УСТАНОВКА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ И РАЗЛИВА КЛЕТОЧНОЙ СУСПЕНЗИИ ИЗ ПОЧЕЧНОЙ ТКАНИ Советский патент 1973 года по МПК C12M3/02 

1

Изобретение относи1тся к области биологических исследований при культивировании тканей.

Известная установка подобного назначения, содержащая камеру для дезагрегации почек, емкости для разлива суспензии и рабочих жидкостей и систему трубопроводов, не приспособлена для дезагрегации почечной ткани путем ферментативной перфузии изолированных почек и не обеспечивает разлива суспензии в виде беспрерывного цикла.

В предлагаемой установке в отличим от известных камера для дезагрегации имеет закрепленный на внутренней поверхности крышки коллектор, состоящий из соединенного с насосом патрубка с канюлями, на которые надевают артерии подготовленных для дезагрегации почек, и блок установленных горизонтально на валу плоских ножей с вертикально расположенными противорежущими пластинами, имеющими радиальные пазы для прохождения .ножей 1п;ри измельчении почки. При этом камера для дезагрегации располол ена над емкостью для разлива суспензии и соединяется с последней через фильтр.

На фиг. 1 схематически изображена предлагаемая установка, на фиг. 2 - камера для дезагрегации и емкость для разлива суспензии, вид сбоку (в разрезе); на фиг. 3 разрез по Л-А на фиг. 2.

Предлагаемая установка содерл ит аппарат, состоящий из камеры / для дезагрегации почек, соединенной трубопроводами 2, 3, 4 через перистальтический насос 5 с емкостью

6 для ферментативного раствора и емкостью 7 с питательной средой и разливочной емкости 8, соединенной трубопроводами 9 и Ю с емкостью 6 и дозатором 11.

На всех трубопроводах смонтированы веитили. Емкость для ферментативного раствора помещена в водяную ванну 12, температура которой автоматически поддерживается на заданном уровне. Разлив клеточной суспензии производится из разливочной емкости в

культуральные сосуды с помощью иоршиевого дозатора промышленного выпуска. Камера и емкости снабжены воздушнымн фильтрами 13, препятствующими проникпопепию микрофлоры из окружающей среды. Для слива отмывочной жидкости предусмотрен отдельный трубопровод с запорным вентилет 14.

Корпус камеры 1 выполнен из прозрачного термосто1п ого стекла, позволяющего осуществлять визуальный контроль за процессами отмывки и дезагрегации ночечиой ткани Ж1ШОТНЫХ. Она герметично закрывается крышкой 15 с резиновой нрокладкой 16 посредством фланца 17. В крышке смонтирован

вентиль 18 с воздушным фильтром 19, в центральной vacTii крышки камеры сделано отверстие, которое герметично закрывается отки;и- ОЙ крышкой 20, поджимаемой винтовым устройстБом 2L На внутренней Г:оверх ;ости той крь;шки смонтировано устройство для ферментативной перфузии почек, состоящее из трубчатого коллектора 22 с каиюлями 23 для нодсоедннения артерий ночек и выведеииого наружу натрзбка 24, служащего для соединеиия коллектора с насосом, о(:л щестБЛяюн;им подачу рабочих жидкостей. Камера герметично крепится иа крыщке 25 разлнвопюн емкости 26 и сообщается с пей посредством выполненного в днище 27 отверстия 28, плотно закрываемого заслонкой 29, соедииепнон со штоком 30, проходящим через камеру н имеющим маховичок 31. В крыщке шток уплотняется фторонластовым сальником. Внутри камеры на валу установлен блок режущих элементов и лопастная мещалка 32, с помощью которой производится механическая дезагрегация кусков перфузионной почечной ткани в питательной среде. Блок содержит один плоский нож 33 для отсечения почечных артерий и три пары ножей 34 для рассечения перфузионпых почек. Парные ножи выполнены плоскими и расположены на определенном расстоянии друг от друга, вполне обеспечивающим рассечение почек независимо от их величины. Для осуществления рассечения почек в камере на стойках 35 установлены вертикальные опорные пластины 36 с радиальными пазами 37 для прохода ножей. Вал 38 камеры соединен с валом 39 емкости легко разъемной муфтой 40 и крепится в верхней части с помощью кронштейна 41, установленного на крышке 15.

Разливочная емкость 26 выполнена цилиндрической формы с конусообразным днишем. Она служит для разбавления конценирированиой клеточной суспензии и ее розлива в культуральные сосуды. На валу емкости смонтирована лопастная мешалка 42 для перемешивания клеточной суспензии при ее розливе, чтобы концентрация разливаемой суспензии была одинаковой. Вверху под днищем камеры установлен фильтр 43 для фильтрации концентрированной клеточной суснензин сливаемой в емкость носле дезагрегации почек в питательной среде. В днище емкости вал мещалки герметизируется торцовым уплотнением подшипника скольжения н на выходе имеет щкив 44, с помощью которого он соединяется с выходным валом редуктора 45 электродвигателя 46. Кроме того, в днище камеры смонтирован патрубок 47 с отводом 48 для отбора нроб и штуцер 49 для подсоединения мерной трубки 50, по уровню которой определяется объем, занимаемый разбавленной клеточной суспенвии.

Для получения клеточной суспензии на предлагаемой установке почки берут от животных-доноров с сохранением капсул и артерий.

Новоротом вала 38 режущие элементы устанавливаются в исходное положение, не препятствующее размещению почек в камере L В асептических условиях при открытой крышке 20 почки посредством их артерий подсоединяются к каиолям 23, после чего крышка герметично закры1ается винтовым устройством 21 с одновременным опусканием почек внутрь камеры. ПоворотО М маховичка

3 открывается отверстие 28 в днише камеры. Затем открьгваются вентили 14 и 18, включается насос 5 и производится отмывание ткани почек от крови. Для этого подогретый до 35-37°С ферментативный раствор подается через канюли 23 в сосудистую сеть каждой почки. Вытесненная из нжх кровь через и мочеточники стекает иа дно камеры, а из нее через отверстие 28 в емкость 26, из которой по патрубку 47 она удаляется в отдельную емкость.

В зависимости от вида и размеров почек на промывку их от крови расходуется 150- 250 мл ферментативного раствора.

Когда отмывочная жидкость будет прозрачной, включается система рециркуляции ферментативного раствора. С этого момента начинается процесс дезагрегации почечной ткани путем ферметативной перфузии. Нри этом ферментативный раствор в виде пульсирующего потока из емкости 6 подается насосом 5 через коллектор с кавюлями в сосуды почек, затем он через камеру 1, разливочную емкость 8 по трубопроводу 9 поступает обратно в емкость 6. За счет циркуляци Ц раствора по замкнутому контуру достигается значительное снижение расхода рабочей жидкости. Ферментативная перфузия почек продолжается в течение 10-30 мин и заканчивается, когда под капсулами почек образуется разветвленная сеть «трещинок, свидетельствующих о достаточном разрыхлении паренкимы почек за счет разрушения межклеточных связей. По окончании перфузии почек пропусканием небольщого количества

питательной среды они отмываются от ферментативного раствора.

Затем проводится процесс получен ия концентрированной клеточной суспензии. Для чего вентиль 14 и отверстие в днище камеры

закрываются, а камера заполняется питательной средой примерно на 1/3 ее объема. При выключенном насосе ножи приводятся во вращение. Сначала почки рассекаются парными ножами 34, а затем вожом 33 отсекаются их артерии. При рассечении куски почек подают в цитательную среду, в которой они под действием перемешивания лопастной мешалкой 32 дезагрегируются на отдельные клетки. Эта операция длится 1 -

2 мин.

По окончании дезагрегации почек открывается отверстие 28 камеры, и концентрированная клеточная суспензия через него и фильтр 42 сливается в разливочную емкость. Проходя через фильтр, оиа очищается от остатков

капсул и лоханок. Через пробоотборник берется проба, и по результатам подсчета клеток суспензия разбавляется необходимым количеством питательной среды, подаваемой насосом через камеру для дезагрегации почечной ткани.

Окончание процесса разбавления определяется по уровню мерной трубки 50. После этого включается мешалка 42 и через дозато-р 11 производится разлив клеточ.ной суспензии в культуральные сосуды.

Таким образом, при эксплуатацпм предлагаемой установки все технологические о-перации от загрузки почек до разлива готовой суспензии выполняются в виде непрерывного цикла в условиях, изолированных от окрул ающей среды, в результате чего во много раз повышается степень стерильности процесса получения клеточной суспензии. Бла.годаря механизации большинства операций резко сокращаются затраты ручного труда, а также во много раз (по сравнению с известными) облегчается обслуживание предлагаемой установки.

6

Предмет изобретен и я

1.Установка для получения н разлива клеточной суспензии из почечной ткани, содержащая камеру для дезагрегации: почек, емкость для разлива суспензии и рабочих жидкостей и систему трубопроводов, отличающаяся тем, что, с целью осуществления дезагрегации почечной ткани путем фермештативной перфузии изолированных почек и обеспечения разлива суспенбии в виде беспрерывного цикла, камера для дезагрегации имеет закрепленный на внутренней поверхности крышки коллектор, состоящий из соединепного с насосом патрубка с канюлями, ва которые надевают артерпи подготовленных для дезагрегации почек, и блок установленных горизонтально на валу плоских ножей с вертикально расположенными противорежущими

пластинами, имеющими радиальные пазы для прохождения ножей при измельчешиг почки.

2.Установка по п. 1, отличающаяся тем, что камера для дезагрегации расположена над емкостью для разлива суспензии и соединяется с последней через фильтр.

/J

Фиг,, I

W 18