Среда для разбавления и замораживания спермы быков Советский патент 1982 года по МПК A61D7/02 

(5) СРЕДА ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ И ЗАМОРАЖИВАНИЯ

. I

Изобретение относится к рецептуре сред для разбавления и замораживания спермы быков и может быть использовано в сельском хозяйстве на станциях искусственного осеменения животных.

В связи с массовым искусственным .осеменением животных существует необходимость в длительном хранении спермы. Для этого сперму разбавляют в специальных средах и замораживают в виде гранул, в облицованных гранулах или в соломинках. Форма замораживания определяется свойствами среды. Перед употреблением сперму размораживают. Качество размороженной спермы оценивают по ее оплодотворяющей способности, определяющейся активностью спермы (балл) и ее выживаемостью (ч) и зависит прежде всего от сройств среды, выбранной для разбавления и замораживания. В связи с этим необходимо разрабатывать новые и совершенствовать йзвес.Т СПЕРМЫ БЫКОВ

ные составы сред, позволяющие хранить сперму длительное время с сохранением ее качества.

Известна среда для разбавления и замораживания спермы быков П1, включающая, вес.%: Центрифугат водной суспензии куриного желтка15,0-16,0

Цитрат натрия 1,78-1,88

to Аминазин {2, водный раствор)0,2-0,26

Глюкоза 3, Трилон Б0,1-0,22

IS

ГликоколО,1-0,И

Двузамещенный

.фосфат натрия 0,02-0,08 Глицерин,5-, 6

Дистиллирован20ная водаОстальное Среда для разбавления и замораживания спермы быков представляет собой прозрачный коллоидный раствор 3919675 с рН и осмотрическим давлением, равным 7,0 атм. Среда позволяет определить качество спермы сразу после разбавления и пригодна для разбавления в соотношении от 1;1 j до 1:3. Такое разбавление позволяет оплодотворить в год около 1000 коров спермой одного быка. Срок хранения среды около двух лет. Однако среда не пригодна для зна- to чительного разбавления, так как может .нарушить протекающие в сперме ферментативные процессы. Вместе с тем разбавленная сперма, содержащая 30 млн.,;ед. в спермодозе, характери- 5 зуется оплодотворяющей способностью около 61. Кроме того, сперма, разбавленная известной средой, пригодна для замораживания только в виде гранул.20 Целью изобретения является повышение оплодотворяющей способности спермы быков после размораживания. Поставленная цель достигается тем, что среда для разбавления и за- 25 мораживания спермы быков дополнительно содержит лимонную кислоту при следующем соотношении компонентов, вес.%: Центрифугат водной30 суспензии куриного со с ни ля но ра сп ко по в ла 5 ни в Аминазин (2,5%-ный водный раствор) 0,08-0, 3,00-,20 Глюкоза 0,06-0,22 Трилон Б О,08-0,И Гл и ко ко л Двузамещенный 0,02-0,08 фосфат натрия 5,00-8,00 Глицерин Лимонная, 0,002-0,004 кислота ДистиллированОстальноеная вода до 1001 Предлагаемая среда представляет бой прозрачный коллоидный раствор рН 6,2-6,65 с осмотическим давлеем, равным 10-12 атм. Среда позвоет разбавить сперму быков в соотшении от 1:1 до 1:128 раз. Такое збавление позволяет оплодотворить ермой одного быка около тыс. ров в год Кроме того, среда зволяет заморозить сперму быков виде гранул, в облицованных гранух и соломинках. Срок хранения предлагаемой среды лет при . Приготовление среды для разбавлея и замораживания спермы проводят соответствии с рабочими рецепту

Центрифугат водной суспензии куриного желтка

Цитрат натрия

Аминазин (2,5%-ный водный раствор)

Глюкоза

-Ч

Трилон Б

Гликокол

Двузамещейный фосфа

натрия .

Глицерин

15,0 15,5 15,0 16,0 16,0 1,75 1,72 1,80 1,80 1,85

0,0 0,06 0,0 0,08 0,08 6,00 о 7,00 6,30 5,00 8,00 Лимонная кислота 6-09-58 -75 0,002

Вода дистиллированная

Пример 1. Среду для разбавления и замораживания спермы готовят следующим образом.

В колбу наливают 75 мл кипяченой дистиллированной воды при iO-50 C и прибавляют 20-25 мл свежеотделенных куриных желтяков. Смесь взбалтывают до гомогенного состояния, отстаивают 10 мин и центрифугируют 3 мин при 500 об/мин. ПoлyчeJнный центрифугат сливают, отбирают из него аликтовую часть и прибавляют к ней остальные компоненты. При необходимости в состав среды вводят антибиотики. Объем смеси доводят до 100 мл дистиллированной водой.

Полученную среду для разбавления и замораживания стерилизуют по методу тиндализации при в течение 1 ч. После этого среда пригодна дапя разбавления спермы и замораживания ere 9 виде гранул,, в облицованных гранулах и соломинках.

Пример 2 о Сперму быков разбавляют при в предлагаемой среде, приготовленной по рецепту 1 (табЛо 1), Разбавление проводят в различных соотношениях.от 1:1 до 1:128 в зависимости от исходной ак/.

Активность спермы,

балл i, 35

,

9,3

Продолжение таблицы t

до 100 до 100 до 100 до 100 до 100

тивности и концентрации спермы.. Полученный раствор выдерживают в холо-. дильнике при в течение J-B ч для эквилибрацйи. Затем разбавлен-, ную сперму замораживают жидким азотом по общепринятой методике в гранулах, облицованных гранулах и соломинках.

Замороженную сперму хранят 30 дней в среде жидкого азота в сосуде Дюара.

По истечении этого времени сперму, -замороженную в виде гранул, размораживают в среде, содержащей, г: пятиводный цитрат натрия 1,75-1,85, глюкоза А-6 и трилон Б 0,06-0,15 на 100 мл дистиллированной воды, при 38 С Сперму, замороженную в соломинках или облицованных гранулах, размораживают без разбавителя. Затем по стандартной методике определяют активность и выдерживаемость спермы.

В табл 2 представлены результаты определения этих величин для размороженной спермы, полученной от 10 быков, разбавленной в различном соотношении и замораживаемой в виде гранул.

о

Таблица 2

, ,50 i,50

,А5

«,50

10,3 9,1

10,0

9,1

9,5 0,002 0,003 0,0035 0,00 Из табл. 2 следует, что разбавл ние спермы даже в 128 раз не вызыв ет снижения ее активности и выживае мости. Формула изобретения Среда для разбавления и замораживания спермы быков, включающая центрифугат водной суспензии курин го желтка, цитрат натрия, аминазин глюкозу, трилон Б, гликокол, глице рин, двузамещенный фосфат натрия и дистиллированную воду, о т л ио чающаяся тем, что, с целью повышения оплодотворяющей способно ти спермы, среда дополнительно содержит лимонную кислоту при следующем соотношении компонентов, вес.: Центрифугат водной суспензии куриного 15,0-16,0 желтка Цитрат натрия 1,72-1,85 миназина 2,5%-ный 0,08-0,2 одный раствор 3,00-,20 Гл1бкоза 0,06-0,22 Трилон Б 0,08-0,14 Гликокол Двузамещенный 0,02-0,08 фосфат натрия 5,00-8,00 Глицерин Лимонная 0,002-0,004 кислота Водадистиллированная Остальное до 100% Источники информации, нятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР 36824, кл. А 61 D 7/02,