Способ определения нарушений полимеризации фибрин-мономера в плазме крови больных Советский патент 1992 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к гемостазу, и может быть использовано для исследования полимеризацйонной фазы свертывания крови при диагностике геморрагических диатезов, тромбозов, ДВС-синдромов, системных васкулитов и др.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет возможности выявления дисфибриногенемии и ингибитора полимеризации.

Способ осуществляютследующим образом.

Набор крови производят из локтевой вены в силиконированную пробирку, где находится 1 мл 3,8%-ного раствора цитрата натрия, и набирают кровь до метки 10 мл. Богатую тромбоцитами плазму получают путем центрифугирования крови в течение 5 мин при 100 об/мин в центрифуге 3 УХЛ 4.2 ОПн. Бедную тромбоцитами плазму получают путем центрифугирования богатой тромбоцитами плазмы в пластиковых пробирках при 3000 об/мин в течение 15-20 мин на цетрифуге 8УХЛ 4.2 ОПн.

Получают растворимый фибрин-мономер из плазмы здорового человека. Используют 0,075 М боратный буфер, состоящий из 525 мл раствора тетрабората натрия (19,1 г на 1 л дистиллированной воды) и 450 мл 0,1 н. соляной кислоты (рН 7,6). Используют ацетатный буфер, состоящий из 400 мл раствора ацетата натрия (2,7 г на 1 л дистиллированной воды) и 100 мл 0.02 М уксусной кислоты (рН 5,2). к которому добавляют мочевину до концентрации 10%.

К 100 мл цитратной плазмы здорового человека добавляют 0,46 г ЗДТА и 10 г мочевины. Мешают стеклянной палочкой до полного .растворения.

К смеси добавляют раствор тромбина 100 мгна 10 мл дистиллированной воды и оставляют смесь при 37С на 30 мин.

К смеси добавляют 900 мл раствора следующего состава: 720 мл 0,14 М раствора хлорида натрия и 180 мл 0,076 М боратного буфера (рН 7,6).

После разбавления плазмы оставляют ее при 37С на 2 ч.

Образовавшийся сгусток наматывают на стеклянную палочку, удаляют избыток жидкости и осушивают о фильтровальную бумагу, затем промывают 0,14 М раствором хлорида натрия и дистиллированной водой.

Помещают сгусток в 70 мл 10%-ного раствора мочевины на ацетатном буфере (рН 5,2). Растворяют на магнитной мешалке до полного растворения.

Фильтруют раствор и разбавляют боратным буфером (600 мл), оставляют при 37°С на 1 ч.

Образовавшийся гель помещают на водяную баню при А2°С ча 80 мин.

Сгусток собирают, отмывают, затем растворяют в 50 мл 10% мочевины на ацетатном буфере.

Разбавл,яют раствор 500 мл боратного буфера, выдерживают при 37°С 2 ч.

Собирают сгусток, отмывают и растворяют в 50 мл 10% мочевины на ацетатном буфере.

Определяют концентрацию белка при 280 нм, для фибрин-мономера. 1 мг/мл равно 1,56.

Порцию полученного раствора фибринмономера разбавляют в 2,4, 8 и т.д. раз 10% мочевиной на ацетатном буфере и определяют время образования фибринового сгустка в экспериментальной системе: 0,1 мл боратного буфера +0,1 мл фибрин-мономера. Концентрация фибрин-мономера, обеспечивающая полимеризацию за 18-20 с рабочая.

Ход определения. Берут 0,1 мл рабочего раствора фибрин-мономера и добавляют к нему 0,1 мл исследуемой плазмы, определяют скорость полимеризации фибрин-мономера. За контроль принимают скорость полимеризации фибрин-мономера при добавлении плазмы здорового человека. Норма 18-20 м. При удлинении скорости полимеризации ставят диагноз наличия ингибитора полимеризации в плазме больного, при отсутствии удлинения скорости полимеризации и наличия нарушений полимеризационной фазы сверЫвания крови ставят диагноз дисфибриногенемии.

Обследовано предложенным Ьпособом 170 человек с нарушениями в полимеризационной фазе свертывания крови. V 124 больных выявлен ингибитор полимеризация фибрин-мономера, у 4& - дисфибриногенемия.

П р и м е р 1. Больная Т. Г., 24 лет поступила на обследование по поводу частых носовых кровотечений, синячковостй, которые впервые появились 6 мес. назад. Из анамнеза стало известно, что год назад больная перенесла вирусный гепатит. При обследовании системы гемостаза найдено .

ТестыБК

Тромбиновое время, с20 15

0 Анцистродоновое время, с 52 30

Анцистроновое время, с44 25

Полимеризация фибрина

по методу Бышевского100 37

Полимеризация фибрина 5 по предлагаемому способу 19 18

Наличие нарушений в полимеризационной фазе свертывания крови у данной больной (гипокоагуляция по тромбиновому, анцистроновому, астроновому временам, 0 удлинение полимеризации по методу Бышевского) и отсутствие нарушения по заявленному способу говорит о наличии у больной дисфибриногенемии, возможно печеночного генеза и требует медикаментоз5 ной терапии гепатопротекторами.

П р и м е р 2. Больной М. А,, 50 лет. Диагноз: геморрагический васкулит. В анализах системы гемостаза.

ТестыБК

0- Тромбиновое время, с1815

Анцистродоновое время, с 4025

Астроновое время, с5827

Полимеризация фибрина

по методу Вышевского 6025/

5 Наличие гипокоагуляции по тромбиновому, анцистродоновому, астроновому временам, удлинение времени полимеризации по методу Бышевского с одновременным удлинением времени полимеризации фибрина по заявленному способу говорит о наличии ингибитора полимеризации в плазме больного. В качестве лечения данному больному можно рекомендовать этапный плазмофорез, удаляющий ингибиторы полимеризации из крови.

Эффективность данного способа состоит в том, что он позволяет выявить наруи ения полимеризации фибрина, а следовательно повысить точность диагностики таких заболеваний как геморрагический диатез, тромбоз, ДВС-синдром, системные васкулиты и др.

Формула изобретения

Способ определения нарушений полимеризации фибрин-мономера в плазме крови больных путем использования растворимого фибрин-мономера, полученного путем добавления буферного раствора и тромбина к плазме крови и добавления раствора, приводящего к полимеризации фиб5 17128736

рин-мономера с последующим определени-качестве раствора добавляют исследуемую

ем времени образования фибринового cry-плазму больного и при увеличении времени

стка. отличающийся тем, что, с цельюобразования фибринового сгустка выявляповышения точности способа за счет воз-ют наличие ингибитора полимеризации

можности выявления дисфибриногенемии и5 фибрин-мономера, а при стабилизации поингибитора полимеризации, используютказателя относительно контроля определяфибрин-мономера здорового человека, а 3ют дисбифриногенемию.

Изобретение относится к медицине, в частности к гемостазу, и может быть использован для исследования полимеризацион- ной фазы свертывания крови при диагностике геморрагических диатезов, тромбозов. ДВС-синдромов, системных васкулитов. Целью изобретения является повышение точности способа. Для этого при нарушении полимеризации фибрин-мономера в качестве жидкости, приводящей к полимеризации, используют плазму больного, которую добавляют к растворимому фибрин-мономеру Здорового и при удлинении скорости полимеризации ставят диагноз наличия ингибитора полимеризации, а при отсутствии удлинения-дисфибриногенемии.