Способ определения чувствительности слизистой оболочки полости рта к стоматологическому препарату Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано в иммунологии и аллергологии.

Известен способ определения чувствительности слизистой оболочки полости рта к препаратам. Суть его состоит в том, что в промывных жидкостях из полости рта, собранных до и после прополаскивания рта водным раствором лекарственного препарата, определяют количество и активность нейтрофилов в реакции торможения миграции лейкоцитов и в случае изменения этих показателей после воздействия на слизистую оболочку полости рта констатируют наличие аллергической реакции на препарат

Для сбора промывной жидкости передний отдел полости рта прополаскивают физиологическим раствором в течение 2 мин. Затем полость рта прополаскивают раствором пенициллина или норсульфазола в течение 2 мин, и через 15 мин после воздействия препарата вновь берут смыв.

Однако данный способ не позволяет определять локальную чувствительность к препарату, которая может становиться неадекватной именно в регионе разворачивающегося патологического процесса, что обуславливает его низкую точность. Кроме того, способ предполагает контакт с препаратом всей слизистой оболочки полости рта,

VJ

со

J

О iN

а это небезразлично для пациента, особенно при наличии у него аллергической реакции на препарат. Ряд препаратов, используемых при пломбировании зуба, на которые может развиться повышенная чув- ствительность, нерастворимы в воде (например, эвгенол), поэтому определить чувствительность к ним ткани невозможно.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет определения чувствительности к препаратам в локальной области зубо-челюстного сегмента.

Указанная цель достигается за счет того, что исследование лейкоцитов осуществляют в десневой жидкости, полученной из десневого желобка, причем контактирование слизистой оболочки ведут с препаратом, нанесенным на диск фильтровальной бумаги, в течение 5-10 мин после контакта по отношению к уровню эпителиальных кле- ток и активность - по способности к фагоцитозу и при повышении этих показателей определяют повышенную чувствительность, а при отсутствии изменений - нормальную чувствительность слизистой оболочки полости рта к лечебному препарату.

Положительный эффект предлагаемого способа достигается за счет сочетания приемов раздражения слизистой оболочки в ло- кальной области десны в результате контакта с препаратом и исследования изменения количества и функциональной активности клеток десневого желобка. Использование дисков фильтровальной бу- маги, пропитанных антибиотиками, для определения чувствительности штаммов микроорганизмов. При этом пропитанный диск накладывают на слой агара, на котором произведен посев микроорганизмов: внутрикожное введение аллергенов для определения аллергической реакции на препарат (при наличии такой реакции местно-гиперемия, отсек); сублингвальная проба-аллерген капают под язык и через 5-7 мин по общему состоянию пациента (слабость, тошнота и т.д.) определяют наличие аллергической реакции. Все препараты, используемые в перечисленных пробах, водо- растворимы.

Время контакта с препаратом в течение 5-10 мин является оптимальным для определения чувствительности ткани к препарату. Контакт длительностью менее 5 мин недо- статочен для изменения миграции лейкоцитов в десневой желобок, а следовательно, и определения чувствительности. Контакт свыше 10 мин смысла не имеет поскольку не приводит к дальнейшему изменению показателей количества и активности лейкоцитов. Длительность интервала между контактом и анализом клеточного материала взята 20-30 мин, исходя из того, что максимальное количество клеток накапливается в желобке через 20 мин после воздействия и начинает вновь уменьшаться спустя 10 мин.

П р и м е р 1. Больная П.46 лет диагноз; обострение хронического пульпита 3. Необходимо определить чувствительность ткани у данного зуба к эвгенолу-препарату, который применяется при пломбировании канала. Для этого из десневого желобка данного зуба забирали десневую жидкость при помощи приспособления, состоящего из иглы с затупленным концом, герметично соединенной с баллончиком (типа шприца тюбика, у которого затуплен конец иглы). Конец иглы вставляли в желобок и засасывали десневую жидкость, которую немедленно переносили в лунку планшета для иммунологических реакций, содержащую 0,05 мл раствора Хенкса, ресуспендирова- ли, хранили до взятия второй пробы из желобка.

Затем к десне данного зуба в область проекции верхушки корня прокладывали диск фильтровальной бумаги диаметром 0,5 см, предварительно пропитанный раствором препарата и высушенный (диск пропитывали 12,5%-ным раствором эвгенола в этиловом спирте, высушивали и хранили в закрытой склянке при комнатной температуре). Диск выдерживали на десне 5 мин, после чего удаляли. Через 25 мин после снятия диска с десны из десневого желобка вновь собирали десневую жидкость и переносили ее в другую лунку планшета, содер- жащую 0,05 мл раствора Хенкса, ресуспендировали.

К суспензиями двух проб клеток (взятых до воздействия препарата на десну и после него) добавляли по 0,05 мл 0,05%-ной суспензии фильтрованных клеток пекарских дрожжей. Дрожжи готовили так: смешивали свежие дрожжи с физиологическим раствором в соотношении 1:2, выдерживали при 80°С в течение 60 мин, охлаждали, приливали 10% формалина и хранили при 4-10°С; перед использованием отмывали не менее 6 раз. Центрифугировали при 200 g в течение 5 мин. После этого приливали 0,025 мл фиксатора (1,3% глутаровского альдегида и 6% формальдегина в растворе Хенкса) и выдерживали 10 мин. Затем надосадочную жидкость стряхивали из лунок и к осадку приливали 0,05 мл раствора краски (метиловый зеленый пирорнин). На планшете накладывали триацетат-целлюлозную пленку, покрытую дубленым слоем желатина, плотно прижимали ее при помощи металлической крышки с прокладкой из поролона толщиной 0,5 см. Осадок в лунках тщательно ресуспендировали, затем осаждали на пленку центрифугированием планшета при 200 g в течение 5 мин. Пленку снимали, препарат высушивали в токе теплого воздуха, затем промывали водопроводной водой и вновь высушивали. На готовые препараты наносили слой канадского или пихтового бальзама в ксилоле и приклеивали его к предметному стеклу. Подсчитывали соотношение лейкоцитов и эпителиальных клеток и количество фагоцитирующих нейтрофи- лов в обоих препаратах. У данной пациентки до контакта десны с диском, пропитанным эвгенолом, значения показателей были следующие: соотношение лейкоциты: эпителиальные клетки составило 58:42, количество фагоцитирующих нейтро- филов - 18%. После контакта с препаратом соотношение лейкоциты: эпителиальные клетки составило 64: 36, а уровень фагоцитоза - 24%. Таким образом первый показатель (количество лейкоцитов по отношению к нейтрофилам) увеличился на 11, и второй на 33%. На основании этого был сделан вывод о повышенной чувствительности данной пациентки к препарату. Ближайшие результаты лечения показали следующее. Использование цинкэвгеноловой пасты при пломбировании канала привело к незначительному отеку мягких тканей нижней челюсти слева, сглаживанию переходной складки в области леченого зуба, его болезненной прикуски (при том, что канал был запломбирован до верхушки корня). Все эти симптомы свидетельствуют о повышенной чувствительности ткани в области данного зуба к эвгенолу.

П р и м е р 2. Больная Т., 23 года, диагноз: хронический фиброзный пульпитЗ. При пломбировании канала использовался эвгенол. Проверялась чувствительность ткани у этого зуба к данному препарату. У пациентки из десневого желоба забирали десневую жидкость так же, как в примере 1. Переносили ее в лунку планшета, содержащую 0,05 мл раствора Хенкса, ресуспендировали. Затем к десне этого зуба в область проекции верхушки корня приложили диск фильтровальной бумаги, пропитанный раствором эвгенола (диски готовили так же, как в примере 1), выдерживали 10 мин. Затем диск убирали и из десневого желобка того же зуба спустя 30 мин, забирали десневую жидкость. Реакцию фагоцитоза ставили так, как в примере 1. Подсчитывали соотношение лейкоцитов, эпителиальных клеток и количество фагоцитирующих нейтрофилов. До контакта с эвгенолом соотношение лейкоциты: эпителиальные клетки составило 64:36, уровень фагоцитоза - 16%. После контакта соотношение лейкоциты: эпителиальные клетки стало 62:38, уровень фагоцитоза

остался 16%. Вывод - чувствительности к препарату нет, что подвердилось клинически, поскольку жалоб после лечения с использованием цинк-эвгеноловой пасты нет. При внешнем осмотре: конфигурация лица,

региональные лимфоузлы, а также слизистая оболочка в области лечебного зуба не изменены. Перкуссия безболезненная,

П р и м е р 3. Больная К., 43 года, направлена пародонтологом на депульпирование

4 зуба и проведение резорцинформалино- вого метода, подвижность II степени.При лечении данного зуба использовалась ре- зорцинформалиновая смесь. Проверялась чувствительность ткани у этого зуба к данному препарату. При помощи приспособления (как в примерах 1 и 2) у этой пациентки из десневого желобка забирали десневую жидкость, переносили ее в лунку планшета, содержащую 0,05 мл раствора Хенкса, ресуспендировали. Затем к десне этого зуба в область проекции верхушки корня приложили диск фильтровальной бумаги, пропитанной раствором резорцинформалиновой смеси (диски готовили следующим образом,

готовили 1,56%-ный водный раствор резорцинформалиновой смеси, пропитывали им диски фильтровальной бумаги, высушивали и хранили при комнатной температуре), выдерживали 7 мин, Затем диск убирали и из

десневого желоба того же зуба спустя 20 мин забирали десневую жидкость, переносили ее в другую лунку планшета, содержащую 0,05 мл раствора Хенкса, ресуспенировали. Реакцию фагоцитоза ставили так же как в примере 1, Подсчитали соотношение лейкоцитов и эпителиальных клеток и количество фагоцитирующих нейтрофилов. До контакта с резорцинформалиновой смесью соотношение лейкоциты: эпителиальные клетки составили 56:44, количество фагоцитирующих нейтрофилов - 6%; после контакта с препаратом соотношение лейкоциты, эпителиальные клетки составило 66:34, уровень фагоцитоза -14%, т.е. первый показатель увеличился на

12, а второй - на 130%, Был сделан выводе повышенной чувствительности пациентки к препарату. Ближайшие результаты лечения с использованием резорцинформалиновой смеси показали следующее. Больная отмечала болезненность при накусывании на зуб. При внешнем осмотре: конфигурация лица, региональные лимфоузлы, а также слизистая в области леченного зуба не изменены. Перкуссия зуба болезненна. Как и

первых двух примерах каналах были запломбированы строго до верхушки корня.

Предлагаемый способ позволяет более точно определить чувствительность ткани к препарату в области конкретного зуба, чем известный способ, точность повышается в 5,4 раза.

Повышенная точность способа достигается за счет анализа клеток десневого желоба после воздействия в локальной области слизистой оболочки зубодесневого сегмента. Но есть и еще одна причина. В предлагаемом способе анализируются клетки десневого желобка, в прототипе клетки смыва из полости рта. Их жизнеспособность различается. Жизнеспособность нейтрофи- лов десневого желоба в среднем составляет 72,2 i 2,6%, смыва из полости рта - 61,2 3,2%. Ясно, что чем больше число жизнеспособных выделенных клеток, тем выше точность любой иммунологической реакции.

Способ прост в исполнении. Он занимает времени меньше, чем прототип (табл.2).

Кроме того, поскольку способ предлагает манипуляции с малыми количествами клеток ( в десятки и сотни меньшими, чем прототип), то требует соответственно минимального количества реактивов и материалов, В отличие от прототипа, предлагаемый способ более объективен, поскольку качество и количество клеток смыва, исследуемого по прототипу, во многом зависит отусердия, умения и тщательности полоскания рта пациентами, а взятие клеток из десневого желобка, исследуемых по предлагаемому способу, осуществляется врачом все время однотипно.

Способ готов к практическому использованию. Он расчитан для применения в лабораториях стоматологических стационаров и поликлиник.

Формула изобретения

Способ определения чувствительности слизистой оболочки полости рта к стоматологическому препарату, включающий подсчет количества лейкоцитов полости рта и выявление их активности до и после контакта слизистой оболочки с лекарственным веществом, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа за счет определения чувствительности в локальной области зубо-челюстного сегмента, исследование лейкоцитов осуществляют в десне- вой жидкости, полученной из десневого желобка, причем контактирование слизистой оболочки ведут с препаратом, нанесенным на диск фильтровальной бумаги, в

течение 5-10 мин, и подсчет количества лейкоцитов ведут через 20-30 мин, после контакта по отношению к уровню эпителиальных клеток, а активность лейкоцитов по способности к фагоцитозу и при

сохранении первоначальных показателей определяют как чувствительную слизистую оболочку полости рта к препарату.

Таблица1

Таблица2

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии. Цель изобретения - повышение точности способа за счет определения чувствительности в локальной области слизистой зубо-челюстного сегмента к стоматологическому препарату. Чувствительность ткани в полости рта к препаратам определяли на основании оценки изменения соотношения и функциональной активности клеток десневого желобка после воздействия на десну данного препарата. Забор десневой жидкости проводили из десневого желобка до и после контакта и определяли количество лейкоцитов по отношению к уровню эпителиальных клеток, а активность нейтрофилов - по их способности к фагоцитозу и при повышении уровня обоих этих показателей делали вывод о повышенной чувствительности ткани в области зуба, а при отсутствии повышения уровня - о нормальной чувствительности ткани к препарату. Способ позволяет определять чувствительность ткани к препаратам локально, что важно для выбора лекарственных препаратов при лечении конкретного зуба и различных воспалительных процессов в области зубо-челюстного сегмента. Способ прост в исполнении, надежен и может быть использован в стоматологических поликлиниках. 2 табл. СП

Операции

Предлагаемый способ

Взятие материала, мин Контакт с препаратом, мин нтервал времени до повторного взятия материала, мин Повторное взятие материала, мин

Отмывка клеток, мин одготовительные операции

Реакция, мин Подсчет результатов, мин

Итого, мин

Десневая жидкость 2 мин Диск. 10-15

20-30

2 О

Приготовление суспензии дрожжевых клеток, закапывание 20 мин

Фагоцитоз (с учетом центрифугирования, фиксации) 20 Одновременно соотношение клеток и фагоцитарной активности нейтрофилов- 78-93

Прототип

Смыв 2 Полоскание рта 2

15

2

30

Заполнение капилляра, подготовка камеры 40 мин

РТМЛ (инкубация) 60

РТМЛ-2х1 2 мин Количество клеток с учетом подготов- - ки камеры Горяева- 159