Способ прогнозирования течения язвенной болезни Советский патент 1992 года по МПК G01N33/68 

с/

С

Изобретение относится к области медицины, в частности гастротерапии. Целью изобретения является повышение точности прогнозирования характера течения язвенной болезни. Это достигается дополнительным определением у больных язвенной болезнью с наличием Compylobacter Pylori цитохимически в лимфоцитах активности дегидрогеназ и постоянной реакции торможения миграции лейкоцитов с тканевыми антигенами. При снижении уровня активности сукцинатдегидрогеназы относительно нормы в 1,5 раз, повышении уровня активности альфа-глицерофосфатдегидрогеназы в 2,3 раза и величине индекса миграции лейкоцитов ниже 0.65 прогнозируют тяжелое течение язвенной болезни

Изобретение относится к области медицины, в частности, к гастроэнтерологии, и может быть использован для определения дальнейшего характера течения язвенной болезни (ЯБ).

ЯБ, относясь к наиболее часто распространенным заболеваниям желудочно-кишечного тракта, чаще всего поражает лиц молодого, наиболее трудоспособного возраста. Заболевание носит хронический рецидивирующий характер Результатом этого является инвалидизация больных и большие социально-экономические потери. 8 последнее время наблюдается отчетливая тенденция к росту заболеваемости ЯБ, особенно среди лиц молодого возраста В связи с этим разработка способа прогнозирования дальнейшего течения ЯБ представляет большую практическую значимость, поскольку позволяет подбирать адекватную терапию и выделять группы риска.

Известен способ прогнозирования течения ЯБ, основанный на выделении из слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки.

Указанный способ не может быть использован для прогнозирования тяжести течения ЯБ, поскольку в группу больных, у которых выявляются СР, попадают лица лишь с симптомами желудочной диспепсии но без язвенного дефекта, что существенно снижает точность про ноза.

Известен также способ прогнозирования тяжести течения ЯБ, принятый нами за прототип, основанный на оценке метаболической активности лимфоцитов крови путем цитохимического определения активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и альфа-глицерофосфэтдегидрогеназы (альфаТФДГ) митохондрий лимфоцитов,

Недостатком данного способа является его невысокая точность.

Кроме того, дегидрогеназная активность лимфоцитов крови соответствует тяжести течения заболевания на момент обострения, но не указывает на дальнейший прогноз ЯБ.

Целью предполагаемого изобретения является повышение точности прогнозирования течения ЯБ.

Способ осуществляется следующим образом.

Iэтап - выделение СР из биоптатов СО желудка и 12-перстной кишки.

До начала лечения и после рубцевания язвенного дефекта больным ЯБ утром натощак проводят ЭГДС с прицельной биопсией антрального отдела желудка и 12-перстной кишки (не менее 3 фрагментов из каждого участка). Полученные при биопсии фрагменты СО помещают в стерильные одноразовые пробирки с крышкой обьемом 1 мл, заполненные стерильным изотоническим раствором NaCI, и доставляют в лабораторию не позднее 1 ч с момента проведения биопсии. После этого с одним из фрагментов из каждого участка проводят тест на уреазопозитивность: фрагмент помещают в пробирку с 10,0 мл индикаторной смеси, содержащей мочевину и вещество-индикатор При наличии в биоптате СО СР рН среды меняется за счет разлож-ения кампилобактериями мочевины на аммиак и СОа. и смесь окрашивается в красный цвет. Результаты теста оцениваются через 30 мин, 4, 8. 12, 16 и 24 ч. Тест считается положительным при прохождении реакции не позже 4 ч.

Следующим этапом является микроскопия мазка биоптата (один фрагмент из каждого участка) с окрашиванием препарата по Граму для выявления спиралевидных микроорганизмов.

Далее проводят высевание микроорганизмов в микроаэробных условиях при содержании кислорода 5-10%. температуре 35-37°С и оптимальном значении рН от 5,5 до 8,5. Средой является шоколадно-кровя- ной агар. После этого проводится повторная микроскопия выращенной культуры микрооганизмов (окраски препаратов по Граму) для их окончательной идентификации

I1этап - определение дегидрогеназной активности лимфоцитов.

Для исследования берется свежеприготовленный мазок крови (утром натощак до начала лечения и после рубцевания язвенного дефекта), который высушивается на воздухе и затем в течение 30 с. фиксируется в фиксаторе (раствор 60% ацетона с трило- ном Б). После этого мазок дважды промывается в дистиллированной воде и высушивается на воздухе).

Приготавливается инкубационная среда, состоящая из 10 мл 9,2 М р-ра фосфатного буфера с рН 7,2-7,4, 10 мл

0 дистиллированной воды с растворенными в ней 13 мг пара-нитратетразолия фиолетового, 20 мл дистиллированной воды с добавлением к ней 15 мг трилона-Б, общий обьем инкубационной среды равен 40 мл со сред5 ней рН 7,2-7,4.

Для выявления активности ферментов к 40 мл инкубационной среды прибавляют 540 мг сукцината а (выявление активности альфаТФДГ), мазок опускается в один из

0 растворов и выдерживается в нем в течение 2 ч при , после чего промывается водой и высушивается на воздухе.

Для прокрашивания ядер мазок опускается на 10-15 мин в 2%-ный раствор мети5 левого зеленого, промывается проточной водой и фиксируется в парах формалина в течение 30 мин.

После этого производят световую микроскопию мазка (х40)-с подсчетом числа гра0 нул формазина в 50 клетках и делят их на подгруппы с числом гранул от 0 до 4, 5-9, 10-14 и т.д.

Для построения гистограмм распределения лимфоцитов с различной активностью

5 СДГ и альфа-ГФДГ проводят определение средней активности фермента в указанных подгруппах и среднего количества лимфоцитов с определенной активностью фермента (М+) с вычислением достоверности

0 различия (Р).

Для определения активности СДГ и альфа-ГФДГ готовится не менее 2 мазков от каждого больного

111 этап - постановка реакции тормо5 жения миграции лейкоцитов (РТМЛ).

Предварительно заранее производили выделение антигенного материала слизистой оболочки 12-перстной кишки, для чего после тщательного отмывания из кишечни0 ка недоношенного эмбриона тщательно выделяли СО и гомогенизировали с физиологическим раствором в соотношении 1:1, смесь подвергали дробному центрифугированию в течение 1 ч при 105 000 об/мин.

5 Перевод антигена в растворимое состояние осуществляли путем добавления папаина из расчета 0,1 мг на 1 мл супернатанта. Смесь выдерживали в термостате при температуре 37°С в течение 1 ч, центрифугировали при 88 700 об/мин и разгоняли на колонке с

сефадексом С 200, после чего отбирались фракции с максимальным содержанием белка (определяли по методу Лоури). После диализной очистки и лиофилизации фракции использовались в концентрации 250 гам/мл, поскольку несцпецифическое торможение миграции при постановке РТМЛ у здоровых лиц наблюдалось при концентрации антигена 300 гам/мл.

Постановка РТМЛ осуществлялась двухкратно - до начала лечения и после рубцевания язвенного дефекта. Пластиковые одноразовые чашки Петри диаметром 100 мм заливали 3% агаром Дифко, приготовлен ом на физиологическом растворе (рН 7.3) с добавлением 100 ЕД/мл пенициллина и 10 мгк/мл стрептомицина. Толщина слоя агара составляла 2 мм. После застывания в слое агара пробойником выбивали лунки диаметром 2,5 мм, в которые вносили побмкл лейковзвеси(1,5 млн клеток)и5мкл раствора антигена (опыт) или среды 199 (контроль). После инкубации чашек при 37°С в течение 24 часов агаровые блоки фиксировали 10 %-р-ром формалина (4 часа), осторожно снимали, чашки промывали дистиллированной водой и высушивали. Результат учитывали путем отбрасывания изображения полей миграции клеток на бумагу. Индекс миграции (ИМ) определяли отношением средних величин площадей миграции в опыте и контроле по формуле:

им-Д1 -Д1 .

Д2-Д22

где Дч - средний диаметр 4 зон миграции в опыте;

Д2 - средний диаметр 4 зон миграции в контроле;

Д1 - средний диаметр 4 центральных лунок в опыте;

Д2 - средний диаметр 4 центральных лунок в контроле.

Контрольные и опытные исследования проводили в четырех параллельных лунках.

Нормы определившихся показателей были отработаны на 20 здоровых добровольцах и составили: ИМ 0,81-1,21; СДГ 20,00 ± 10; альфа - ГФДГ 6.90 ± 0,06.

П р и м е р 1. Больной Г., 46 лет, инженер, и/б № 28690, находился в гастроэнтерологическом отделении с 24,11.87 по 23.12.87 с диагнозом: язвенная болезнь желудка в стадии обострения.

Из анамнеза известно, что язвенной болезнью желудкз страдает в течение 15 лет с ежегодными (2-3) обострениями. Настоящее обострение длится 2 недели. Лекарственное лечение не производилось. Обьек- тивно: состояние при поступлении удовлетворительное, кожные покровы и слизистые оболочки обычной окраски, периферические лимфоузлы и щитовидная железа не увеличены. Аускультативно дыхание везикулярное. ЧД- 16 в мин. Тоны сердца приглушены, ритм правильный. АД - 135/75 мм рт.ст. ЧСС - 72 в мин. Живот пальпатарно

0 мягкий, болезненный в эпигастрии. Печень и селезенка не пальпируются, перкуторно не увеличены. Стул ежедневный, оформленный, обычной окраски. ЭГДС: язва угла желудка , см, умеренная гиперемия в

5 указанной зоне. Луковица 12-перстной кишки без изменений. Результаты РТМЛ с кишечным антигеном: ИМ 0,41. СР выявлены всеми тремя методами в биоптатах из ант- рального отдела желудка. Дегидрогеназная

0 активность лимфоцитов: СДГ- 12,8, альфа - ГФДГ - 16,9. После рубцевания язвенного дефекта СР в биоптатах антрального отдела сохранялись, ИМ в РТМЛ с кишечным антигеном составил 0,59. Активность СДГ - 13,4,

5 альфа - 15,8. Таким образом, у больного ЯБ с наличием в слизистой оболочке антрального отдела СР до начала лечения и после рубцевания язвенного дефекта наблюдалось снижение уровня активности СДГ с

0 1,56 и 1,49 раз соответствен но и повышение уровня активности альфаТФДГ в 2,40 и 2,30 раза соответственно. Сохранялась сенсибилизация лимфоцитов к кишечному антигену, Прогноз в данном случае

5 неблагоприятный.

П р и м е р 2. Больной К.. 45 лет, водитель и/б № 23774, находился в гастроэнтерологическом отделении с 2.10.87 по 23.10.87 с диагнозом: язвенная болезнь 12-перстной

0 кишки в стадии обострения.

Из анамнеза известно, что язва выявлена впервые в амбулаторных условиях при ЭГДС 2 недели назад (язва задней стенки луковицы 12-перстной кишки 0,5 см с пери5 ульцеровным отеком). Объективно: состояние при поступлении удовлетворительное. Телосложение нормостеническое, кожные покровы и слизистые обычной окраски, периферические лимфоузлы и щитовидная же0 леза не увеличены. Над гелкими аускультативно дыхание везикулярное. ЧД - 16 в мин. Тоны сердца звучные, ритм правильный. АД - 130/70 мм рт.ст. ЧСС - 74 в мин. Живот правильной формы, пальпатор5 но-болезненный в эпигастрии. Печень у нижнего края реберной дуги, селезенка не увеличена. Наличие СР установлено в ант- рал ьном отделе желудка (до начала лечения). Активность СДГ составила 18,7. альфаТФДГ - 6 5 ИМ в РТМЛ с кишечным

антигеном 0,89. После рубцевания язвенного дефекта (лечение холиволитиками, витаминами, антацидами) СР в биоптатах обнаружено не было. РТМЛ с кишечным антигеном была по-прежнему отрицательной. Активность СДГ-19,1 альфа-ГФДГ - 7,0. Таким образом, у больного впервые выявленной язвой луковицы 12-перстной кишки и отсутствием в слизистой оболочке желудка и 12-перстной кишки СР активность СДГ при обострении снизилась в 1,06 раз, а аль- фа-ГДФГ повысилась в 1.06 раз. После рубцевания язвы дегидрогеназная активность также оставалась практически нормальной. Прогноз в данном случае благоприятный.

П р и м е р 3. Больной Ф., 37 лет, служащий, и/б № 29574, находился в гастроэнте- ролическом стационаре, с 3.12.87 по 13.1 .88 с диагнозом: язвенная болезнь 12- перстной кишки в стадии обострения. Из анамнеза известно, что язвенной болезнью 12-перстной кишки страдает в течение 16 лет, с ежегодными осенне-весенними обострениями. Настоящее обострение длится 1 месяц. Рецидив заболевания верифицирован в амбулаторных условиях при ЭГДС (яз- ва на передней стенке луковицы 12-перстной кишки 0,5 см и на верхне-за- дней 0,4 мм, отек и гиперемия слизистой оболочки). При поступлении состояние удовлетворительное, питание понижено, кожные покровы и видимые слизистые бледные, язык обложен густым белым налетом. Живот при пальпации мягкий, выраженная болезненность при пальпации в элигастрии справа. Печень и селезенка не пальпируются. СР до начала лечения и после его окончания не были выявлены ни в одном из отделов желудка и 12-перстной кишки. РТМЛ с кишечным антигеном составил до начала лечения ИМ 0,56, после ИМОО, 81. Активность СДГ до начала лечения - 18,2, после окончания - 18,4, альфа-ГФДГ - 7,8 и 7,5, соответственно.

Таким образом, у больного с тяжелым течением ЯБ СР в слизистой оболочке обнаружены не были. Активность СДГ снизилась до начала лечения относительно нормы в 1,09 раз, после лечения - в 1,8 раз, активность альфа - ГФДГ повысилась в 1,13 и 1,08 раз соответственно. Несмотря на длительный язвенный анамнез и частые обострения, функциональная активность лимфоцитов и их энергообмен у данного больного достаточно сохранны, СР не выявлено. Это делает прогноз в данном случае благоприятным.

Точность предложенного способа 77%, Это означает, что из 40 обследованных больных ЯБ с тяжелым течением, проявлявшимся длительным язвенным анамнезом,

частыми рецидивами и короткими периодами ремиссии с наличием в слизистой оболочке желудка или 12-перстной кишки СР активность СДГ была снижена относительно нормы в 1,5 раз и более, а активность

альфа-ГФДГ повышена относительно нормы в 2,3 раза и более у 31 больного (77,5%), что сопровождалось снижением ИМ в РТМЛ с кишечным антигеном ниже 9,65. после рубцевания язвенного дефекта СР сохранились у 30 больных (75%), однако дегидрогеназная активность и функциональная активность лимфоцитов оставались измененными. Данным больным необходимо проведение индивидуально подобранной

терапии, направленной в первую очередь на элиминацию микроорганизмов и стимуляцию местных защитных механизмов. Терапия должна быть более длительной, чем у остальных больных, проводится сочетанием

препаратов различных патогенетических групп, сочетаться с длительной поддерживающей терапией после рубцевания язвенного дефекта, а в ряде случаев - с хирургическим лечением.

Таким образом, использование предлагаемого способа прогнозирования тяжести течения язвенной болезни позволяет до начала проведения терапии прогнозировать дальнейший характер течения заболевания,

целенаправленно индивидуально подбирать терапию и корректировать ее в дальнейшем после рубцевания язвенного дефекта.

40

Формула изобретения

Способ прогнозирования течения язвенной болезни включающий определение сукцинат- и а -глицерофосфатдегидрогеназной активности лимфоцитов крови, о т- личающийся тем, что, с целью повышения точности способа дополнительно исследуют и реакцию торможения миграции лейкоцитов и определяют наличие

Campylobacter Pylore в биоптате слизистой оболочки желудка и при снижении уровня активности сукцинатдегидрогеназы в 1,5 раза, повышения уровня активности а. -гли- церофосфатдегидрогеназы в 2,3 раза

относительно нормы и величине индекса миграции лейкоцитов ниже 0,65 прогнозируют тяжелое течение заболевания.