способа путем одновременной фиксации скоростей диффузии разнотипных компонентов.

Способ осуществляют следующим образом.

Предварительно готовят измерительную трубку и две емкости.

Производят забор в емкость пробы прликомпонентного раствора, не обязательно содержащего цветоконтрастныё объекты. Это может быть кровь, плазма, желчь, желудочный сок и т.д.

Производят забор из емкости пробы раствора в измерительную трубку до нулевой отметки (на наружной поверхности трубки.имеется одна разграничительная

метка). В емкости должна быть оставлена часть раствора.

Трубку на период экспозиции устанавливают Г1од любым углом к горизонту в зависимости от применяемой той или иной движущей силы.

По окончании экспозиции производят извлечение фиксированной (т.е. до уровня разграничительной метки) части раствора из трубки в емкость. При этом извлечение должно быть произведено только из одной, но любой части трубки без механического перемешивания смежных частей раствора.

Раствор в емкости, а также оставшуюся часть раствора взбалтывают.

Необходимое количество раствора попарно забирают (повторно) из емкости для измерения концентрации разнотипных обьектов, например клеток, молекул белков, жиров, углеводов и т.д.

Измеряют парные концентрации соответственно для каждого типа микрообъектов, используя формулу, или рассчитывают скорость и направление каждого типа микрообъектов в отдельности. Число таких типов для измерения их взаимоперемещения в одной трубке не ограничено.

Направление и величину перемещения компонентов рассчитывают по формуле

±1Сс-Со) о,

где S - длина пути перемещения в трубке компонентов раствора определенного типа, м, за время экспозиции;

1 - длина части трубки, м;

С - концентрация компонентов определенного типа, измеренная в пробе, извлеченной из первой части трубки;

Со - концентрация компонентов определённого типа, измеренная в исходной пробе раствора.

П р им ер 1. Диффузионный анализ раствора в моносистеме применен к пробам крови, взятым у здоровых и больных лиц. Измерены одномоментные скорости седиментации эритроцитов (визуально), а также перемещения лейкоцитов и их фракций в цельной(несепарированной)крови в одной измерительной трубке.

Последовательность предварительных и основных технологических операций способа следующая.

Предварительно готовят стабилизатор крови по прописи:

2,8-ный раствор поливинилового спирта (мол.

вес 60000), мкл5,0

Цитрат кислый, г0,16

Глюкоза, г0,16

Вода дистиллированная,

мклДо 10,0

Стерильно

Одновременно готовят три емкости флаконы А, Б-и В.

Предварительно готовят измерительную стеклянную трубку, нижний конец которой запаян и общая длина канала которой равна 120 мм. Отметка О нанесена у верхнего (открытого) конца трубки. Разграничительная метка делит длину канала трубки на две части (объема): верхнюю длиной 50 мм и нижнюю длиной 70 мм. Внутренний диаметр трубки 7 мм. Размеры длин верхней и нижней частей трубки обоснованы следующим: предварительные контрольные измерения показали, что скорость оседания эритроцитов не превышает 75 мм/ч, а скорость перемещения лейкоцитов вверх- 55 мм/ч.

Шприцем берут пробу крови из вены

пациента - 5,0 мкл и помещают ее в отдельную предварительно приготовленную емкость - флакон А, куда налит стабилизатор

крови в объеме 1,7 мкл. Полученную смесь в объеме 6,7 мкл (соотношение 3:1) взбалтывают до получения равномерной взвеси клеток крови.

Пробу крови из флакона А в объеме 5,7

мкл выливают в измерительную трубку до нулевой отметки. Трубку устанавливают вертикально при комнатной температуре на период экспозиции - 1 ч. Диффузионный процесс идет под воздействием градиента

сил гравитации.

По окончании экспозиции (1 ч) визуально фиксируют CKOpocfb оседания эритроцитов по известной методике.

Одновременно определяют направление и скорость перемещения лейкоцитов. Для этого, избегая механического перемешивания, шприцем с иглой извлекают пробу крови полностью из верхнего объема трубки и выливают ее в предварительно приготовленную емкость - флакон Б, а пробу крови из нижнего объема трубки - во флакон В,

Пробы крови во флаконах Б и В взбалтывают до получения равномерной взвеси клеток.

Из каждого флакона (Б и В) берут необходимое количество крови для измерения концентрации лейкоцитов и подсчета дифференциальной формулы, концентрации фракции.

Определяют направление движения (вверх или вниз) лейкоцитов в целом и каждой из их фракций. Для этого сравнивают полученные концентрации однотипных клеток из флаконов Б и В. Например, если концентрация клеток во флаконе Б больше их концентрации во флаконе В, следовательно, клетки перемещаются вверх, и наоборот.

Рассчитывают длину пути и скорость диффузии клеток по формуле

:о ±|(с-о)

Со

Параметры трубки: мм; мм.

Исследуемый раствор - кровь.

Экспозиция - 1 ч.

Требуется определить в одной трубке величину СОЭ, направление и скорость лейкоцитов, направление и скорость сегментоядерных нейтрофилов.

По окончании экспозиции величину СОЭ определяют визуально по известной методике. Получают (например) 40 мм/ч.

Определяют парные концентрации лейкоцитов: Со 10,9x10 шт./л; С 15x10 шт./л.

По формуле .БООВМО-ЩЭ.Ю),, ,gg

10.9

Определяют парные концентрации Снейтрофилов: ,5x10 шт./л; ,0x10

шт./л.

По формуле

50(2,0 ..5 10)

-10 мм.

2,5 10

Вывод: СОЭ - 40 мм/ч;

скорость лейкоцитов +18 мм/ч (вверх);

скорость С-нёйтрофилов -10 мм/ч (вниз)..

Применение предлагаемого способа позволяет повысить точность измерения скорости диффузии биологических клеток поликомпонентного раствора в моносистёме за счет одновременной фиксации скорости диффузии разнотипных компонентов.

Формула изобретения

Способ измерения скорости диффузии биологических клеток поликомпонентного раствора в моносистеме, включающий помещение исследуемого раствора в измерительную Tpiy6Ky с постоянной площадью

поперечного сечения, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа путем одновременнойфиксации скоростей диффузии разнотипных компонентов,

пробу раствора разделяют в измерительной трубке на две смежно-контактные части, после экспозиции осуществляют забор пробы из одной части трубки, перемешивают и измеряют в ней концентрацию исследуемых

компонентов, измеряют длину части трубки, из которой осуществлен забор пробы, измеряют концентрацию компонентов в неизвлеченной пробе и ог1ределяют скорость диффузии компонентов за время экспозиции по формуле

о- |(с-Со;

Со

где S - скорость диффузии компонентов за время экспозиции;

I - длина части трубки, из которой осуществлен забор раствора;

С - концентрация компонента в забранной пробе;

Со.- концентрация компонента в неизвлеченной пробе.

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии. Цель изобретения - повышение точности способа путем одновременной фиксации скорости диффузии разнотипных компонентов. Помещают исследуемый раствор в измерительную трубку с постоянной площадью поперечного сечения. Пробу раствора разделяют в измерительной трубке на две смежно"КонтактнЬ1е части, извлекают после акспозиции пробу из одной части трубки и перемешивают. После этого измеряют в ней и в остатке пробь! концентрацию исследуемых компонентрв и по,формуле определяют скорость диффузии компонентов за время экспозиции. Применение способа позволяет повысить точность измерения скорости диффузии биологических клетОк поликомпонентного раствора в моносистеме по сравнению с прототипом за счет одновременной фиксации скорости диффузии разнотипных компонентов.