Способ диагностирования зимостойкости генотипов яблони Советский патент 1980 года по МПК A01H1/00 

I

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции плодовых культур на зимостойкость.

Известен способ диагностирования генотипов яблони, при котором уровень зимостойкости сортообразца определяется реакцией фенотипа на резкие суточные колебания температуры по характеру изменения суммарного содержания крахмала во всех тканях однолетнего прироста

1.

ГЬ) такому способу .оценка зимостойкости сортообразца проводится в течение одного зимнего периода, но требуется обязательное искусственное воздействие переменными температурами и, следовательно, наличие термокамеры, а определение крахмала производится визуально, что не исключает субъективных ошибок, снижающих достоверность результата.

Известен также способ определения зимостойкости сортов яблони по состоянию рибонуклеиновой кислоты (РНК). У зимостойких сортов отмечается более

высокое содержание связанной с белком РНК в зимний период 21.

Однако этот способ требует повторения анализов в течение двух-трех лет и не всегда является четким тестом зимостойкости генотипа.

Цель изобретения - ускорение окончательной оценки зимостойкости сортооб- разцов и повышение достоверности результатов.

10

Это достигается тем, что на протяжении годичного цикла роста и развития определякгг реакцию фенотипа на естесг- .веш1ые . суточные колебания температуры среды по связи между соотношением своiSбодной и связанной форм рибонуклеиновой кислоты в коре однолетнего прироста и средней величиной суточной амплитуды температуры воздуха, накануне и в день анализа, а зимостойкость генотипов оце20нивают по величине коэффициента корреляции.

Способ осуществляют следующим образом.

Содержание и формы (свободная и свя- занная) РНК определяют ежемесячно в коре однолетних приростов гистофотометрическим методом на постояннык препаpafaK. Отрезки средней части однолетних приростов фиксируют смесью Карнуа, Препараты окрашивают пиронином Ж, Ин« тенсивность окраски оценивают на микрофотометре, например, типа МФ--4. Содержание РНК выражают в единицах оптической плотности. Свободную форму РНК определяют без предварительной обработки препаратов. Связанную форму РНК определяют путем обработки препаратов перед покраской безводным уксусным ангидридом. Контрольные препараты обрабатывают рибонуклеазой. По рзаультатам анализов высчитывают соотношение между формами РНК (свободная РНК: связанная РНК).

Затем рассчитывают среднюю ампли туду суточного колебания температуры за два дня (за день, предшествующий отбору, и день отбора проб). При переходе к отрицательным температурам или при колебаниях от положительных к отрицательным температурам и обратно знак при суточной амплитуде устанавливают по знаку среднесуточной температуры.

Далее вычисляют коэффициент корре ляции между соотношением форм РНК и величиной амплитуды колебания температуры воздуха за год..

Величина корреляции является тестом зимостойкости генотипов. У зимостойких сортов коэффициент корреляции лежит в пределах 0,00-0,50, у среднестойких в пределах О,50-0,70, у незимостойких в пределах 0,70-1,ОО.

П р и м е р . Из трех сортов яблони с заведомо известной, например для Приморского края, зимостойкостью (Амурское урожайное - зимостойкий, Джон Доуни - среднезимостойкий,. Боровинка незимостойкий) берут на анализ однолетние приросты.

Отрезки средней части однолетних приростов фиксируют смесью Карнуа и готовят постоянные препараты. Препараты окрашивают пиронином Ж. Для определения свободной формы РНК препараты окрашивают без предварительной обработ ,ки. Связанную форму РНК определяют путем обработки препаратов перед покрас-

кой безводным уксусным ангидридом, контрольные препараты обрабатывают рибокуклеазой. Интенсивность окраски препаратов оценивают на микрофотометре МФ-4. Содержание РНК выражают в единицах оптической плотности. Для вычисления соотношения форм РНК оптическую Ш1от{1ость свободной формы РНК делят на оптическую плотность связанной формы РНК, Результаты анализа форм РНК представлены в табл. 1.

Таблица 1

Среднюю амплитуду суточных колебаний температуры вычисляют следующим образом; 15.X.1973 суточная амплитуда колебания температуры была равна 17,1 (от - 3, до + 14,0°С), 16.Х.1973 суточная амплитуда колебания температуры была равна 7,9 (от + 2,8 С до + 10,7 С). Находят среднее арифметическое значение 17.1 + 7.9 1,5.

Знак при амплитуде устанавливается (+12,5).

Такие же. процедуры проделывают и в другае сроки. По полученным данным рассчитьгоают коэффициент корреляции между соотношением форм РНК и величиной амплитуды колебания температуры в соответствующие сроки-аа год.

В табл. 2 приведены данные корреляции между соотношением форм РНК и величиной суточной амплитуды температуры воздуха.

Таблица 2