Способ получения препарата гонадотропинов из сыворотки жеребых кобыл "оваритропина" Советский патент 1978 года по МПК A61K38/24 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ГОНАДОТРОПИНОВ

ИЗ СЫВОРОТКИ ЖЕРЕБЫХ КОБЫЛ ОВАРИТРОПИНА

Изобретение относится к способам получения концентрата гонадотропных гормонов, обладающих фолликулостимулирующим и лютеинизирующим действием, из сыворотки жеребых кобыл (СЖК) и может быть использовано в животноводческой И ветеринарной практике с цель стимуляции половой функции и при эндокринных нарушениях у сельскохозяйственных животных. Известные в настоящее время производственные способы получения гонадотропииов из СЖК основываются на методах фракционирования сывороточных (балластных) белков и последующего отделения гормоиов с помощью этилового спирта LIJ . Недостатком известных способов является невысокая степень очистки гормоиов. Активность получаемых такими способами препаратов, как правило, не превышает 80-100 м.е./мг сухого вещес тва (м.е. - мышиная единица). Многократное переосаждение гормоиов спиртом обеспечивает более высоку степень очистки гормонов из СЖК и получение препаратов с активностью в пределах 300-600 м.е./мг и выие. Однако усложнение схем очистки гормонов приводит к удорожанию препарата и ограничивает возможности его массового производства для применения в животноводческой и ветеринарной практике. целью изобретения является упрощение процесса очистки и сокращение времени получения концентрата гоиадотропных гормонов из СЖК при. одновременном повышении степени очистки препарата и увеличении выхода гормонов по биологической активности. Цель достигается тем, что удаление балластных белков (общего белка) из СЖК осуществляют вначале 12-15%-ным раствором риванола (2-этокси-6,9диамино-акридии лактата), добавляемым в количестве 1 объема к 9 объвмг№1 СЖК. Выпавшие в осадок балластные белки отделяют. Вторичное осаждение общего белка проводят ацетоном при значении рН 8,5-9,0. Охлажденный ацетон добавляют в количестве, равиом 90-95% объема сыворотки, оставшегося после обработки ривоиолом. Выделение концентрата гормонов проводят путем добавления к очищенной СЖК ацетона до концентрации 70-75% и выдерживания в течение 30-60 минут при комнатной температуре. Полученный осадок отделяют, прокывгиот спиртом и эфиром, растворяют в дистиллированной воде и лиофилизируют. Активность препарата 220 м.ё./мг. Пример . К- 900 мл СЖК (консервированной 0,02% мертиолатом) с активност 2.00 м.е.. /МП добавляют при помешивани Ло мл 12-15%-ного раствора риванола JpH 5,8) и выдерживают смесь при комнатной температуре в течение 15-20 ми Обильный осадок отделяют центрифугированием при 3500 об/мин в течение 30 мин. Риванол из раствора удаляют добавлением хлористого натрия из расчета 10 г на литр путем отстаивания в течение 30 мин при температуре - -4-С. СЖК фильтруют через фильтровальную бу магу или центрифугируют в течение 15м при 3000 об/мин рН фильтрата по вышают до 8,5-9,6 добавлением 1 нормального раствора едкого натра. После этого добавляют охлажденный (42-.+ 4) ацетон в количестве 90-95% к оставшемуся объему сыворотки. Смесь выдерживают при комнатной температуре (+18+2 в течение 30-60 мин. Выпавшие в осадок неактивные белки отделяют центрифугированием (15мин при ЗОООоб/мин или фильтрованием через бумажный фильтр. К очищенной CXCK добавляют охлажденный ацетон до 17-75%-но концентрации. Через 30-60 мин смесь центрифугируют (15-20мнн при ЗОООоб/м для отделения гормонсодержащего ос ка. Осадок последовательно промыва ют 20 мл 96%-ного этилового, спирт и эфира, растворяют в дистиллированной воде .лиофилизируют. Полученный KOHtieHTpaT гормонов сос тавляет 0,7 г сухого вещества с актив ностью 220. м.е./мг. Использование предлагаемого способа получения концентрата гонадотропинов (Оваритропина) из сыворотки зкеребых кобый обеспечивает по сравнению с существующими способами следующие преимущества: более высокую степень очистки гонадотропинов (в 2-3 раза) без применения этилового-спирта; увеличение выхода гонадотропинов на 20-25%; сокращение времени производства препаратов с 2-3 суток до 1 рабочего дня (7-6 часов); исключение необходимости длительного осаждения СЖК ацетоном на холоду. Проверка аллергенных свойств препарата на морских свинках в реакции прямой пассивной анафилаксии показала отсутствие анафилактических признаков при введении гормонов в количестве 1200 м.е, на одно животное. Экономический эффект предлагаемого изобретения состоит в обеспечении возможности создания массового производства концентрата гонадотропинов СЖК, характеризующегося более высокой степенью очистки от сывороточных белков и пригодного для широкого использования в животноводческой и ветеринарной практике, а также в снижении стоимости изготовления препарата на 15-20% по сравнению с известным способом, Формула изобретения способ получения препарата гонадотропинов из сыворотки жеребых кобьш, включающий осаждение балластных белков из сыворотки и последующее выделение из нее гонадотропинов, о т л и чающийся тем, что, с целью уп.рощения процесса и повышения выхода гормона, осаждение балластных белков проводят путем обработки сыворотки вначале 12-15%-ным раствором риванола, добавленным к сыворотке в соотношении 1:9, в течение 15720 мин при, комнатной температуре, затем рН оставшегося объема сыворотки доводят до 8,5-9,0 и добавляют к ней охлажденный ацетон в количестве 90-95% по отношению к объему, после чего смесь выдерживают в течение 30-60 мин при комнатной температуре, а вьаделение гонадотропинов проводят при дальнейшем довелении в сыворотке концентрации ацетона до 70-75% и выдерживании смеси в течение 30-60 мин при комнатной температуре, Источники информации , принятые во внимание при экспертизе: 1, Авторское свидетельство №296573, кл, А 61 К 35/24, 1971,