Способ определения степени очистки биологических жидкостей сорбентами при экстракорпоральной детоксикации Советский патент 1982 года по МПК G01N33/48 

вестного способа приводит к значителным ошибкам. Кроме того, в случае гемосорбции, во всех пробах крови необходимо определять показатель гематокрита, так как его величина в ходе перфузии варьирует в интервале до 30%, а концентрация практичеки всех токсических агентов определяется в плазме.,

В случае извлечения из крови или биологических жидкостей малосорбируемых компонентов, или при относительно высокой скорости гемоперфузии известный способ практически не применим, так как разность концентраций извлекаемых компонентов на входе и 1Выхрде из колонки находитсяв пределах ошибки анализа.

Цель изобретения -.повышение точности и чувствительности способа.

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения степени очистки биологических жидкостей сорбентами при экстракорпоральной детоксикации путе исследования содержания токсических веществ сорбент после проведения сорции отделяют от биологической жидкости, выделяют сорбированные им вещества, проводят из идентификацию и по их количеству определяют степен очистки биологических жидкостей.

Способ осуществляется следующим образом.

После проведения экстракорпоральной детоксикации, сорбент промывают физиологическим раствором или центрифугируют, после чего сорбированные компоненты вытесняют подходящими элюентами и их концентрация в растворе определйется стандартными, затем производят перерасчет на все . количество сорбента. При необходимости для упрощения анализа и повышения его точности анализируемые компоненты концентрируют, отгоняя растворитель.

Способ позволяет также проводить идентификацию неизвестных токсически х агентов белковой природы, сконцентр,ированных на сорбенте. С этой целью проводят фракционирование сорбированных белков и их комплексов с токсическими веществами с последующим определением белковых фракций иммунохимическими и биохимическим методами, а также оценкой их токсичности биологическими тестами.

При определении количества сорбированных соединений белковой природы, удерживаемых на сорбенте очень прочными связями, в том числе полиэлектролитными взаимодействиями предлагается проводить их частичный или полный гидролиз с последующими определением в гидролизате полипептидов или аминокислот и пересчетом на исходное количество белка.

При анализе неорганических соединений (. ионы тяжелых металлов, неорганический фосфор и т.д.7 сорбент подвергают полной деструкции путем мокрого сожжения в смеси серной кислоты и окислителя, например азотной или хлорной кислоты, с последующим анализом полученного раствора.

Пример. Гемосорбент МХТИ-2 . полученный на базе сильноосновного анионита, после проведения гемосорб1ции у больного с печеночной недостаточностью и гипербилирубинемией промывают в колонке 50-ю объемами физиологического раствора, отбирают 10 мл влаж-ного гемосорбента и центрифугируют при 2000 CV в течение 5 мин. затем высушивают в вакууме над РО до постоянного веса. Навеску сухого гемосорбента (около 3 г) экстрагируют в аппарате Сокслета 50-ю мл хлороформа в течение 6 ч, затем в экстракте определяют концентрацию билирубина по методу Индрашека. Сорбция билирубина, определенная по описанному методу, составляет 1,2 мг/г сорбента, по данным расчета из выходных кривых сорбции - 1,0 мг билирубина на 1 г сорбента.

П р и м е р 2. Гемосорбент на базе модифицированного алюмосиликата после проведения гемосорбции у кролика с моделью гиперхолестеринемии промывают в колонке 50-ю объемами физиологического раствора, центрифугируют при 10000 q/ в течение 60 мин, затем высушивают в вакууме над до постоянного веса. Навеску сухого сорбента (около 2 Гх экстрагируют в аппарате Сокслета 50 мл смеси хлороформ : метанол в соотношении 2:1 в течение 6 ч. Затем экстракт концентрируют, удаляя растворитель на роторном испарителе и определяют концентрацию холестерина. Емкость алюмосиликата по холестерину составляет 2,7 мг/г.

П р и м е р 3- Гемосорбент МХТИ-2 полученный на базе макропористого сулфокатионита после проведения гемосо ции у больного с гиперкалиемией, промывают в колонке 50-ю объемами физраствора. 5 мл влажного гемосорбента центрифугируют при 2000 ( в течение kS мин, затем переносят в к бу, заливают 50 мл водного 0,5 М раствора соляной кислоты и выдерживают при перемешивании в течение 10 Затем сорбент отделяют, промывают водой до нейтральной реакции и суша в вакууме над КОН до постоянного веса. Соляную кислоту после элюирования нейтрализуют водным раствором аммиака и определяют в растворе содержание ионов калия. Емкость гемосорбента МХТИ-2К, определенная по описанному способу, составляет 0, мэкв ионов калия на 1 г, расчет по выходным кривым сорбции дает величину О,38 мэкв/г. Пример. Гемосорбент на базе активного угля СКТ-6а после проведения гемосорбции у больного с отравлением люминалом промывают в к лонке 50-ю объемами физраствора, отбирают 10 мл влажного сорбента, центрифугируют при 5000 ( в течение (30 мин, затем высушивают в вакууме над Ра.05 до постоянного веса. НаfeecKy сухого сорбента Соколо 3 г экстрагируют в аппарате Сокслета 50 этанола в течение 8 ч и затем определяют в экстракте концентрацию люминала по общепринятой методике. Сорбция люминала, определенная по описанному способу, составила 3,6мг рассчитанная из данных.анализа крови до и после колонки ,1 мг/г. П р И М е р 5- Гранулированный ак тивный уголь марки ИГИ, полученный на основе каменноугольного сырья, после проведения гемосорбции у больного псориазом, промывают 50-ю объемами физраствора. 5 мл влажного угля центрифугируют при 2000 q, в течение 20 мин, заливают 5 мл 0,5 М водного раствора выдерживают при и перемешивании в течение 60 мин. Элюат отделяют центрифугированием при 3000 с в течение 15 мин затем подвергают иммунодиффузионному анализу с использованием стандартных тест-систем к индивидуальным сыворотомным антигенам,а также проводят диск-электрофорез и определяют общий белок. В элюате определень и пересчитаны на 1 г сухого угля: 0,008 мг/г альбумина, 0,0 мг/г JgG , 0,01 мг/г iJgA , 0,00 мг/г Ос -глобулина. П р и М е р 6. Гемосорбент на базе силикагеля марки КСК промывают в колонке 50-ю объемами физраствора, затем центрифугируют при 2000 в течение 60 мин. 3 г силикагеля (в пересчете на сухой вес ) инкубируют с 5 мл сыворотки донора в течение 1 ч при 35 С и перемешивании, после чего сорбент отделяют от сыворотки центрифугированием при 5000 с в течение kS мин, промывают 150 мл физрастворе, отделяют от физиологического раствора и обрабатывают 5 -мл 0,2 М раствора в течение 5 мин при 35 С и перемешивании. Элюат отделяют центрифугированием при 3000 CJ. в течение 15 мин, затем подвергают иммунодиффузионному анализу использованием стандартных тестсистем к индивидуальным сывороточантигенам, а также проводят диск-электрофорез и определяют общий белок. I Данные анализа : силигатель сорбировал 0,25 мг/г альбумина, 0,07 мг/г трансферрина 0,007 мг/г П р и М е р 7. Гемосорбент на базе активного угля АР-3 после проведения гемосор бции у больного с печеночной недостаточностью промывают 50-ю объемами дистиллированной воды и ЗО-ю объемами физраствора. 10 мл влажного гемосорбента центрифугируют при ZOOO С в течение 15 мин, затем заливают 150 мл 20 -ного водного раствора соляной кислоты и выдерживают при и перемешивании в течение 5 ч. Затем сорбент отделяют, промывают водой до нейтральной -реакции и высушивают в вакууме до постоянного веса. Раствор кислоты после гидролиза белка на сорбенте нейтрализуют 35%-ным водным раствором NaOH и определяют в нем концентрацию белка биуретовой реакцией с калибровкой по гидролизованному в аналогичных условиях альбумину; . Количество белка, сорбированное из крови углем АР-3, составляет 6,1 мг/г. П р и М е р 8. Гемосорбент на базе тиофосфонового макропористого катионита после проведения гемосорбции у собаки, затравленной сулемой, промывают в колонке 50-ю объемами физраствора, отбирают 10 мл влажно- i го сорбента и высушивают в вакууме над постоянного веса. Навеску сухого гемосорбента (около 1 г) помещают в колбу Кьельдаля, заливают 20 мл концентрированной серной кислоты, нагревают до обугливания и кипятят около 15 мин. Затем к кипящей смеси добавляют по каппян 10 мл концентрированной азотной кислоты и кипятят до обесцвечивания раствора. Смесь охлаждают, нейтрализуют и определяют содержание ртути по реакции с дитизоном. Сорбция ионов ртути из крови. определенная описанным методом, сое тавляет 0,30 мг/г, расчет из выходных кривых сорбции дает величину 0,33 мг/г. Предлагаемый способ по сравнению с известным, заключающимся в расчете из выходных кривых, характеризуется более высокой точностью, а также более широкими возможностями в плане анализа количества компонентов, сорбирующихся в небольших количествах. В таблице приведены статистически обработанные данные серий гемосорбций на животных и данных стендовых испытаний ряда гемосорбентов. Величина доверительного интервала рассчитана для вероятности Р /0,95.

1,00 t 0,21 Билирубин, мг/г Холестерин, мг/г Не может быть проведен0,38 + 0,0 Калий, мэкв/г 0,33 + 0,16 Ртуть, мг/г k, ± 1,6 Люминал, мг/г Общий белок, 5,8 + 1,2 6,1 +0,4 мг/г

Таким образом, применение предлагаемого способа позволяет значительно повысить точность определения ко1,20 + 0,05 2,7 t 0,3 0,41 +0,02 0,30 + 0,0 3,6 t 0,5

личества сорбированных компонентов в случае, когда сорбция может быть рассчитана по известному способу ХТИ-2А осиликат ХТИ-2К СТФ КТ-6А

993 37610

Обработки выходных кривых. Кроме того, ческих веществ, отличающийспособ по сравнению с известным имеет с я тем,что, с целью повышения точзначительно более высокую чувствитель- нести и чувствительности способа, ность, позволяя определить микроколи- сорбент после проведения сорбции чества сорбированных компонентов (на- 5 отделяют от биологической жидкости, пример, иммуноглобулинов).выделяют сорбированные им вещества, Формула изобретенияки биологических жидкостей.

Способ определения степени очист- ° Источники информации, ки биологических жидкостей сорбентами принятые во внимание при экспертизе при экстракорпоральной детоксикации 1. Лопухин Ю.М., Молоденков М.Н. путем исследования содержания токси- Гемосорбция. М., Медицина, 1978;

проводят их идентификацию, и по их количеству определяют степень очист