Способ определения направленности течения циррозов печени Советский патент 1982 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к медицин а именно к гепатологии.

Известен способ, определения направленности течения циррозов печени путем определения фермента в сыворотке крови спектрофотометрически Ij.

Однако известный способ является длительным и трудоемким.

Цель изобретения - ускорение анализа.

Поставленная цель до.стигается тем, что при осуществлении способа определения направленности течения циррозов печени путем определения фермента в сыворотке крови спектрофотометрически , определяют активность кислой ДНК-азы и при снижении ее активности относительно нормы определяют тяжелое.течение заболевания.

Способ осуществляется следующим образом.

В микропробирку вносят 20 мкл сыворотки крови, 20 мкл ацетатного буфера рН 5,. 0,120 мл раствора ДНК ( 1 мг на 1 мл ацетатного буфера). Смесь инкубируют 3 ч при в присутствии 20 мкл 1,6 М раствора кс. После инкубации добавляют 160 мкл 0,5 н. раствора . Содержимое отстаивают 25 мин в холоде, а затем центрифугируют при 4000 об/минУ 20 мин. Оптическую плотность измеряют при длине волны 260 нм на спектрофотометре против контрольного раствора, состоящего из 160 мкл адетатного буфера и 160 мкл 0,5 н. раствора Hclo. Активность фермента выражают в микромолях аденозинмонофосфата,

10 освобожденного в результате гидролиза ДНК за 1 ч инкубации, на IQO мл сыворотки крови. Величина ферментативной активности кислой ДНК-азы ниже 70 мкМ АМФ/ч свидетельствует

15 о течении цирроза печени.

С целью установления прогностического значения кислой ДНК-азы активность фермента была определена в сыворотке крови 24 больных с клини20ческими признаками цирроза печени. Диагноз цирроза ставился на основании тщательно собранного анамнеза, наличия в прошлом перенесенного вирусного гепатита и комплекса клинико25 лабораторных и инструментальных методов исследования. Все больные поступали в клинику в период обострения патологического.процесса. Активность кислой ДНК-азы определялась

30 при поступлении больного в стационар

и 3-4 раза в динамике заболевания. В табл. 1 представлены данные, свидетельствующие о величине активности кислой ДНК-азы в периоде обострения паталогического процесса.

Как следует из полученных результатов, выявляются существенные четкие различия в величинах активности кислой ДНК-азы у больных циррозом печени. Дальнейшее наблюдение за больными дозволило выявить аналогичную разницу. Как выяснилось, у больных, в сыворотке которых величин а активности кислой ДНК-азы колебалас от полного отсутствия в сыворотке до 70 мкМ АМФ/ч, в среднем 31,7 t + б,8мкМ АМФ/ч, цирроз был выраженнр активный с декомпенсированной пече ночно-клеточной недостаточностью. Течение цирроза было неблагоприятным и у 4 больных он закончился летальным исходом.

Основные клинико-лабораторные показатели, используемые для оценки тяжести цирроза печени, представлены в табл. 2.

Сравнительный анализ представленных параметров у больных двух групп показал, что такие клинические симптомы и лабораторные показатели, как слабость, похудание, повышение температуры, изменения со стороны крови, СОЭ, увеличение печени, селезенки, наличие отеков и асцита не могут в полной мере служить показателями тяжести цирроза, ибо они зависят от психоневрологического статуса больного, наличия сопутствующих заболеваний и др. Количественное определение билирубина в сыворотке крови, особенно его связанной фракции, широко используется в гепатологической практике для оценки желчевыделительной функции печени и степени печеночно-клеточной недостаточности. Однако изменение билирубина в сыворотке не отражает белково-синтетическую фракцию печени. Между тем, именно при циррозах происходят значительные нарушения синтеза белка гепатоцитами. Кроме того при циррозах нередко наблюдается синдром холестаза с характерными клинико-биохимическими проявлениями . При этом повышение билирубина в сыворотке крови может быть не адекватно общему состоянию больного к другим биохимическим показателям. Кроме того, в 15% случаев цирроз может протекать без желтухи. В связ с этим, определение билирубина в сыворотке крови для оценки тяжести цирроза печени используется лишь в комплексе с другими клинико-лабораторными показателями. В настоящее время для определения тяжести цирроза печени рекомендуется комплексное определение в сыворотке крови активнести аланинаминотрансферазы, уровня альбуминов и гамма -глобулинов. Это положение было подтверждено результатами, представленными в табл. 2. Исследования показали, что активност апанийаминотрансферазы достоверно различается между сравниваемыми группами. Однако разница не столь значительна (в 1,5 раза), а степень достоверности Р 0,028.

Несмотря на резко выраженные изменения в соотношении белков сыворотки (уменьшение альбуминов и увеличение глобулинов) достоверных различий в содержании их между группами выявлено не было.

Изменения активности органоспецифических ферментов печени, уроканиназы и фруктозо-1-фосфвтальдолазы при циррозах незначительны и мало отличаются у больных обеих групп. Эти ферментные тесты более информативны для оценки тяжести вирусного гепатита.

Активность кислой ДНК-азы с большой достоверностью различается у больных обеих групп (Р 0,001). Причем эти различия в большей степени выражены, чем для аланинаминотрансферазы. Разница в 9 раз для ДНК-азы против 1,8 раза для аланинаминотрансферазы. При ухудшении состояния больного активность фермента, как правило, снижалась. Снижение активности кислой ДНК-азы предшествовало появлению клинических признаков, свидетельствующих об ухуд1иении в состоянии больного, и изменению других биохимических показателей.

Пример . Больная М. 57 лет Поступила в клинику с жалобами на слабость, головокружения, отсутствие аппетита, боли в правом подреберье, желтушность кожи и склер. При поступлнии состояние больной тяжелое. Больная интенсивно желтая, печень пальпируется неотчетливо у края реберной дуги. Билирубин общий в сыворотке

261.6мкМ/л, связанный 241,1 мкМ/л. Активность аланинаминотрансферазы

в пределах нормы, уроканиназа в сыворотке отсутствует, активность фруктозо-1-фосфальдолазы 1,2 ед. Количество альбумина снижено до 323,0 г/л гамма-глобулинов увеличено до 345 г/л, СОЭ - 43 мм/ч, в формуле крови изменений нет. Активность кислой ДНК-азы при поступлении 70 мкМ АМФ/ч.

Через неделю состояние больной не изменилось, но в самочувствии наступило некоторое улучшение: появился аппетит, улучшился сон. Количество билирубина в сыворотке оставалось высоким 300 мкМ/л общий;

260.7мкМ/л связанный. Активность аланинаминотрансферазы увеличилась незначительно - до 1,16 мкМ пир, а

изменений в содержании белков сыворотки и .активности органоспецифических ферментов не произошло. В то же время активность кислой ДНК-азы снизилась до 30 мкМ АМФ/ч.

Еще через неделю развилась резкая печеночно-клеточная недостаточность. Больная впала в коматозное состояние Активность кислой ДНК-азы на протяжении комы:

19,01.78 г,- отсутствует 22.01.12-00 - 30 мкМ/ЛЛФ/ч 22.01.16-00 - отсутствует 22.01.22-00 - отсутствует Активность аланинаминотрансферазы уроканиназы и фруктозо-1-фосфатальдолазы в пределах нормы, 23.01 в 1-05 больная погибла.

Величина активности кислой ДНК-азы в сыворотке крови больных при благоприятном и неблагоприятном прогнозе цирроза печени

Диагноз: цирроз печени смешанногс. типа, выраженно активный с лекомпенсированной печеночно-клеточноП недостаточностью, осложненной субмассивным некрозом печени.

Предлегаемый способ оценки тяжести цирроза печени позволяет многократно обследователь больного с использованием небольшого количества

крови для.анапиза (0,04 мл)и избегнуть проведения биопсии, показанной не всем больным, является нетрудоемким и быстро выполникым (в течение 5-6 ч ). Данный способ оценки тяжести цирроза является высокочувствительным, в 100% случаев дает правильные результаты.

Таблица 1

31,7+6,1

281,,9

Резко

Слабость выражена

У 7 больных У 5 больных

У 8 больных У 4 больных Увеличенау 10 больных до 4 см

Увеличена у 2 больных

У 4 больных У 2 больных

230,5+38,6 . 107,7+25,6

194,1+25,6 90,6+9,8

1,88+0,24

Глобулины 50 г/л

88+6,2 г/л 78+7,1 г/л

Гдобулины г/л

102+6,4 г/л 97+9,2 г/л

Т -Гло були{№1 110 г/л

140+12,1 г/л 128+9,9 г/л

Таблица 2

Выражена

Увеличена у всех больных до 4 см

Не увеличена

0,016

0,002

0,028

1,17+0,16

То же

Т-ГлебуЛИНЫ

145-200 г/л 324+42,8 г/л 281+35,4 г/л

Эритроциты

Гемоглобин Лейкоциты

Кислая ДНКаза (124,4+ + 3,5 мкМ ЛМФ/ч)

Формула изобретения

Способ определения направленности течения циррозов печени путем определения фермента в сыворотке крови спектрофотометрически, отличающийся тем, что, с целью ускорения анализа, определяют активность

976959

10 Продолжение табЛ. 2

4504000+ ,

4136000+ , +3991 в мм +3600 в мм

11,8+1,Зг/% 13,0+0,4г/%

-

8981+860 в мм

-. - 281+5,9

0,001

кислой ДНК-азы и при снижении ее активности относительно нормы определяют тяжелое течение заболевания.

Источники информации,

25 принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР. W 845336, кл. А 61 В 10/00, 1977 (прототип).