Способ качественного определения феомеланина в шерсти животных Советский патент 1982 года по МПК G01N33/00 A01K67/02 

Изобретение относится к технике I лабораторных исследований, в частности касается способа определения пигмента, феомеланина в шерсти животных, и может быть использовано в селекционно-племенной работе в каракулеводстве для установления типа пигмента определяющего окраску каракульских смушков, особенно цветных, уточнения признаков отбора и выяснения особенностей пигменто . образования.

4 .

Различия расцветок волосяного покрова Я0НЯТ каркульской породы обусловлены присутствием в волосах красящих веществ черного или темнокоричневого эумеланина и желто-красного феомеланина.

Известен способ определения феомеланина в шерсти животных, с помощью составления кривых поглощения света видимого диапазона,выделенног.о с помощью кислотного разрушения

шерсти пигмента, который растворяется затем в слабом растворе КОН tl}.

Недостатком метода cjieKTpoMeTpHH щелочных растворов является низкая производительность, большой расход энергии, обусловленные необходимостью кипятить пробы шерсти в соляной кислоте по 2,5 часа для вьделе-ния меланина, а также большой расход шерсти (порядка 0,5-1 г) на пробу,

10 что означает повреждение дорогого смушка на большой доле его площади.

Цель изобретения - сокращение сроков выявления феомеланина шерсти.

Поставленная цель достигается

15 тем, что физико-химический анализ проводят с помощью ЭПР-спектроскопии, причем о наличии феомеланина в шерсти животных судят по дополнительному пику на спектрограмме с

20 q-фактором 2,013-2,013.

Пример. Для реализации способа используют ЭИР-спектрометр 31iA-2.M и другие более совершенные 3 радиоспектрометры. С незагрязненной кожи новорожденного или с необработанной шкурки забитого ягненка состригают около 40-80 мг шерсти, моют ее в двух сменах ксилола и вы сушивают при комнатных условиях до исчезновения запаха ксилола. Навеску шерсти 20-40 мг помещают в капил ляр, подвергают ЭПР-спектрометрии с записью сигнала в виде первой производной ЭПР-сигнала. ЭИР-спектр метр настраивают так, чтобы Зо сигн ла бьша максимальной, минимум и мак симум первой производной помещались на бумажной ленте. Скорость движен бумажной ленты должна быть такой, чтобы ширина основного сигнала ДН составляла 8-15 мм. Если волосы содержат фермеланин, наряду с основны максимумом сигнала наблюдается доимеет q-фактор на 0,007-0,008 больши чем q-фактор основного сигнала (2,004-2,006). Расстояние от вершины дополнител ного пика до нулевой линии в образцах шерсти богатых феомеланином до- стигает 18-23% от основного сигнала В образцах, где наряду с феомеланином присутствует эумеланин относительная величина (filiyo0%) второго пика снижается и он становится мало заметным. Поэтому, если важно обнаружить сравнительно небольшую при месь феомеланина к эумеланину прибор ЭИР-спектрометр настраивает на большую чувствительность, что исключает запись минимума и максимума первой производной ЭПР-основного сигнала на бумажной ленте, но позволяет более четко выявить дополнительный пик, если он имеется. На фиг. 1-4 изображены примеры записанных на 3-сантиметровом радио спектрометре (Э11А-2М) ЭПР-сигналов образцов шерсти ягнят каркульской породы различных оттенков и расцветок: черной, обусловленной зумеланином (1), темно-коричневой (2), красной, обусловленной феомеланином (З) и светло-коричневой (4), которая как и темно-коричневая обусловлена присутствием в шерсти как зу-, так и феомеланина. На фиг. 1, 2 и 4, слева, а также на фиг. 3 изображены записи ЭНР-сигналов при усилергиях, позволяющих поместить максимум и минимум первой производной сигнала в пределах ширины бумажной ленты пишущего потенциометра .i Справа на фиг. I, 2 и 4 помещены сигналы при большем усилении, четко выявляющие слабый дополнительный nHKq с q-фактором (у вершин), равным 2,013-2,015. Из чертежа видно, что относительно крупный дополнительный пик характерен для красно-коричневого оттенка. Он относительно слабый у темнЪкоричневого и светло-коричневого образцов, ЭИР-сигнал которых обусловлен преимущественно зумеланином. В черном образце дополнительный пик вообще отсутствует. Вершине дополнительного пика соответствует q-фактор 2,013-2,015, т.е. больший, чем q-фактор основного сигнала (2,0042,006). Стрелкой обозначено направление возрастания магнитного поля. На стрелке отложен масштаб, позволяющий оценить ширину ЭПР-сигнсша в единицах напряженности магнитного поля Э (фиг. З). Проверка полученных данных на основе сопоставления данных ЭПР-спектрометрии со спектрофотометрией щелочных растворов меланина тех же образцов в разных участках видимого спектра показала, что во всех случаях, когда методом спектрофотометрии идентифицировался феомелаНИН, ЭИР-спектрометрически обнаруживалось присутствие дополнительного пика на ЭПР-спектрограмме. Преимущество предлагаемого способа состоит в том, что на анализ одного образца шерсти затрачивается всего 1-2 мин времени, не тратится время и энергия на химическое разрушение шерсти, требующее нескольких часов. Исследованный образец сохраняется в целостности и пригоден для других видов исследований. Количество шерсти, необходимой для исследования, а следовательно, и площадь шкурки, с которой она. состригается, в несколько раз меньше, что сокращает ущерб ценному сырью (каракульским смушкам), причиняемого исследованиями. Указанные преимущества метода Позволяют гораздо шире использовать в селекционной работе с цветньм каракулем определение феомеланина в шерсти и тем способствовать повьшению эффективности этой работы.