Способ прогнозирования течения язвенной болезни Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии

Цель изобретения - повышение точности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

I этап Выделение антигенного материала слизистой оболочки 12-перстной кишки. Кишечник недоношенного эмбриона отмывают от крови, осторожно отделяют слизистую оболочку и гомогенизируют в гомогенизаторе Поттера с физиологическим раствором в соотношении 1 1 Измельченную ткань подвергают дробному центрифугированию. Супернатант центрифугируют в течение 1 ч при 105000 об/мин Перевод антигена в растворимое состояние из клеточных мембран осуществляют с помощью папина, добавляемого из расчета 0,1 мг на 1 мл супернатанта. Смесь выдерживают в термостате при 37°С в течение 1 ч После центрифугирования при 88700 об/мин супернатант разгоняют на колонке с сефа- дексом G 200 и отбирают фракции с максимальным содержанием белка (определяют по методу Лоури) После диализной очистки и лиофилизации фракций антиген используется в концентрации 250 гам/мл

В реакции также используются антигены клеточных мембран кардиомиоцичов (кардиальный антиген) в концентрации 100 гам/мл и базальные мембраны почечных клубочков (почечный антиген) в концьп трации 300 гам/мл

И зтап Подготовка агара

Заранее готовят 3%-ный агар Дифко на физиологическом растворе с 0,05 М трис- HCI буфером (рН 7 Ь) и хранят при 4°С день опыта к 5 мл расплавленного агарз гс тывшего до 50 - 54°С, прибавляют 10 мл смеси, состоящей из 9 мл среды 199 1 мл сыворотки крупно о рогатого скота 100 ЕД/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомици-о нагретой io37°C Пластиковые чашк. Петри одноразового использования диаметром 100 мм заливают приготовленной смесью Чашки устанавливают строго горизонтально и наливают равные количества геля бы толщина его составляла 2 мм В затвердевшем геле пробойником выбивают лунки диаметром 2 5 мм

III этап Выделение лейкоцитов

В пластиковую пробирку помехою г 10 мл гепаринизированной крови (26 ед гепарина на 1 мл крови) обследуемого Kpoei забирают из локтевой вены натощак В те

vj

4 КЗ

IK

Ism

(Ч i В

чение 1 ч пробирку выдерживают в термостате при 37°С. После отстаивания плазму осторожно переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют. Примесь эритроцитов в клеточном осадке лизируют в гипотоническом растворе хлористого натрия, для чего к клеточному осадку добавляют 5,0 мл 0,35%-ного раствора NaCI и осторожно пастеровской пипеткой ресус- пендируют клетки, не допуская образования пены, в течение 35 - 40 с. После экспозиции к суспензии клеток немедленно добавляют 0,6 мл 5%-ного раствора хлористого натрия и тщательно перемешивают. В результате раствор становится изотоническим. Полученную взвесь лейкоцитов трижды отмывают средой 199.

IV этап. Постановка реакции торможения миграции лейкоцитов,

Контрольные и опытные исследования проводят в четырех параллельных лунках, внося в каждую из них по 5 мкл ресуспензи- рованной лейковзвеси (1,5 млн клеток) и 5 мкл раствора антигена или среды 199 (контроль). После инкубации чашек при 37°С в течение 24 ч агаровые блоки с целью фиксации клеток заливают 10%-ным раствором формалина. Через 4 ч слой агара осторожно удаляют, чашки промывают дистиллирова- ной водой и высушивают. Результаты учитывают путем отбрасывания изображения полей миграции на бумагу с помощью проекционного аппарата Микрофот типа 5ПО-1. Индекс миграции (ИМ) определяют по отношению средних величин площадей миграции в опыте и контроле по формуле

ИМ

Di2-di2 D2 2 - d2 2

где DI - средний диаметр четырех зон миграции в опыте;

Da - средний диаметр четырех зон миграции в контроле;

di - средний диаметр четырех центральных лунок в опыте;

иг - средний диаметр четы рех централ ь- ных лунок в контроле.

Отработанные на 20 здоровых донорах нормы ИМ находятся в пределах 0,8 - 1,2.

Результаты РТМЛ у больных язвенной болезнью желудка (ЯБЖ) с различным течением заболевания до и после лечения представлены в табл.1.

Результаты РТМЛ у больных язвенной болезнью 12-перстной кишки (ЯБДК) с различным течением заболевания до и после лечения представлены в табл. 2.

Результаты РТМЛ у больных хроническим гастритом (ХГ) до и после лечения представлены в табл.3.

Таким образом, видно, что положительные результаты РТМЛ с двумя и более антигенами характерны для тяжелого течения ЯБ.

При значении ИМ в РТМЛ с двумя и более тканевыми антигенами (помимо ки0 шечного) менее 0,8 и более 1,2, полученном у больных ЯБ в стадии обострения до начала лечения, можно прогнозировать тяжелое течение заболевания.

П р и м е р 1. Больной Г., 46 лет. Диагноз

5 при поступлении: язвенная болезнь желудка в стадии обострения. Объективно: состояние удовлетворительное, кожные покровы и слизистые обычной окраски, периферические лимфоузлы и щитовидная железа не

0 увеличены. Над легкими дыхание везикулярное. Хрипов нет. ЧД 16/мин. Тоны сердца приглушены, ритм правильный. АД 135/75 мм рт.ст., ЧСС 72 уд/мин. Живот мягкий, болезненный при попытке пальпа5 ции в эпигастрии. Печень и селезенка не пальпируются, перкугорно - не увеличены. Стул ежедневный, оформленный, обычной окраски. При эзофагогастродуоденоскопии (ЭГДС) выявлена язва угла желудка диамет0 ром 0,7 см, умеренна гиперемия в указанной зоне. Остается неясным дальнейший прогноз течения заболевания. При постановке РТМЛ исходные, до начала лечения, величины ИМ составили с кишечным анти5 геном 0,47, с кардиальным 0,76, с почечным 1,12. Таким образом, РТМЛ положительна с двумя антигенами, один из которых кишечный. У данного больного прогнозируется т я- желое течен /.е ЯБ. Действительно, у

0 больного отмечается тяжелое течение заболевания (язвенный анамнез 15 лет) с ежегодными (2-3 раза в год) обострениями.

П ри м е р2. Больной К., 45 лет. Диагноз: язвенная болезнь двенадцатиперстной

5 кишки в стадии обострения. Жалобы: боли в эпигастрии сжимающего и сосущего характера, возникающие натощак, часто ночью. Из истории заболевания: язва выявлена впервые в амбулаторных условиях при

0 ЭГДС две недели назад - язва на задней стенке луксзицы 12-перстной кишки диаметром 0,5 см с периульцерозным отеком. Объективно: состояние удовлетворительное, кожные покровы и слизистые обычной

5 окраски. Над легкими дыхание везикулярное. Тоны сердца звучные, ритм правильный, АД 130/70 мм рт.ст., ЧСС 74 уд/мин. Живот мягкий, болезненный при Пг пьпаци1/ в эпигастрии. Печень у нижнего края реберной дуги, селезенка не увеличена Хотя у

данного больного язва выявлена впервые, однако данные клинико-инструментального обследования не позволяют с уверенностью говорить о дальнейшем течении ЯБДК.

Результаты РТМЛ: ИМ с кишечным антигеном 0,76, с кардиальным 1,00, с почечным 1,12. РТМЛ положительна только с кишечным антигеном. У данного больного прогнозируется благоприятное течение заболевания. Действительно, в дальнейшем ЯБДК протекала достаточно благоприятно, обострения возникали 1 раз в 2 - 3 года, язвенный дефект успешно рубцевался под действием антацидов, холинолитиков, обволакивающих,

П р и м е р 3, Больной Ф., 37 лет. Диагноз: язвенная болезнь 12-перстной кишки в стадии обострения, Объективно: состояние удовлетворительное, кожные покровы и слизистые бледные, чистые. Язык обложен густым белым налетом. Живот резко болезненный при попытке пальпации в эпигаст- рии справа. Печень и селезенка не пальпируются.

ЭГДС: язва на передней стенке луковицы 12-перстной кишки диаметром 0,5 см и на верхне-задней 0,4 см.

Результаты РТМЛ: ИМ с кишечным антигеном 0,58, с кардиальным 0,92, с почечным 1,21. До начала лечения РТМЛ положительна с двумя тканевыми антигенами, что позволило прогнозировать тяжелое течение ЯБДК. Действительно, у данного

больного язвенный анамнез 16 лет, с ежегодными осенне-весенними обострениями. После окончания лечения РТМЛ также была положительна с двумя антигенами кишечным (ИМ 0,59) и почечным (ИМ 1,21). Дальнейший прогноз ЯБДК неблагоприятен, необходима коррекция терапии либо хирургическое лечение.

Таким образом, использование данного

способа прогнозирования течения Я Б позволяет уже при исходной - до начала лечения - постановке РТМЛ с несколькими, помимо кишечного, антигенами прогнозировать характер дальнейшего течения заболевания, индивидуально подбирать адекватную противоязвенную терапию и корректировать дальнейшее лечение. Указанные положения имеют принципиальное значение в лечении ЯБ. Точность указаннсго способа 67%.

Формула изобретения Способ прогнозирования течения язвенной болезни путем добавления к взвеси лейкоцитов больного тканевого антигена,

проведение миграции лейкоцитов с последующей оценкой реакции, отличающий:, тем, что, с целью повышение точности способа, к отдельным пробам взвеси лейкоцитов добавляют антигены,

полученные из различных органов, определяют индекс миграции лейкоцитов и при значении его менее 0,8 и более 1,2 с двумя или более антигенами прогнозируют тяжелое течение заболевания.

Использование в медицине, в частности в гастроэнтерологии для определения тяжести течения язвенной болезни Сущность к отдельным г.робам взвеси лейкоцитов добавляют .антигены, полученные из различных органов определяют индекс миграции лейкоците и при значении его менее 0 8 и более 1 2 с двумя или более антигенами прогнозируют тяжелое течение заболевания 3 табл

35

Таблица 1

Примечание. Тяжелое течение ЯБ характеризуется длительным (свыше 10 лет) язвенным анамнезом, обострениями заболевания чаще 2 раз в год, чередованием обострений и неполных ремиссий.

Таблица 2

Таблица 3