СПОСОБ ДЕЗАГРЕГАЦИИ ПОЧЕЧНОЙ ТКАНИ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ Советский патент 1981 года по МПК C12N5/06 

I

Изобретение относится к технике получення клеток из тканей лабораторных животных для последующего культивирования их вне организма. Эти клеточные культуры широко используют для вьщеления и идентификации вирусов, определения ток-сичности лекарств, вирулентности бактерий и т.д.

Известный способ дезагрегации почечной ткани заключается в том, что раствор фермента нагнетают через сосуд извдеченаой почки специальным аппаратом до тех tic, пока под капсулой не образуются трещинки, после чего корковый слой почки подвергают дезагрегации в ростовсй среде с последующей посадкой клеток , Основным недостатком способа является незначительный вькод жизнеспособных клеток (до 50%).

Наиболее близок к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату способ дезагрегации почек лабо{)атарного животного, заключающийся в тоМ| что ЖИВОТНОМУ под общим наркозом

вскрьшают грудную полость и через левый желудочек в аорту вводят физиолся ический раствор для освобождения срганизМа от крови. Затем кровеносную систему запопHsnoT ферментативным раствором. По сжончанин этой процедуры почки извлекают, помещают в сосуд с подогретым раствором трипсина и инкубируют в течение часа при 36--37 С. После этого почки измельчают и ресуспендируют в питательной среде f2j.

Недостаток данного способа - недостаточно высокий выход жизнеспособных клеток.

Цель изобретения - повышение выхода жизнеспособных клеток.

Поставленная цель достигается тем, что ферментативный раствор вводятitvviwe в кровеносное русло лабораторного животного, которое не менее чем через 1 ч после этого забивают и извлекают дезаг регируемые почки.

П р и м е р 1. Мышн дважды на протяжении одного часа в хвостовую вену

вводят р,25%-ный раствор трипсина из расчета 1 мл на 20 г веса. Через ЗО мин после последнего введения животное обескровливают. Затем корковый слЫ1 извлечённойпочки подвергают дезагрега ции в ростовой среде с .последующей посадкой клеток,

П р и м е р 2, Морскс свинке в поверхностную вену уха вводят дважды на протяжении одного часа 0,25%-ньй раст-i вер трипсина из расчета 1 мл на 2О г веса. Через 30 мин после последнего введения животное обескровливают. Затем ксфковый слой извлеченной йочки подв гают дедагчэегации в ростовой среде с noследующей посадксй клетсж,

Предлагаемьш способ обеспечивает выход жизнеспособных клеток,до 80%„

Формула изобретения

Способ дезагрегации почечной ткани лабораторных животных ij включающий введение ферментативного раствора в дезагрегируемые почки через их кровеносные соcyrtbi и извлечение почек из обескровленного животнсяго, отличающийся тем, что, с целью повышения вьрсоДа жизнеспособных клеток, введение фе1рмента-. тивного раствора в кровеносные сосуды животного осуществляют in vivo.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1, Авторское свидетельство СССР

№ 340698, кл,С 12 К 9/00, 1970.

2. Мирсиова Л, Л Культуры клеток и применение их для изготовления противовирусных препаратов, М., 1968, с. 81-84.