Способ прогнозирования гнойно-воспалительного осложнения у хирургических больных Советский патент 1993 года по МПК G01N33/53 

жившейся ситуации для данного больного с использованием для этой цели интегрального иммунологического способа определения адгезивных свойств лейкоцитов (впервые разработанного в нашей лаборатории), включающего адгезию лейкоцитами эритроцитов, фагоцитов, прилипание клеток к стеклу, антигеннеспецифическое разрушение нейтрофильных лейкоцитов при определении всех этих показателей одномоментно и выражающихся суммарным индексом адгезии (НА), который в данном случае имеет качественное значение и при наличии тенденции к снижению относительно исходного и предыдущего значения в любой точке временной последовательности послеоперационного периода расценивается как показатель развития гнойно-воспалительного Осложнения, развивающегося как правило через 18-20 часов от начала снижения ИА.

Предлагаемый способ интегральной оценки адгезионных свойств лейкоцитов заключается в следующем.

В центрифужную пробирку помещают 0,1 мл чистой взвеси лейкоцитов, состоящих из нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов и др. клеток, с содержанием 5 ± 0,5 тыс. клеток в 1 мм и 0,1 мл эритроцитов барана с содержанием 50 ±1,0 тыс.клеток. Соотношение 1:10. Клетки подсчитывают аппаратным способом (контрольная проба). Взвесь клеток инкубируют в течение 5 мин при 37°С на водяной бане, центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин и выдерживают в течение 60 мин при 12°С. За это время в клетках заканчиваются все биологические процессы. Затем клетки ресуспендируют и вновь подсчитывают (опытная проба). Полученное значение счета опытной пробы вычитают из значения счета контрольной пробы и полученную разницу выражают в процентах по отношению к контрольной пробе.

ИА - Ц -100% ,

где ИА - индекс адгезии лейкоцитов; К - контрольная проба; Оп - опытная проба.

Разница между контрольной и опытной пробами представляет собой 4-х сис- темный интегральный показатель, который включает в себя такие процессы как: адгезия, фагоцитоз, прилипание, анти- геннеспецифичесчкое повреждение грану- лоцитов, накладывающиеся во время реакции лейкоцитов с эритроцитами один

на другой и определяемый в виде суммарного индекса адгезии (ИА).

В зависимости от происходящих в организме человека изменений в норме и патологии, различают два основных вида иммунологических сдвигов, в положительную или отрицательную сторону. При антигеннес- пецифическом повреждении лейкоцитов преобладает отрицательная реакция, когда

опыт превышает контроль. При адгезии лейкоцитами эритроцитов, фагоцитозе, прилипания лейкоцитов к стенкам пробирок - преобладает положительная реакция. В этом случае контроль превышает опыт,

в зависимости от конкретной иммуно- логической ситуации, наблюдаемой у больного в динамике в до- и послеоперационном периоде, а также у практически здоровых людей и доноров станции переливания крови, значения показателей распределяются следующим образом:

I. контроль меньше опыта - отрицательная реакция; превалирует процесс антигеннеспецифического разрушения гранулоцитов, наблюдается у доноров,

II. контроль превышает опыт - положительная реакция; превалируют процессы адгезии лейкоцитами эритроцитов, фагоцитоз, прилипание клеток к стеклу; наблюда- ются у больных с патологией легких (рак, хронические заболевания), .

lit. контроль равен опыту - процессы уравновешены; наблюдаются у практически здоровых людей.

ИА в норме и патологии в абсолютных значениях распределяются следующим образом:

у доноров-/-/11%-/-/3%;

у практически здоровых людей - А/ 3% - /+/ 3%;

у больных с

патологией легких - раковые больные - /+/ 3% - /+/ 10%;

- хронические забо- левания легких - /+ / 10% - /+/ 30%.

Отрицательные значения ИА свидетельствуют о том, что в реакции взаимодействия лейкоцитов с эритроцитами барана преобладает процесс антигеннеспецифического повреждения нейтрофильных лейкоцитов.

Положительные, значения ИА свидетельствуют о преобладании процессов адгезии лейкоцитами бараньих эритроцитов, фагоцитоза и прилипания клеток к поверх- ности пробирок.

У практически здоровых людей процессом антигеннеспецифического повреждения гранулоцитов, адгезии, фагоцитоза и прилипания - уравновешены.

Схема индивидуального прогнозирования послеоперационных гнойно-воспалительных осложнений показана на фиг.

По оси ординат графика откладывают Значения ИА здоровых и больных людей. По оси абсцисс - время забора крови в сутках и часах до- и послеоперационном периоде.

Пример. Точки la, б, в, г нанесенные на ось ординат за сутки до начала оперативного вмешательства свидетельствуют о различных вариантах исходных уровней состояния иммунологической реактивности Организма больных.

; Затем наносят значения ИА, получен- (Ные за 15-20 мин до начала оперативного вмешательства. Эти значения имеют тенденцию к резкому снижению по сравнению е исходными данными. Процесс снижения исходных значений ИА расценивается как стрессовая реакция организма, возникающая под воздействием психо-эмоциональ- ных факторов на предстоящую операцию (на фиг. отрезки la, б, в, г - 2).

В конце операции отмечается небольшой подъем показателей ИА (отрезок 2-3). . В первые сутки послеоперационного периода значения ИА резко возрастают и в Некоторых случаях достигают исходных по- ||азателей превосходят их (отрезок 3-4).

Собственно прогнозирование гнойно- воспалительных осложнений начинается с того момента когда, в первые, или на вторые, или на третьи, или на четвертые и т.д. 4утки (точки 4, 6, 8, 10...) послеоперационного периода отмечается резкое снижение по- ||азателей ИА (отрезки 4-5, 6-7, 8-9, 10-11) Относительно их исходных значений (la, б, в, г) или предыдущих максимальных значений (Гочки4, 6, 8, 10).

Таким образом диагностика гнойных рсложнений осуществляется в динамике г|ри сравнении показателей ИА по вертика- л|и и горизонтали координатной сетки осей ёрдинат и абсцисс.

При установлении факта снижения по- Цазателей ИА в определенный временной (фомент послеоперационного периода, Ннойно-воспзлительные осложнения развиваются как правило через 18-20 ч.

П р и м е р 1. Больной И., 42 года. Дз: Хронический абсцесс.

Кровь у больного забирали из локтевой йены в количестве 4-5 мл.

Для стабилизации крови применяли ге- г1арин из расчета 25 ед на 1 мл. j Затем кровь отстаивали при комнатной т|емпературе 20-25°С в течение 40-60 мин. Йерхний слой плазмы, содержащий лейкоциты, переносили в чистую пробирку.

Для отсасывания и переноса клеток из одной пробирки в другую использовали шприц с иглой 130 мм и диаметром отверстия канала 0,6 мм.

Полученную взвесь клеток разливали в центрифужные пробирки 1 мл и центрифугировали в течение 10 мин при 1000 об/мин. После окончания центрифугирования верхний слой плазмы отсасывали до плотного

осадка и затем осторожно ресуспендирова- ли. Небольшую примесь эритроцитов удаляли осмотическим шоком. Для этого в пробирку добавляли 0,3 мл дистиллированной вбды на 15 сек и поперечными колебаниями пробирки обеспечивали полный лизис эритроцитов. Время лизиса эритроцитов строго выдерживали. По прошествии 15 сек быстро добавляли 1 мл 0,85%-ного раствора хлористого натрия или среды 199.

Полученную взвесь лейкоцитов дважды отмывали центрифугированием по 10 мин при 1000 об/мин. Клетки подсчитывали аппаратным способом.

Подсчет клеток на аппарате типа Пикоскель: С помощью микропипетки 0,02 мл взвеси клеток переносили в стаканчик с 12,5 мл электролита (0,85%-ный раствор хл, на- трия)и наклонными движениями перемешивают содержимое. После этого флакончик

устанавливают в аппарат. Для подсчета лейкоцитов используют измерительный капилляр диаметром 100 мкм. Режим подсчета клеток на аппарате - для лейкоцитов, устанавливают путем нажатия соответствующей клавиши.

Измерения проводят не менее 3-х раз, после чего выводят среднее арифметическое. Полученное значение счета умножают на 100 и получают количество лейкоцитов в

1 мм3. Например: На табло аппарата или после усреднения получено значение счета равное 50. Это значение умножают на 100 и получают 5000 клеток и в частности лейкоцитов в 1 мм .

Затем готовят стандартные количества эритроцитов (50 ±1,0 тыс. в 1 мм3) и лейкоцитов (5 ± 0,5 тыс. в 1 мм3).

Подсчет эритроцитов в данном случае

проводится в режиме работы аппарата Для лейкоцитов.

Способ определения адгезивных свойств лейкоцитов осуществляется следующим образом: 0,1 мл эритроцитов барана

с содержанием 50 тыс. клеток с 1 мм3 помещают в центрифужную пробирку. В эту же пробирку добавляют 0,1 мл лейкоцитов с содержанием 5 тыс. клеток в 1 мм3. Взвесь клеток осторожно перемешивают путем

вращения пробирки вокруг ее продольной оси.

С целью повышения достоверности результатов готовили не менее 3 параллельных проб.

Из каждой пробы по 0,02 мл взвеси клеток переносят в три флакона с 12,5 мл электролита и подсчитывают, на аппарате Пикоскель в режиме работы аппарата для подсчета лейкоцитов (контрольная проба). Полученные значения измерений в трех пробах усредняют. Затем пробы выдерживают на водяной бане 5 мин при 37°С. После этого центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин и инкубируют в течение 60 мин при 12°С. Осадок клеток осторожно ресуспенди- руют и подсчитывают на аппарате Пикоскель (опытная проба) в том же режиме.

Полученное значение счета опытной пробы вычитают из значения счета контрольной пробы и полученную разницу выражают в процентах по отношению к контрольной пробе.

Все математические и статистические расчеты производились на ЭВМ СМ 1420 отечественного производства по специально составленной для этих целей программе и распечатывались в виде бланка с указанием паспортных данных больного, диагноза и полученных результатов исследования.

По мере накопления данных в динамике ЭВМ изображает их в виде графика и распечатывает на бланке.

Динамика показателей ИА у больного И.. %:

за сутки до операции18,6 перед началом операции 3,4 в конце операции 13,1 в первые сутки послеоперационного периода 15,9 на 6-е сутки 3,5 на 8-е сутки . 1,8 Интервал между 1-ыми и 6-ыми сутками послеоперационного периода характеризуется резким снижением ИА. Снижение составило относительно исходного уровня - 81,2%.

Осложнения гнойно-воспалительного характера у больного начались на 2-е сутки послеоперационного периода и достигли своего наивысшего развития к 6-ым суткам. В это время у больного появились температура 38°С, недомогание, слабость. В периферической крови обнаружены палочкоядерные нейтрофильные лейкоциты. СОЭ увеличилась до 51 мм/ч,

П р и м е р 2. Больной Г., 55 лет. Дз: Плоскоклеточный неороговева-ющий рак нижней доли левого легкого.

Динамика показателей ИА у больного Г., %: за сутки до операции5,4 перед началом операции 2,9 в конце операции 8,4 на вторые сутки послеоперационного периода 19,2 на пятые 5,6 Интервал между 2-ыми и 5-ыми сутками послеоперационного периода у больного характеризуется резким снижением ИА. Снижение составило относительно предыдущего уровня - 70,8%.

Гнойно-воспалительные осложнения начались на 3-й сутки послеоперационного периода и характеризовались подъемом температуры до 37,8°С, увеличением СОЭ до 47 мм/ч, появлением палочкоядерных нейтрофильных лейкоцитов - 7%.

П р и м е р 3, Больной С., 72 года. Дз: Кавернозный рак правого легкого.

Динамика показателей ИА у больного С., %:

за сутки до операции3,8 в первые сутки после- операционного периода 4,7 на вторые стуки 4,7 на восьмые 11,3 Резких снижений ИА на протяжении 8- ми суток послеоперационного периода у больного не отмечается.

Гнойно-воспалительное осложнение не развилось.

П р и м е р 4. Больной Т. 23 года. Дз: Эхинококкоз легких.

Динамика показателей ИА у больного Т., %: за сутки до операции1,5 в первые сутки послеоперационного периода 6,7 на третьи сутки /-/1,2 на шестые сутки 7,0 Интервал значений ИА между 1-ыми и 3-ми сутками послеоперационного периода резко снижен - до 117,9% относительно предыдущего значения (6,7).

Гнойно-воспалительное осложнение развивалось на 2-е сутки послеоперационного периода и характеризовалось подъемом температуры до 38°С, появлением в перифе- рической крови палочкоядерных лейкоцитов, увеличением СОЭ до 50 мм/час.

Таким образом, предлагаемый способ прогнозирования гнойно-воспалительных осложнений позволяет с высокой степенью надежности, в отличие от известного способа оценки степени риска гнойных осложнений, прогнозировать послеоперационные гнойно-воспалительные осложнения у отдельно взятых больных.

Использование в предлагаемом способе интегрального иммунологического теста определения адгезивных свойств лейкоцитов, включающего такие одновременно протекающие процессы как: адгезия лейкоцитами ритроцитов, феномен антигеннеспецифиче- ского повреждения нейтрофильных лейкоцитов, фагоцитоз, прилипание клеток к стеклу пробирок и выражающихся через суммарный индекс адгезии (ИА), определяемого одномо- ентно, позволяет упростить и сократить время диагностики гнойно-воспалительных Осложнений.

Одномоментное определение в предлагаемом спосоое ведущих иммунологических тестов путем автоматизированных вычислений полученных значений счета контроль- Ной и опытной проб, минуя промежуточные подсчеты клеток визуальным способом на предметных стеклах, как это происходит в известном способе, также упрощает и сокращает время способа.

Использование отечественной ЭВМ СМ 1420 со специально составленными программами и электронных счетчиков клеток тфта Пикоскель ПС-4, венгерской фирмы Медикор, позволяет в автоматическом ре- ж:име следить за состоянием больного и своевременно сообщать об изменениях в иймунном статусе больного, что обеспечи- вфет точную и надежную диагностику гнойно-воспалительных осложнений.

Способ поясняется таблицей и чертежом, где

I - доноры станции переливания крови

II - практически здоровые люди

III - больные с раковыми заболеваниями легких

IV - больные с хроническими заболеваниями легких

сдо/оп - 1-е сутки до операции до/on - до операции за 15-20 мин п/оп - после окончания операции Ic п/оп - 1-е сутки послеоперационного периода

2,3,4,5... - и т.д. сутки послеоперационного периода

Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я

Способ прогнозирования гнойно-воспалительного осложнения у хирургических больных с заболеванием легких путем иммунологического обследования больного, отличающийся тем. что, с целью повышения точности прогнозирования и упрощения способа, в динамике определяют показатели адгезии лейкоцитами эритроцитов, адгезии клеток к стеклу, фагоцитоза и антигеннеспецифического разрушения гра- нулоцитов за сутки за 15-20 мин до операции, в конце операции и далее в первые, вторые и третьи сутки послеоперационного периода высчитывают суммарный индекс адгезии и при снижении его относительно исходного или предыдущего значения прогнозируют гнойно-воспалительное осложнение.

Иммунологические показатели прогнозирования послеоперационных осложнений у больных с хроническими заболеваниями легких

l - группа тестов свысокими показателями, I - с низкими ,

чНф - нейтрофильные лейкоциты,

Лф - лимфоциты,

Е-РОК - Е-розеткообразующие клетки (Лф с 3-мя и более адгезированными

эритроцитами),

IgM - иммуноглобулин,

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы