Среда для разбавления спермы Советский патент 1979 года по МПК A61D7/02 

1

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных.

Защитные среды или разбавители, применяемые в искусственном осеменении животных, используются как для увеличения объема полученной спермы, так и для поддержания многих ее биологических свойств, в том числе удлинения срока жизни сперматозоидов, повышения их активности, поддержания процессов гликолиза и дыхания, повышения оплодотворяющей способности и т. д. 1. С этой целью в разбавители вводится ряд веществ органического и неорганического происхождения, должных обеспечивать оптимальные условия для жизнедеятельности сперматозоидов.

В настоящее время создано значительное количество защитных сред для разбавления и замораживания спермы, в том числе и среды для оттаивания и дополнительного разбавления спермы, замороженной в гранулах объемом 0,1-0,2 мл. На станциях искусственного осеменения для оттаивания и дополнительного разбавления спермы, замороженной в виде гранул объемом 0,1- 0,2 мл, используются среды, состоящие из лимоннокислого натрия и глюкозы, растворенных в дистиллированной воде 2.

Эти среды обеспечивают в основном хорошее качество спермы после ее оттаиваиия, однако не являются биологически оптимальными для сперматозоидов и требуют совершенствования.

Учитывая исключительную важность набора компонентов, входящих в состав разбавителя, и Их влияние на качество спермы после оттаивания, за основу была взята среда, рекомендуемая инструкцией по искусственному осеменению для оттаивания гранул объемом 0,1-0,2 мл 3. Среда имеет следующий состав компонентов: на 100 мл дистиллированной воды 3,1 г натрий лимоннокислый, 1 г глюкоза медицинская. Эта среда обеспечивает активность спермы быков после оттаивания 4-5 баллов и живучесть при 37°С в течение 4-6 ч.

Недостатком указанной среды для разбавления семени является ее отрицательное влияние на биологическую активность спермиев.

С целью увеличения живучести сперматозоидов и их оплодотворяющей способности, а также активности в состав среды для оттаивания и разбавления гранул спермы объемом 0,1-0,2 мл введен экстракт ткани, содерлсащей большое количество гиалуроновой кислоты и пировинограднокислый натрий (ТУ 6-09-483-70), отвечающий формуле СзНзОзМа при следующем соотношении компонентов, вес. %: Лимоннокислый натрий 2,78- 3,07 Глюкоза0,42- 1,15

Пировинограднокислый

натрий0,09- 0,24

Экстракт животной ткани 5,75-12,46 ВодаОстальное

При добавлении гналуроновой кислоты к сперме происходит связывание воды, в результате чего увеличивается концентрация осмотически активных веществ - Сахаров, солей, увеличивается вязкость жидкостей. Это способствует повышению устойчивости сперматозоидов к колебаниям температуры, больщей их сохранности и живучести после оттаивания и препятствует быстрому вытеканию разбавленной спермы из шейки матки при осеменении коров, что ведет к повышению оплодотворяемости яйцеклеток.

По данным 1 введение в разбавитель экстракта животной ткани, являющегося биостимулятором, способствует увеличению сроков переживаемости сперматозоидов и повышению оплодотворяющей способности спермы. Предполагается, что при добавлении биостимулятора вносятся коферменты, которые будучи неспецифичными могут восстанавливать в сперматозоидах необходимый уровень течения реакций, в основном реакции гликолиза.

В качестве источника лсивотной ткани в предлагаемой среде для получения экстракта взята водянистая влага глаза вместе со стекловидным телом. Экстракт готовят из свежей ткани.

Добавление в разбавитель пировинограднокислого натрия удлиняет исходный уровень дыхания сперматозоидов и способствует более длительной их переживаемости. Пример. Сперму животных (быка) разбавляли лактозо-желточным разбавителем (11,5 г лактозы растворяется в 100 мл дистиллированной воды и добавляется 20 мл яичного желтка и 5 мл глицерина или берется 63 мл 11%-ного раствора лактозы, добавляется 30 мл желтка и 7 мл

глицерина) и замораживали в форме гранул, объемом 0,1-0,2 мл на фторопластовой пластине. После этого замороженную сперму размораживали путем разбавления в предлагаемой среде следующего состава,

вес. %:

Лимоннокислый натрий2,97

Глюкоза0,96

Пируват натрия0,19

Экстракт животной ткани 11,02

.::Водадо 100

Для размораживания одной гранулы брали 0,9-1 мл предлагаемой среды и определяли активность и выживаемость спермы и производили осеменение коров. Телята, полученные от коров, осемененных спермой с предлагаемой средой, рождались нормальными, никаких отклонений в состоянии половых органов или заболеваний у коров не наблюдалось.

Использование предлагаемой среды, включающей экстракт животной ткани с большим количеством гиалуроновой кислоты и Пировинограднокислый натрий, обеспечивает активность спермы после оттаивания 4-5,5 баллов, переживаемость при 37°С - 9-10 ч, тогда как при использовании среды прототипа была активность 4-5 балла, переживаемость нри 37°С - 4-6 ч. В табл. 1 представлена биологичеекая полноценность испытуемых сред.

Таблица 1

Оплодотворяемость коров по первому осеменению составила 69,3%, что на 15,9% выше, чем при использовании среды прототипа. В табл. 2 приведены результаты осеменения скота с предлагаемой средой и средой - прототипом (контроль).

Предлагаемая среда превосходит среду прототипа по активности сперматозоидов после оттаивания на 0,5 балла, по переживаемости на 3-4 ч и по оплодотворяющей способности на 10,5-31,6%.

Использование предлагаемой среды позволит повысить Оплодотворяемость скота

и получить от 1000 коров дополнительно 60 телят в год. Кроме того, за счет сокращения сервис-периода на 20-30 дней будет получено дополнительное количество молока от новотельных коров. Общая экономическая эффективность в расчете на 1000 коров составит сумму 20-25 тыс. руб. Формула изобретения Среда для разбавления спермы преимущественно быков, состоящая из лимоннокислого натрия, глюкозы и воды, отличающаяся тем, что, с целью повышения биологической активности спермиев, она дополнительно содержит пировинограднокислый натрий и экстракт животной ткани при следующем соотношении ингредиентов, вес. %: Лимоннокислый натрий 2,78- 3,07 Глюкоза0,42- 1,15 Пировинограднокислый 0,09- 0,24 натрий

Т а б л « ц а 2 Экстракт животной ткани 5,75--12,46 ВодаОстальное Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1.Увеличение сроков хранения спермы и повышение оплодотворяемости животных путем применения биостимуляторов. Харьков, «Прапор, 1965. 2.Семаков В. Г. Совершенствование методов замораживания спермы быков. М., ВНИИТЭИСХ, 1977. 3.Инструкция по искусственному осеменению коров и телок. М., «Колос, 1969.