Способ разделения гемоглобина крови на гем и глобин Советский патент 1992 года по МПК A61K37/14 A61K35/14 A61K35/18 A61K31/40 

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской промышленности, и касается способа разделения гемоглобина крови на гем и глобин.

Цель изобретения - повышение концентрации тема и глобина.

Способ осуществляется путем суспен- дирования клеток эритроцитов, отделенных от плазмы, в растворе кислоты, где гемоглобин диссоциируют на гем и глобин, из этого раствора гем осаждают водным раствором карбоксиметиллцеллюлозы, а глобин остается в растворе.

Пример.100 г фракции эритроцитов, отделенных от плазмы, содержащей гемоглобин, причем общее содержание белка составляет 350 мг/г веса, разбавляют в 200 г воды и рН раствора доводят до 1,5 путем добавления 1,0 соляной кислоты. К данному раствору прибавляют 1,5%-ный раствор карбоксиметилцеллюлозы в воде в количестве, дающем массовое соотношение карбоксиметилцеллюлозы к белку, равное

около 1:10. Прибавление карбоксиметилцеллюлозы повышает величину рН, и путем прибавления гидроокиси натрия рН доводят до 2,4 Центрифугирование с силой, соответствующей 8000 д, в течение 15 мин приводит к получению 70% общего белка в растворе, который имеет концентрацию белка 4,0%. Используя силу центрифугирования, соответствующую 10000 д. в течение 30 мин выход белка можно повысить до 85%. При использовании силы центрифугирования ЮОООд содержание железа осадка составляет 1,8% и содержание белка осадка составляет 75%.

Первоначальное количество белка и железа 35 и 0,158 г соответственно. На сухой основе общее количество белка и железа в теме состаляет 5,25 и 0,126 г соответственно. Общее количеоство карбоксиметилцеллюлозы составляет 3,5 г главным образом в фракции тема.

П р и м е р 2. 100 г эритроцитов (300 мг белка/г), отделенных от плазмы, разбавлясо

с

-ч

со го со

О

ON

OJ

ют 500 г воды, рН раствора доводят до 1,4 с помощью 1М водного раствора соляной кислоты и добавляют 2,010 г 0,2%-ного водного раствора карбоксимети л целлюлозы (класс замещения по крайней мере 1,1, весовое соотношение карбоксиметилцеллюлозы к белку составляет около 1:75), рН доводят до 2,4 и смеси позволяют отстояться в течение 15 мин. Осажденный комплекс гем-карбоксиме- тилцеллюлоза отделяют от белкового раствора центрифугированием (2x1 ч, 15000д). Результаты опытов приведены в табл.1 и 2.

Первоначальное количество белка и железа составляет 30 и 0,135 соответственно. Количество белка и железа после второго центрифугирования в фракции гема составляет 1,5 и 0,110 г соответственно.

Пример 3.100 г фракции эритроцитов, отделенной от плазмы, причем общее содержание белка составляет 360 мг/r мокрой массы, разбавляют 200 г воды и рН раствора доводят до 1,8 путем добавления 1 М соляной кислоты. К этому раствору прибавляют 1%-ный раствор карбоксиметилцеллюлозы в воде, что дает весовое соотношение карбоксиметилцеллюлозы к белку, равное 1:20. После прибавления раствора карбоксиметилцеллюлозы рН доводят до 3,0 прибавлением 1М гидроокиси натрия. После центрифугирования с силой ЮОООд в течение 30 мин получают 70% общего белка в растворе, который имеет содержание белка 4,7%. Содержание железа и белка осадка составляет 0,8 и 84% соответственно.

Первоначальное количество белка и железа составляет 36 и 0,158 г соответственно. Количество белка и железа в фракции гема на сухой основе составляет 10,8 и 0.123 г соответственно.

Пример 4. ЮС г кровяных телец (300 мг белка/г), отделенных от плазмы, разбавляют 500 г воды. рН раствора доводят с помощью 1М водного раствора соляной кислоты до 1,4 и добавляют 2010 г 0,02%-ного водного раствора КМЦ. Смесь оставляют стоять в течение 15 мин и осажденный гем- КМЦ-комплекс отделяют от белкового раствор центрифугированием.

Пример 5. 100 г фракции гемоцитов, отделенной от плазмы и содержащей гемоглобин, общее содержание белка в котором составляет 350 мг/г влажного веса, разбавляют 200 г воды и показатель рН этого раствора доводят до 1,4-1,5 посредством

добавления 1,0 М раствора хлористоводородной кислоты, к этому раствору добавляют 1,5 М раствор карбоксиметилцеллюлозы (CMC) в воде в количестве, позволяющем

достичь весового соотношения карбоксиметилцеллюлозы и белка, равное примерно 1:10. Добавление раствора карбоксиметилцеллюлозы увеличиваеет значение рН, и в результате добавления хлориетоводородной кислоты или гидроокиси натрия гарантируется сохрнность показателя рН в интервале от 2,4 до 3,0. Обрзовавшийся осадок отделяют от раствора, центрифугируют с приложением силы, соответствующей

8000 д, в течение 15 мин. 70% общего содержания белка получают в растворе, концентрация белка в котором равнялась 4,0% с использованием центробежной силы, соответствующей 10000 g в течение 30 мин, при

этом выход белка можно увеличить до 85. Осадок можно использовать в качестве лре- парата гема либо гем можно выделить из этого осадка. При использовании центробежной силы, равной 10000 д, содержание

железа в осадке равнялось 1,8 %, а содержание белка 75 %ч

Пример 6. 100 г гемоглобинсодержа- щей фракции эритроцитов, (350 мг белка/г) отделенной от плазмы, разбавляют с помощью 200 г воды и рН полученного раствора доводят соляной кислотой до столь низкого значения, что рН этого раствора при добавлении 230 г 1,5%-водного раствора карбоксиметилцеллюлозы оставался ниже 3.

Полученный осадок отделяют от раствора центрифугированием (8000 д, 15 мин). Перед центрифугированием рН должен быть в интервале 2,2 - 3,0, чтобы обеспечить осаждение карбоксиметил целлюлозой,

По известному способу окончательная концентрация белка равна 0,038%, выход 67%, раствор гема получен разбавлением и требует дополнительной концентрации.

Формулаизобретения

Способ разделения гемоглобина крови на гем и глобин путем диссоциации гемоглобина эритроцитов и разделения гема и глобина, отличающийся тем, что, с целью

повышения концентрации гема и глобина, диссоциацию проводят в интервале рН 1,4- 3,0, а разделение - осаждением водным раствором карбоксиметилцеллюлозы при соотношении осадителя к белку 1:75 - 1:10.

Таблица 1

Та-б л и ц а 2

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской промышленности, и касается разделения крови на гем и глобин. Целью изобретения является повышение концентрации тема и глобина. Способ осуществляется посредством диссоциации гемоглобина эритроцитов на гем и глобин и их разделения, при этом диссоциацию проводят в интервале рН 1,4-3,0, а разделение - осаждением водным раствором карбокси- метилцеллюлозы при соотношении осади- теля и белка 1:75- 1:10. 2 табл.