СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У НОВОРОЖДЕННЫХ Российский патент 1994 года по МПК G01N33/49 G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, именно к педиатрии, и может применяться в клинической практике для прогнозирования гнойно-воспалительных заболеваний у новорожденных.

Гнойно-воспалительные заболевания (ГВЗ) являются наиболее тяжелыми заболеваниями периода новорожденности с высокой летальностью (В. А. Таболин, М. Н. Ярцев, 1980; Р. Е. Берман, В. К. Воган, 1987; С. Я. Долецкий, Н. И. Габриэлян, Н. Б. Назарова и соавт. , 1987).

Многие авторы указывают на то, что клиническая диагностика сепсиса в настоящее время является чрезвычайно трудной из-за стертой картины заболевания. Представляется сложным проведение дифференциальной диагностики тяжело протекающих локализованных форм гнойно-воспалительных заболеваний, таких как флегмоны новорожденных, гнойно-деструктивные пневмонии и генерализованные формы гнойно-воспалительных заболеваний (Е. В. Павлова, Т. Г. Мишина, И. Н. Черноног, М. А. Капелько, 1985; С. Н. Рожкова, 1986; Ю. Е. Лосева, 1986).

Отсутствие четких критериев для своевременной и объективной диагностики гнойно-воспалительных заболеваний является причиной запоздалой адекватной интенсивной терапии.

В последнее время предложен ряд новых способов диагностики гнойно-воспалительных заболеваний, основанных на определении содержания основных белков в нейтрофилах (авт. св. N 1165366), на спонтанном и индуцированном восстановлении нитросинего тетразоля (авт. св. N 1217352), флюоресцентном определении триптофана в сыворотке крови (авт. св. N 1173995), на повышении количества лимфоцитов с наличием синтеза рибонуклеиновой кислоты в ядрышках, которые определяют в фракции крови с плотностью 1,065-1,080 г/л (авт. св. N 1060172).

Общим недостатком известных методов являются сложность выполнения, длительность и, кроме того, малоинформативность для оценки и прогнозирования течения заболевания.

Прототипом настоящего изобретения выбран способ диагностики ГВЗ, описанный Т. В. Виноградовой, Т. Г. Мишиной, К. Н. Прозоровской и соавт. в статье "Исследование уровня циркулирующих иммунных комплексов в пуповинной крови как прогностического показателя гнойно-воспалительных заболеваний в неонатальном периоде", опубликованной в журнале "Иммунология", 1984, N 6, с. 71-73.

Сущность способа, выбранного в качестве прототипа, состоит в том, что с целью доклинической диагностики локализованных форм гнойно-воспалительных заболеваний определяют уровень циркулирующих иммунных комплексов в пуповинной крови новорожденного, и при средних значениях циркулирующих иммунных комплексов 9,36 + 2,41% прогнозируют развитие локализованных форм ГВЗ.

Указанный способ обладает рядом существенных недостатков.

1. Способ не позволяет дифференцировано прогнозировать возникновение локализованных и генерализованных форм гнойно-воспалительных заболеваний.

2. Предполагает получение окончательного результата в течение двух суток, что значительно затрудняет своевременную постановку диагноза и назначение адекватной терапии.

3. Для проведения исследования требуется не менее 2,5 мл крови новорожденного, что создает существенные трудности при проведении анализа.

Указанные недостатки могут быть определены в заявляемом техническом решении.

Целью изобретения является дифференциальная доклиническая диагностика локализованных и генерализованных форм ГВЗ у новорожденных.

Поставленная цель достигается тем, что у новорожденных в сыворотке крови определяют уровень функциональной активации системы комплемента по классическому и альтернативному пути одновременно и при соотношении уровня функциональной активации системы комплемента по классическому пути (С_к) к уровню альтернативного пути активации (С_а) до 2,8 прогнозируют развитие локализованных гнойных инфекций у новорожденных, а при уровне данного соотношения выше 2,8 прогнозируют развитие генерализованных форм ГВЗ.

Подробное описание способа и примеры его конкретного осуществления.

Прогностическое исследование крови на возникновение ГВЗ осуществляют новорожденным группы риска по возникновению ГВЗ (токсикоз II половины беременности, хронические воспалительные заболевания у матери, стафилококконосительство во время беременности, перенесенные острые респираторные заболевания во время беременности, длительный безводный период и др. ).

Для проведения исследования достаточно 0,5-1,0 мл пуповинной или венозной крови новорожденного.

Способ выполняют следующим образом.

В сыворотке крови новорожденного определяют функциональную гемолитическую активацию системы комплемента по С_к и С_а одновременно из одной пробы крови по методу Л. М. Вавиловой, Л. В. Козловой, Т. В. Голосовой ("Лабораторное дело", 1984, N 12, с. 743-746).

Для проведения реакции используются стандартные взвеси сенсибилизированных эритроцитов барана и эритроцитов кролика (И. Н. Журавкин, В. А. Козлов, 1983).

Для отмывания эритроцитов барана используется вероналово-мединаловый буфер (VBS) для отмывания эритроцитов кролика - VBS-Mg-ЭВТА (этиленгликольтетрауксусной кислоты).

Определение функциональной гемолитической активации системы комплемента проводят в полиэтиленовых плашках с лунками путем титрования. Плашки протирают предварительно спиртом, а затем соответствующим буфером.

Определение функциональной гемолитической активации системы комплемента по классическому пути.

В каждую лунку вносят по 25 мкл буфера VBS⁺⁺.

В 1 лунку вносят 25 мкл сыворотки больного и титруют по 25 мкл в 8 лунок.

Добавляют по 20 мкл сенсибилизированных эритроцитов барана в каждую лунку.

Добавляют по 5 мкл соответствующего буфера в каждую лунку.

После встряхивания плашка накрывается крышкой и ставится в термостат на 1 ч при 37^оС.

Определение функциональной гемолитической активации системы комплемента по альтернативному пути.

В каждую лунку вносят по 22 мкл VBS-Mg-ЭGТА
В 1 лунку вносят 22 мкл сыворотки больного и титруют по 22 мкл в 8 лунок.

Добавляют по 20 мкл эритроцитов кролика в каждую лунку.

Добавляют по 8 мкл соответствующего буфера в каждую лунку.

После встряхивания плашка накрывается крышкой и ставится в термостат на 45 мин при 37^оС.

Результаты оценивают по наступившему гемолизу (последняя сетка) в условных единицах от 1 до 8.

Чувствительность метода позволяет улавливать разницу в 0,5 единиц.

На постановку реакции затрачивают до 1 ч времени на 12 проб. Таким образом, способ позволяет провести прогностическое обследование одновременно 12 больным.

Способ подтверждается следующими примерами.

П р и м е р 1. Ребенок Р-ва (история родов N 634/4905), девочка, родилась 29.07.86 в роддоме РНИИАП от 1 беременности, во II половине которой мать перенесла острую респираторно-вирусную инфекцию. Роды в срок, масса при рождении 3300. Оценка по шкале Апгар 7 баллов. К груди приложена на 1 сутки. Течение раннего неонатального периода без особенностей.

Учитывая анамнез матери (ОРВИ - во II половине беременности), ребенок был отнесен в группу "угрожаемых" по развитию гнойно-септической инфекции. В связи с этим в пуповинной крови при рождении определили функциональную гемолитическую активацию системы комплемента по классическом (С_к) и альтернативном пути (С_а) и соотношение С_к/С_а. Соотношение С_к/С_а составило 2,0, что позволило предположить возможность возникновения локализованной формы гнойно-воспалительного заболевания. На 6 сутки ребенок выписан из роддома в удовлетворительном состоянии.

Катамнестическое наблюдение за ребенком подтвердило правильность прогноза: в возрасте 8 дней ребенок заболел гнойным конъюнктивитом.

Таким образом у ребенка развилась локализованная форма ГВЗ.

П р и м е р 2. Ребенок Г-ий, (история родов N 78/660) родилась 3.02.87 от 1 беременности, протекавшей с анемией.

У матери ребенка во время беременности выделялся стафилококк. Роды в срок, течение родов характеризовалось длительным безводным периодом. Отмечалось обвитие пуповины вокруг шеи.

Масса при рождении 4300. Оценка по шкале Апгар 8 баллов.

Ранний неонатальный период протекал без особенностей.

Учитывая отягощенный акушерский анамнез (длительный безводный период, стафилококконосительство во время беременности), ребенок был отнесен в группу "угрожаемых" по развитию гнойно-септической инфекции.

В связи с этим ребенку в пуповинной крови при рождении определили функциональную гемолитическую активацию системы комплемента по классическому (С_к) и альтернативному (С_а) пути, а также соотношение С_к/С_а, которое составило 2,8. Это позволило предположить возможность возникновения у ребенка локализованной формы гнойно-воспалительного заболевания. Катамнестическое наблюдение за ребенком подтвердило прогноз: в возрасте 9 дней у ребенка возникла пиодермия, т. е. локализованная форма ГВЗ.

П р и м е р 3. Ребенок П-кий (история родов N 199/5912) поступил в отделение реанимации 20.08.87 в возрасте 1 суток с диагнозом: внутриутробная пневмония, внутриутробная гипотрофия.

Ребенок от 1 беременности, протекавшей с токсикозом II половины беременности. Мать ребенка во время беременности 3 раза переносила грипп. Роды запоздалые, при сроке 41-42 недели, длительный безводный период. Масса при рождении 3300. Оценка по шкале Апгар 7/8 баллов.

У ребенка с первых суток отмечались срыгивания после кормления молоком, в котором обнаруживались прожилки крови, повысилась температура до 38,5^оС, отмечалась вялость, адинамия.

Данные акушерского анамнеза (токсикоз II половины беременности, грипп во время беременности, длительный безводный период), сочетавшиеся с клиническими симптомами заболевания позволили отнести ребенка в группу "угрожаемых" по развитию сепсиса. В связи с этим ребенку в крови из вены 21.08.87 определили соотношение уровней функциональной активации системы комплемента по С_к и С_а, которое составило 3,0. На этом основании сделан прогноз возможности развития у ребенка генерализованной формы гнойно-воспалительного заболевания (сепсиса).

Предварительный диагноз: внутриутробная пневмония, внутриутробная гипотрофия.

Через три дня состояние ребенка ухудшилось, отмечалась вялость, адинамия, периоральный и акроцианоз, одышка с участием вспомогательной мускулатуры до 80 в 1 мин. В легких крепитирующие хрипы на высоте вдоха.

Тоны сердца приглушены, систолический шум на верхушке. Живот вздут, мягкий. Печень у края реберной дуги.

Лабораторное обследование: в общем анализе крови - анемия, лейкоцитоз (33,0 х 109), нейтрофилез (59).

Диагноз подтвержден бактериологически: в посеве крови на стерильность выделена E. coli.

24.07.87 ребенку был поставлен основной диагноз:
Неонатальный сепсис, септицемия, двусторонняя бронхопневмония, острый период, тяжелое течение.

Таким образом, наблюдение за ребенком в стационаре подтвердило прогноз: у ребенка на третьи сутки после поступления в стационар развился сепсис, т. е. генерализованная форма гнойно-септической инфекции.

П р и м е р 4. Ребенок В-р (история болезни N 6099), поступил в отделение реанимации 1.09.87 в возрасте 9 дней с диагнозом: диабетическая фетопатия, асфиксия.

Ребенок от 1 беременности, протекавшей с токсикозом I и II половины беременности, хронической гипоксией плода, родов в срок с ранним излитием околоплодных вод, зеленым окрашиванием околоплодных вод.

Масса при рождении 2900. Оценка по шкале Апгар 3 балла. Состояние при поступлении тяжелое. Кожные покровы иктеричные. Мышечный тонус снижен. В легких аускультативно ослабленное дыхание. Тоны сердца ритмичные, глухие. Из глаз гнойное отделяемое.

На основании данных акушерского анамнеза (токсикоз I половины беременности, дородовое излитие околоплодных вод, зеленое окрашивание околоплодных вод) была предположена возможность развития у ребенка гнойно-воспалительного заболевания. Это послужило основанием для определения в крови из вены у ребенка 2.09.87 соотношения уровней функциональной активации системы комплемента по С_к и С_а, которое составило 15, и был сделан прогноз о возможности развития у ребенка генерализованной формы гнойно-воспалительного заболевания (сепсиса).

Предварительный диагноз: Диабетическая фетопатия, асфиксия. 6.07.87 состояние ребенка ухудшилось, появилась клиническая симптоматика генерализации инфекционного процесса: вялость, адинамия, отрицательная динамика массы, срыгивания, повысилась температура до 37,8^оС. Кожные покровы бледные, с сероватым оттенком, тургор тканей снижен. В легких ослабленное дыхание, тоны сердца глухие, систолический шум на верхушке. Живот мягкий, слегка вздут. Печень выступает из-под края реберной дуги на 4 см.

Лабораторное обследование: в общем анализе крови - анемия, нейтрофилез со сдвигом в формуле крови до палочкоядерных (22).

Диагноз подтвержден бактериологически: в посеве крови на стерильность выделена Klebsiella, при исследовании отделяемого из пупочной ранки обнаружен стафилококк.

6.07.87 ребенку был поставлен основной диагноз:
Неонатальный сепсис, пневмония, менингоэнцефалит, острый период, тяжелое течение.

В течении заболевания отмечалась отрицательная динамика и 11.09.87 ребенок умер.

Таким образом, наблюдение за ребенком в стационаре подтвердило прогноз: у ребенка на четвертые сутки после поступления в стационар развился сепсис, т. е. генерализованная форма гнойно-септической инфекции.

Таким образом, во всех примерах были обследованы новорожденные, родившиеся от матерей с отягощенным акушерским анамнезом и отнесенные в группу "угрожаемых" по развитию гнойно-воспалительных заболеваний.

Соотношение С_к/С_а позволило определенно прогнозировать развитие гнойно-воспалительных заболеваний и дифференцировать форму (локализованную или генерализованную), в которой может произойти манифестация патологического процесса.

Учитывая, что манифестация патологического процесса в результате проникновения в организм чужеродных агентов зависит от иммунологической резистентности (А. В. Смольянников, Д. В. Саркисов, 1982; А. Ю. Христи, Э. П. Антошина, 1981; Н. П. Шабалов, Н. Н. Шабалова, 1981), нами изучены закономерности изменений некоторых показателей иммунной системы. Установлено, что форма, в которой произойдет манифестация патологического процесса (локализованная или генерализованная) зависит от степени изменения реактивности новорожденного (В. П. Анисимова, 1983).

Комплемент, как один из основных эффекторов иммунной системы, осуществляет сложные координирующие взаимодействия отдельных ее частей. Большая часть проводимых исследований касается только классического пути активации комплемента, хотя важную роль в неонатальном периоде при инфекционных заболеваниях играет и альтернативный путь (Е. С. Леонова, Г. В. Рябинская, Д. В. Стефани, 1987).

Сравнение базового способа, избранного в качестве прототипа с заявляемым, показывает, что заявляемый способ обладает рядом преимуществ:
1. Позволяет на доклинической стадии заболевания прогнозировать возможности возникновения гнойно-воспалительных заболеваний, а также дифференцировать локализованные и генерализованные формы септической инфекции.

2. Значительно сокращает время проведения и оценки исследования: с двух дней до двух часов и, таким образом, позволяет своевременно назначать адекватную терапию.

3. Является микрометодом и позволяет проводить исследования в тех случаях, когда базовый способ не может быть применим из-за малого объема исследуемой крови новорожденного.

4. Способ прост в выполнении, может осуществляться врачом-лаборантом и широко использоваться во всех педиатрических отделениях.

Заявляемый способ апробирован в однородных условиях детских отделений родильных домов и отделений патологии новорожденных.

Акт клинических испытаний прилагается к описанию. (56) Ж. Иммунология. 1984, N 6, с. 71-73.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования гнойно-воспалительных заболеваний у новорожденных. Целью изобретения является повышение точности способа. Цель достигается за счет определения уровня функциональной активации системы комплемента по классическому и альтернативному пути активации комплемента, и прогнозирования локализованной или генерализованной формы по определенным соотношениям этих показателей. Способ является более точным по сравнению с прототипом.

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У НОВОРОЖДЕННЫХ, включающий иммунологический анализ пуповинной крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, определяют уровень функциональной активации системы комплемента по классическому типу и альтернативного пути активации комплемента и при соотношении первого показателя к второму 0,5 - 2,8 прогнозируют развитие локализованной формы, а при соотношении 2,8 - 16,0 - генерализованную форму гнойно-воспалительного заболевания.