Способ получения водорастворимого линейного полисахарида Советский патент 1982 года по МПК C08B37/00 A61K31/717 A61P7/02 C08B15/00 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДОРАСТВОРИМОГО ЛИНЕЙНОГО ПОЛИСАХАРИДА

, 1 .

Изобретение относится к способам получения воиорастворимых линейных полисахаридов с функциональными группами кислотного характера, обладающих биологической активностью которые могут быть использованы в биолсгии и медицине.

Известен способ сульфатирования кар- ., боксиметилиеллюпозы (КМИ) хлорсульфоновой кислотой (ХСК) в среде пиридина, котортлй позволяет получать высокозамешениый (11,0 - 14;8% серы), но сильнодекструктированный сульфат карбоксиметнл целлюлозы с низкой активностью (20 - 25 ед/мг) .

Наибол1ее близким к изобретению тех- j ническнм решением по достигаемому э . факту является способ сульфатирования хнтозана комплексом триоксида серы с диметилфомамидом. Этот способ позволяет получить высокоактивные (БО - 56 ед/мг) м npenapaT f2l .

Однако в этом случае для получения сульфатирующего комплекса используется газообразное и неустойчивое при хранении

вещество - триоксид серы, что значительно усложняет технологический процесс. Недостатком способа является также большая продолжительность процесса - до 12 часов.

Цель изобретения - увеличение анти- коагулянтвой активности водорастворимьис линейнь1х полисахаридов и упрощение технологического процесса.

Поставленная цель достигается тем, то в способе получения водорастворимого линейного полисахарида, обладающего антикоагулянтной активностью, обработ кой полисахарида сульфатирующим агентом в диметилформамиде, в качестве полисахарида используют карбоксиметилцеллюлозу, в качестве сульфатирующего агента хлорсульфрновую кислоту, и обработку провойдт 0,5 - 1,О час 16,О - 29,4%-ным раствором хлорсульфоновой кислоты в диметилфЬрмамиде при соотношении раствора р{ карбоксиметилцеллюлозы 15,5-18,8:1 при 2О - . Пример 1. Переосаждение и инклюдирование КМII. Юг KMU растеэрягот в 10О мл 1О%-ного раствора едког -натра. Полученный раствор фильтруют, и натриевую соль карбоксиметилцеляюлозы (No -KMU) осаждают из раствора трехкратным объемом этилового спирта. Осадок промьюают спиртом, спирт затем вы тесняют jШMФA (5 раз по 100 мл). Инклю дированную Мз-КМИ хранят в ДМФА. Сульфатирование Na-KMll системой хек - ДМФА. 1,4 мл хек постепенно добавляют в реакционный сосуд к 10 мл ДМФА при перемешивании и охлаждении (). После этого охлаждение прекра щают, и реакционную смесь перемешивают еще в течение 15 мин. Затем добавляют 5 г инклюдированной NO -KMU со степенью 5(1 rKld-KMU в пересчете на сухое вещество). Реакцию проводят 16%-ным раствором хек в ДМФА из расчета 15,52 вес. ч. раствора на 1 вес. 4.Na-KM при достоянном перемешивании при 2(У С в течение 4О мин. По окончании реакции к раствору при охлаждении добавляют 2О мл воды, 20 мл 10%-ного раствора NaOVl , 2 мл насыщенного раствора, и продукт реакции осаждают в 300 мл метанола. Осадок промывают метанолом и эфиром {2 раза по 5О мл), растворяют в ЗО мл водыИ добавлением 10%-ного рас вора NoOH доводят рН до 9. Полученный раствор Мо - соли сульфата KMU (Na-S-KMU) диализуют п ротив дистиллированно воды до отсутствия в диализаторе ионов Си и SOj Затем раствор концентрируют упариванием при 40е в вакууме до объе ма 20 мл. добавляют 0,5 мл насыщенного раствора MqC6 , и осаждают продукт в 1ОО мл метанола. Осадок промывают ме танолом, эфиром и высушивают в вакууме над Р-,ОС до постоянной массы. Получают 1,14 г продукта, содержащего 9,5% серы, с антикоагулянтной активностью 69 ед/мг. Характеристическая вязкость раствора в 0,5М растворе ЫаС€ при 2О°еС 1 3 1,2 ал/г. Пример 2. Последовательность операций аналогична описанной в примере 1. Количества реагентов: 2,1 мл ХеК 1 г Na-KMUj 14 мл ДМФА; / Условия реакции: 21,9%-ный раствор хек в ДМФА; 17,04 вес. ч. раствора йа 1вес.ч. Nta-KMU, температура 25Ре, продолжительность сульфатирования 6О ми Для нейтрализации реакционной массы добавляют ЗО мл 1О%-ного pacTBopaNaOHПолучают 1,11 г продукта, содержащего 11,4% серы с антикоагулянт ой ак-. тивностью 73 ед/мг. V « 0,4 дл/г. Пример 3. Последовательность операций аналогична описанной в примере 1. Количество реагентов: 3,1 мл ХеК; 1 г Wa-KMU; 14 мл ДМФА. Условия реакции: 29,4%-ный раствор ХеК в ДМФА; 18,82 вес-, ч. раствора на 1 вес. ч, VIO -KMU, температура 20 С, продол г ительность сульфатирования 5О мин. Для нейтрализации реакционной массы добавляют 40 мл 1.0%-ного раствора Ма,ОН. Получают : 1,08 г продукта, содержащего 10,0% серы с антикоагулянгной активностью 74 ед/мг,V| j 0,72 дл/г. Исключительно важными характеристиками биологически активных веществ, применяемых в качестве лекарственных средств, являются их токсичность. Оценку. острой токсичности синтезированных сульфатов карбоксиметилцеллюлозы про.водят на мышах. Установлено, что полученные продукты не обладают заметным токсическим действием. С целью изучения стабильности раствор продукта (1 мг/мл) в дистиллированной воде подвергают ускоренному старению при в течение 3 месяцев. Потеря антикоагулянтной активности в этих условиях для продукта, полученноглэ согласно предлагаемому способу, составляет 30%, для гепарийа - 2О%. Таким образом, согласно предлагаемому изобретению синтезированы производные линейного полисахарида, содержащие группы кислотного характера с антикоагу- лянтной активностью 69 - 74 ед/мг, не обладающие острой токсичностью и по стабильности приближающиеся к гепарину. Предлагаемый способ является технологически более простым, чем про.тотип, так как предполагает использование устойчивых, доступных реагентов rf проведение процесса в более мягких условиях: при 20 - 25 е и небольшой продолжительности процесса (до 1 ч). Формула изобретения Способ получения водорастворимого линейного- полисахарида, обладающего ан- такоагулянтной активностью, обработкой полисахарида сульфатирующим агентом в диметилформамиде, отличаюшийс я тем, что, с целью повышения антикоагуляитной активности и упрощения прог цесса, в качестве полисахарида используют карбоксиметилцеллюлозу, в качестве

59813226

супьфатирующего агента - хлорсуяьфо новую1.КаггеГ Р.КоеиЪHUeieH Е-, XllV

кислоту, и обработку проводят 0,5 «иKer vithis bEutOBHinviung hemrnendev Ро1,0 час 1б,о-29,4%-ным растворомh6Qccba id-poE ucbwe fetsawe-eeter

хлорсупьфоновой кислоты в диметилфор- иу oliviticlier vertHHdogeM,HeEv.cHewмамиде при соотношении раствора и ACta,1943,v2.6,f 5,fl96-1i15.

боксиметилцеплкяозы 15,,8:1 при

температуре 20 - .2. AU-,Slteh.Hat1.T.M.,T1ie SU Источники информации,ito QtAOVi о CWtoeaw , J.Amer. CtierM.Scxi,

принятые во внимание при экспертизе1959,V. 81, /7,1764--1769 (прототип).