Способ определения степени дегидратации стекловидного тела Советский патент 1981 года по МПК G01N24/08 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ДЕГИДРАТАЦИИ

1

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки дегидратирующего действия препаратов, используемых в офтгильмологии, в частности для лечения глаукомы.

Известен способ определения степени дегидратации стекловидного тела, заключакяцийся в том, что через отверстие в роговой оболочке на переднюю поверхность хрусталика помещают груз и по степени его смещения определяют уменьшение или увеличение объема стекловидного тела,на основании которого судят о степени его дегидратации Ci .

Однако этот способ неточен, поскольку отклонение груза может происходит не только в результате дегидратации, но и за счет натяжения циновых связок и работы цилиарной мьпицы. Кроме того, в этом способе не учитывается влияние давления со стороны тканей, окружающих глазное яблоко, а также эластичность склеральной капсулы.

При осуществлении этого способа нв носится обширная травма глаза (кератоэктомия и введение в переднюю камеру глаза крупного инородного тела), что вызывает ответную реакцию глаза. СТЕКЛОВИДНОГО ТЕЛА

а в стекловидном теле эта реакция может проявиться в виде изменения числа гидратации.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ определения степени дегидратации стекловидного тела, основанный на определении количества воды, поглощенной препаратом из стекловидного тела. В этом способе оценивают степень дегидратации при помощи вискозиметра f 2 J.

Однако этот метод нельзя признать точным и объективным, так как не существует полного параллелизма между вязкостью стекловидного тела и содержанием воды. Вязкость стекловидного тела определяется не только содержанием воды, но и содержанием мукополисахаридов, в частности гиалуроновой кислоты, а также рН стекловидного тела.

Цель изобретения - повышение точ-ности способа.

Поставленная цель достигается тем, что в способе определения степени дегидрации стекловидного тела, основанном на определении количества во.цы, поглощенной препаратом из стекловидного тела, снимают спектр ядерного

агнитного резонанса (ЯМР) дегидратированного образца при 1-25 С, затем образец охлаждают до (-10)-(-14)с, выдерживают при этой температуре 4560 мин, вторично снимают спектр ЯМР и вычисляют отношение площади под сигналом поглощения воды при (-10)(-14) С к площади при , далее аналогичным образом при тех же температурах снимают спектры ЯМР и вычисляют отношение площадей для интактного образца, после чего определяют степень дегидратации исследуемого образца,

В основе способа лежит тот факт, что ниже в биологических объектах остается невымороженной вода, молекулы которой непосредственно связаны с гидрофильными, центрами биологических макромолекул и других веttecTB, входящих в состав биологичес кого материала.

В спектре ядерного магнитного резонанса (ЯМР) высокого разрешения таких объектов при низких температурах сигнал молекул воды регистрируется в виде сравнительно узкой полосн, интенсивность которой пропорхшонапьиа количеству невымороженной (т.е. связанной) воды .

Установлено, что при дегидратации .стекловидного тела глаза происходит гготвря свободной воды, а количество связанной воды (в расчете на едиНШ1У сухого веса стекловидного тела) остается неиэменньш.

депщратадий стекловидного тела интенсивность линии ЯМР невыморожевной sopfn в нем ста1 овится больше, чем в случав интактного обра ца такого же объема, поскольку в результате потери свободной воды возрастает концентрация белковых макромолекул и другкх веществ в ис-г следуемом объекте.

Из сравнения интвнсивностей линий ЯМР воды в замороженных интактиг х: и дегидратированньзк образцах глзжно найти степень дегидратации.

Способ осуществляют следуквдим образом.

Через 30-45 VSKH после внутривенного введения двгидратанта.энуклеирук)т глаза животного и извлекают стекловидное тело, которое помещают в пробирку спектроьютра ЯМР вместе с эталонным в цеством - тетраметилсила HOfJi (тмс), находящимся в. запаянном с еклянном капилляре. При 1-25с снимжот протонный спектр ЯМР, после че го образец охлаждают до{-10) -(-14fc вьадерживают при этой температуре 45-60 мин и снова снимают спектр ЯМР

Для каждого из спектров находят отношение площадей под сигналами поглощения воды и ТМС. Первое из этих отношений h (при 1-25 С) является . мерой количества всей воды в образце в относительных JЭДИHицax, второе

hj, (при (-10)-(-14 ГО- мерой количества невымерзшей или связанной воды в тех же единицах. Разделив второе отношение на первое, находят количество связанной воды относительно всей воды в стекловидном теIT, -

ле:

TUj. - -7

ГЦ

Аналогичным образом проводят и змерения и вычисления отношения площадей под сигналами воды и TMG, и hji для интактного стекловидного тела количество связанной воды Ьо в кото ром принимают за контроль. Степень дегидратации стекловидного тела d находят по формуле

l((,

Пример. Кролику внутривенно вводят дегидратант-полиэтиленоксид с молекулярной массой 400 ГПЭО-400) в виде 20% раствора, содержащего на 1 кг массы кролика 1,5 г -чистого вещества. Через 30 мин глаз энуклеир т и извлекают стекловидное тело. Объект помещают в ампулу спектромет- ра ЯМР вместе с эталоном - Т№С в за паянном стеклянном капилляре. Ампулу помещают в датчик спектрометра ЯМР высокого разрааения РН-2305 с рабочей частотой 60 МГц для протонов и снимают спектры ЯМР. На фиг. 1 представлен спектр ЯМР, полученный при 25 С. Отношение площадей под сигналами воды и ТМС, h для этого спектра равно 17,96. После этого объект охлаждают непосредственно в датчике спектрометра до , выдерживают при этой температуре 45 тин и снова снимают спектр ЯМР (фиг. 2JI.. Из полученного спектра находят отношение площадей под сигналами поглощения воды и ТМС hat hj. 0,622.

На основании полученных результат тов вычисляют количество связанной

j воды f в безразмерных единицах относительно всей воды образца) в стекловидном теле глаза кролика после гвведения ПЭО-400.

0,(64i

O -n - « Аналогичным образом проводят ио-5 следования на интактных глазах, откуда находят количество связанной вода (в тех е безразмерных единицах в интактном стекловидном теле

Ь 0,02754

Полученные величины Ь и Ь используют для расчета степени дегидратации стекловидного тела под действием ПЭО-400

{1-Ш)/(Ж (-ь

юо7о-0-§|Ш1К - °/„

Предлагаемый способ обеспечивает N высокую точность определения степени дегидратации стекловидного тела (погрешность способа +15%), поскольку при его осуществлении исследуется трлько стекловидное тело и на точность определения не могут влиять та кие факторы, как давление со стороны тканей, окружающих глазное яблоко, эластичность склеральной капсулы,. натяжение циновых связок и работа цилиарной мышцы.

Спсооб позволяет непосредственно определять степень дегидратации стекловидного тела, а не судить об этом косвенно, как в известном способе судят об згам по изменению объема стекловидного тела.

Формула изобретения

Способ определения степени дегид1ратации стекловидного тела, осиоаанШй на определении количества воды, п гло1ценной препаратом из стекловидкого тела, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, снимают спектр ЯМР дегидратированного образца при , за,тем образец охлаждают до (-10). (-14).С, выдерживают при этой температуре 45-60 мин, вторично снимают спектр ЯМР и вычисляют отношение плог щади под сигналом поглсяцения воды при (-10)-(-14)С к площади при 125с, далее аналогичным образом при

o тех же температурах снимают спек;Тры ЯМР и вычисляют отношение пло|щадей для интактного образца, после чего определяют степень дегидратации исследуемого образца.

S

Источники информация, принятые во внимание при экспертизе

1. Buccl H.S. et Ос« 4tlst% 1968, 47, б, р.407-416.

2. Керова И.К. Применение мочевины в офтальнологической практике, Вестник офталь-мологии, 1965, 9 б, с. 65-68 (прототип).

тмс